Name: Manipulação e Análise de Processos Dependentes do Ciclo Celular em Leveduras de Brotamento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Aprenda a sincronizar ciclos celulares em Saccharomyces cerevisiae usando arresto por alfa-fator para estudar segregação cromossômica e dinâmica de proteínas durante a mitose. Este método permite observar mudanças de localização proteica em tempo real.

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<table><tbody><tr><td>?-fator</td><td>Instalação de Síntese Núcleo da Universidade de Utah</td><td></td><td>Sequência: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>Válvulas Eppendorf de 1,5 mL</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>Mistura 10mM dNTP</td><td>Termo Científica</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>Tubos cônicos de 50 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5x Tampão de reação HF Phusion</td><td>New England BioLabs</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético, glacial</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>Sal de hemissulfato de adenina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>Ágar, granulado</td><td>Apex Chemicals and Reagents</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>agarose</td><td>Produtos de Biopesquisa Apex</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>Autoclave Amsco Century Steam Sterilizador</td><td>Steris</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>Água DI autoclavada</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Auxina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Cat#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>Cargille Laser Liquid</td><td>Laboratórios Cargille</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (40,6-Diamidino-2-Fenilindol, Dicricloreto)</td><td>Sondas Moleculares</td><td>Cat#D1306</td><td></td></tr><tr><td>Ácido desoxirribonucleico sal de sódio proveniente dos testículos do salmão</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Fisher Chemical</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>Tetraacetato de etilendiamina dissódica</td><td>Fisher Chemical</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Termo Científica</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 vs 2.14.0/1.54f</td><td>ImageJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>Misturador de Vórtice de Velocidade Fixa</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio fluorescente DV Ultra</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>Serial #: NV01063. Não mais suportado</td></tr><tr><td>Formaldeído</td><td>Fisher Chemical</td><td>Cat#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>Aparelho de gel</td><td>Termo Científica</td><td>Owl EasyCast B1</td><td></td></tr><tr><td>Mistura de Escada de DNA GeneRuler</td><td>Fermentas</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>Contas de vidro</td><td>Fisher Scientific</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>Slides de vidro</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>Agitador de Plataforma Innova 2300</td><td>New brunswick</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratório para tubos de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga de laboratório para tubos de 50 mL</td><td>Eppendorf</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>Diidrato de acetato de lítio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>Mestre ciclista Nexus X2</td><td>eppendorf</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas p2, p20, p200 e p1000 e pontas correspondentes</td><td>Rainin</td><td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>Vidro de Cobertura de Microscópio</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>Nocodazol</td><td>Calbioquímica</td><td>Cat#487928; CAS: 31430-18-9; Lote#B35705</td><td></td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>GANCHO</td><td>Pesquisa Hampton</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>Peptona granulada&nbsp;</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>Polimerase de DNA HF Phusion</td><td>New England BioLabs</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-X</td><td>Rainin</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio, dibásico</td><td>Termo Científica</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato de potássio, monobásico</td><td>Termo Científica</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>Fonte de energia</td><td>Bio-Rad</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>Comece a Adquirir Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>Obtenha com DV Ultra</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Rotador de tubo</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Banho-maria</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>Água, Ultra Pura</td><td>Produtos de Biopesquisa Apex</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de levedura granulado</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

manipulação e análise de processos dependentes do ciclo celular em leveduras de brotamento

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Manipulação e Análise de Processos Dependentes do Ciclo Celular em Leveduras de Brotamento

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Deleção do gene e superexpressão da proteína são métodos comuns para o estudo funções das proteínas. Neste artigo, descrevemos um protocolo para análise do desenvolvimento do fenótipo como uma função da concentração de proteína na população e de uma única célula em...

Análise do desenvolvimento de um fenótipo morfológico como uma função da concentração de proteínas em levedura de brotamento

Determinar a posição do ciclo celular de uma população de células, ou a compreensão de como os sinais de afetar a proliferação, pode ser facilmente medido por citometria de fluxo usando esse protocolo. Relatamos uma abordagem simples experimental da coloração células e quantificar a sua posição no ciclo celular.

Análise da posição do ciclo celular em células de mamíferos

Nós apresentamos um protocolo simples de se obter filmes de microscopia de fluorescência de crescimento de células de levedura, e um pacote de software baseado em GUI para extrair dados de séries temporais de uma única célula. A análise inclui linhagem automatizada e divisão atribuição tempo integrado com inspeção visual e curadoria manual de dados controladas.

Aquisição de fluorescência Filmes Time-lapse da levedura de brotamento e análise da dinâmica de células simples utilização de enxertos

A levedura de fissão, Schizosaccharomyces pombe é um excelente sistema modelo para estudar a citocinese, a fase final na divisão celular. Aqui nós descrevemos uma abordagem microscopia para analisar diferentes eventos cytokinetic em células de levedura de fissão ao vivo.

Análise espacial e temporal da Cytokinetic Eventos na levedura de fissão

Budding levedura é um modelo vantajoso para o estudo da dinâmica dos microtúbulos in vivo, devido às suas poderosas da genética e a simplicidade do seu citoesqueleto de microtúbulos. O protocolo a seguir descreve como transformar e cultura de células de levedura, adquirir imagens de microscopia confocal, e quantitativamente analisar a dinâmica dos microtúbulos em células de levedura viva.

Imagens de alta resolução e Análise de individuais Astral microtúbulos Dynamics em brotamento Yeast

O Inerente Dynamics Visualizer é um pacote de visualização interativo que se conecta a uma ferramenta de inferência de rede de regulação genética para uma geração aprimorada e simplificada de modelos de rede funcionais. O visualizador pode ser usado para tomar decisões mais informadas para a parametrização da ferramenta de inferência, aumentando assim a confiança nos modelos resultantes.

Visualizador de dinâmica inerente, um aplicativo interativo para avaliar e visualizar saídas de um pipeline de inferência de rede de regulação genética

A microscopia de lapso de tempo é uma ferramenta valiosa para estudar a meiose em leveduras em brotamento. Este protocolo descreve um método que combina sincronização do ciclo celular, microscopia de lapso de tempo e depleção condicional de uma proteína-alvo para demonstrar como estudar a função de uma proteína específica durante a segregação cromossômica meiótica.

Uso de microscopia Time-Lapse e Depleção Nuclear Específica de Estágio de Proteínas para Estudo da Meiose em S. cerevisiae

Um desafio de analisar experimentos sincronizados de séries temporais é que os experimentos geralmente diferem na duração da recuperação da sincronia e no período do ciclo celular. Assim, as medidas de diferentes experimentos não podem ser analisadas de forma agregada ou facilmente comparadas. Aqui, descrevemos um método para alinhar experimentos para permitir comparações específicas de fase.

Alinhamento de dados sincronizados de séries temporais usando o modelo de caracterização de perda de sincronia do ciclo celular para comparações entre experimentos

Neste artigo apresentamos um protocolo geral para medir o tempo de vida replicativa das células-mãe do fermento.

Medição Span vida replicativa na levedura de brotamento

Quantitativas de células vivas de Análise de microscopia de fluorescência de levedura

Aprenda a sincronizar ciclos celulares em Saccharomyces cerevisiae usando arresto por alfa-fator para estudar segregação cromossômica e dinâmica de proteínas durante a mitose. Este método permite observar mudanças de localização proteica em tempo real.

Manipulação e Análise de Processos Dependentes do Ciclo Celular em Leveduras de Brotamento

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