Dissecção de tecidos craniofaciais de peixe-zebra após coloração com azul de Alcian

Estamos explorando os mecanismos pelos quais o palato do peixe-zebra cresce ao longo do tempo usando amostras fixas, bem como imagens de lapso de tempo de embriões com alta resolução espaço-temporal usando microscopia de folha de luz. Nosso protocolo é simples e fácil de seguir. Ele estabelece etapas detalhadas para dissecar e separar as cartilagens craniofaciais de uma larva de peixe-zebra de cinco dias.

Este protocolo permitiu uma caracterização cuidadosa da forma do palato em escalas teciduais e celulares, permitindo-nos avaliar o efeito dos antígenos de comentário na morfogênese do palato. Para começar, obtenha 20 a 25 larvas de peixe-zebra anestesiadas e remova o anestésico assim que as larvas pararem de se mover. Adicione 1,5 mililitros de aldeído paraforme a 4% ao tubo e coloque a amostra em um balancim ajustado para 60 rotações por minuto em temperatura ambiente por duas horas.