Name: Ensaio de efluxo de fosfolipídios específico para lipoproteína de alta densidade (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 8 s
Description: Aprenda a medir a funcionalidade da HDL no plasma humano usando um ensaio de efluxo de fosfolipídios fluorescentes. Este método simples e rápido ajuda a prever o risco de doença cardiovascular em pesquisa e diagnóstico clínico.

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<li>Ossoli, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipoprotein+X+causes+renal+disease+in+LCAT+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Lipoprotein X causes renal disease in LCAT deficiency.</a> PLoS One. 11 (2), e0150083(2016).</li>
<li>Martínez-Beamonte, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+extra+virgin+olive+oil+high+in+bioactive+compounds+on+atherosclerosis+in+apoe-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Nutr+Food+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of extra virgin olive oil high in bioactive compounds on atherosclerosis in apoe-deficient mice.</a> Mol Nutr Food Res. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina</td><td>Avanti Research</td><td>850345</td><td>Solution de clorofórmio 14:0 PC (DMPC)</td></tr><tr><td>1,2-dioleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina-N-(lissamina rodamina B sulfonil) (sal de amônio)</td><td>Avanti Research</td><td>810150-C</td><td>Solução de Clorofórmio LRh-PE</td></tr><tr><td>Filme adesivo</td><td>Biossistemas Aplicados&nbsp;</td><td>4306311</td><td>MicroAmp Transparente Filme Adesivo &nbsp;</td></tr><tr><td>Fita de Teflon de Alta Densidade Bay Corporation 1/2 polegada x 520</td><td>Soluções de Testes Médicos</td><td>86732</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de vidro borosilicato de 20 mm e agudos; 150 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-961-33</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Termo Científica</td><td>Série Sorvall X Pro</td><td></td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>366927</td><td>adequado para HPLC, &ge; 99.8%</td></tr><tr><td>Pó de Colesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8667</td><td>3&beta;-Hidroxi-5-colesteno, 5-Colesteno-3&beta;-ol</td></tr><tr><td>Papel de pesagem de vidreina</td><td>Cole-Palmer</td><td>&nbsp; UX-01338-02</td><td>Para manuseio do LC-CSH</td></tr><tr><td>Placa de incubação</td><td>USA Scientific & nbsp;</td><td>1402-9700</td><td>TempPlate 96 Poços Semi Saia 0,2mL PCR Placas &nbsp;</td></tr><tr><td>Agente Remotório de Lípidos (LRA)</td><td>Supelco</td><td>13358-U</td><td>LC-CSH</td></tr><tr><td>Placa de medição</td><td>Greiner bio-one&nbsp;</td><td>655076</td><td>Microplaca, PS, 96 poços, F-BOTTOM (POÇO DA CHAMINÉ), PRETA; FLUOTRAC, ENCADERNAÇÃO MÉDICA</td></tr><tr><td>Microsoft Excel</td><td>Microsoft 365 MSO&nbsp;</td><td>Versão 2507</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de Pipeta MultiFlex</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-550-206</td><td>Para aspiração de sobrenadante durante lavagens LC-CSH</td></tr><tr><td>Leitor de placas multirótulo</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>1420-050</td><td>Contador Multirótulo Victor3 Wallac1420</td></tr><tr><td>Soro fisiológico normal</td><td>Biológico de Qualidade &nbsp;</td><td>114-055-101</td><td>Para múltiplos usos &nbsp;</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Cole-Palmer</td><td>HS23452</td><td>Para cobrir o tampo do tubo de vidro durante o vórtice</td></tr><tr><td>Frascos Erlenmeyer policabonados</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-041-8</td><td>Para solução de 10% do Triton-X</td></tr><tr><td>Plasma humano acumulado (derivado do sangue) Li Heparina)</td><td>Innovative Research Inc</td><td>IPLAWBLIH</td><td>Plasma de referência, controle positivo (PC) e nbsp;</td></tr><tr><td>Surfact-Amps x 100&nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>28314</td><td>10% Triton X-100, diluído 10x com água destilada</td></tr><tr><td>Termomisturador</td><td>Eppendorf</td><td>5382000023</td><td>Termomisturador C com termobloco de 96 poços</td></tr><tr><td>Smartblock termomisturador</td><td>Eppendorf</td><td>5306000006</td><td>SmartBlock de 96 poços</td></tr><tr><td>Pipetas de transferência (3 mL, Falcon)</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9CM</td><td>Para remover bolhas do topo do poço</td></tr><tr><td>Misturador de vórtice</td><td>Daigger</td><td>3030A</td><td>Suporte de afixo para tubo de vidro no topo</td></tr></tbody></table>

ensaio de efluxo de fosfolipídios específico para lipoproteína de alta densidade

High-Density Lipoprotein-Specific Phospholipid Efflux Assay

Ensaio de efluxo de fosfolipídios específico para lipoproteína de alta densidade

Plasma levels of high-density lipoprotein (HDL)-cholesterol (HDL-C) is currently a key metric for the clinical assessment of cardiovascular disease (CVD) ...

high-density-lipoprotein-specific-phospholipid-efflux-assay

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

O ensaio de colesterol é concebido para quantificar a taxa de efluxo de colesterol a partir de células cultivadas e da capacidade de plasma aceitadores para aceitar o colesterol libertado a partir de células. O ensaio consiste de marcação das células com o equilíbrio do colesterol, de colesterol entre pools intracelulares e libertação de colesterol para um aceitador extracelular.

Ensaio de efluxo do colesterol

Os proteolipossomas são usados para estudar canais purificados e transportadores reconstituídos em um ambiente bioquímico bem definido. Um procedimento experimental para medir o efluxo mediado por essas proteínas é ilustrado. As etapas para preparar proteolipossomas, realizar os registros e analisar os dados para determinar quantitativamente as propriedades funcionais da proteína reconstituída são descritas.

A proteolipossoma-Based Efluxo Ensaio para determinar as propriedades de uma única molécula de Cl<sup&gt; -</sup&gt; Canais e Transportadores

Este protocolo descreve o isolamento e quantificação de pequenos RNAs de lipoproteína de alta densidade.

O isolamento de lipoproteínas de alta densidade para não codificante pequeno ARN Quantificação

Muitas (fosfo)lipases previstas são mal caracterizadas em relação às suas especificidades de substrato e funções fisiológicas. Aqui fornecemos um protocolo para otimizar as atividades enzimáticas, procurar substratos naturais e propor funções fisiológicas para essas enzimas.

Definindo substrato Especificidades para a lipase e fosfolipase candidatos

Descrevemos um ensaio baseado em fluorescência para medir o embaralhamento de fosfolipídios em grandes lipossomas unilamelares reconstituídos com opsina.

Um ensaio baseado em fluorescência de Fosfolípido scramblase Atividade

Descrevemos aqui um ensaio livre celular bioquímico fluorométrica para determinação da peroxidação lipídica-HDL. Este ensaio rápido e reprodutível pode ser usado para determinar a função do HDL em estudos de grande escala e pode contribuir para nossa compreensão da função do HDL em doenças humanas.

Bioquímico celular-free fluorométrica ensaio enzimático para medição do elevado-throughput de peroxidação lipídica em lipoproteína de alta densidade

Este protocolo fornece uma abordagem eficiente para medir a absorção de colesterol LDL com taxas de fluxo em tempo real usando uma célula viva, sistema em vários tipos de células de imagem. Esta técnica fornece uma plataforma para a atividade farmacológica de compostos afetando o influxo de LDL enquanto monitora para morfologia celular e citotoxicidade, portanto, potencial de tela.

Ensaio de absorção de LDL colesterol usando célula viva análise com célula de imagem monitoramento de integridade

Medição da capacidade de efluxo de colesterol in vitro de soro ou plasma em modelos de celular de macrófagos é uma ferramenta promissora como um biomarcador para a aterosclerose. No presente estudo, podemos otimizar e padronizar um método de efluxo de colesterol NBD fluorescente e desenvolver uma análise do elevado-throughput usando placas de 96 poços.

Ensaio de efluxo de colesterol Nitrobenzoxadiazole-etiquetadas do elevado-throughput

Aqui, descrevemos protocolos usando sensores lipídicos fluorescentes e lipossomos para determinar se uma proteína extrai e transporta fosfatidylserina ou fosfattidylinositol 4-fosfato in vitro.

Medidas baseadas em fluorescência de fosfatidaserina/fosfattidylinositol 4-fosfato troca entre membranas

Neste artigo, demonstramos um protocolo otimizado baseado em fluorescência BODIPY 493/503 para caracterização de gotículas lipídicas em tecido hepático. Através do uso de projeções ortogonais e reconstruções 3D, o fluoróforo permite o sucesso da discriminação entre esteatose microvesicular e macrovesicular e pode representar uma abordagem complementar aos protocolos histológicos clássicos para avaliação da esteatose hepática.

Análise de Gotículas Lipídicas Coradas por Fluorescência com Reconstrução 3D para Avaliação da Esteatose Hepática

Apresentamos um método econômico para avaliar a permeabilidade da membrana lipossomal com sensibilidade e resolução superiores às técnicas convencionais. Usando uma nova reação de substituição de ligante encapsulada, esta técnica detecta alterações induzidas pela fosfolipase A2 nas membranas do modelo. Facilmente integrada com análises padrão, essa abordagem acessível melhora a resolução para estudar a biofísica da membrana e as interações de toxinas.

Um ensaio de permeabilidade de membrana lipossomal para investigar os efeitos dos grupos fosfato de fosfatidilinositol na ação membranotrópica do veneno PLA2

Aprenda a medir a funcionalidade da HDL no plasma humano usando um ensaio de efluxo de fosfolipídios fluorescentes. Este método simples e rápido ajuda a prever o risco de doença cardiovascular em pesquisa e diagnóstico clínico.

Ensaio de efluxo de fosfolipídios específico para lipoproteína de alta densidade

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