Name: Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Aprenda protocolos de preparação de amostras para metabolômica de célula única por espectrometria de massa. O método utiliza lavagem com formiato de amônio e têmpera em nitrogênio líquido para preservar perfis metabólicos celulares.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>-80 &deg; C freezer</td><td>Eppendorf New Brunswick</td><td>U700</td><td>Preparação da amostra </td></tr><tr><td>Acetontrila</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>240744</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Formato de amônio </td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>401152500</td><td>Preparação da amostra </td></tr><tr><td>Lamínula 18 mm</td><td>Micro vidro de cobertura VMR</td><td>48380046</td><td>Cultura de células </td></tr><tr><td>Estereomicroscópio digital</td><td>Shenzhen D& F Co.</td><td>Superolhos T004</td><td>Análise</td></tr><tr><td>Tubo de quartzo de furo duplo, 1,120 "x0,005" x12 "</td><td>Friedrich & Dimmock, Inc.</td><td>MBT-005-020-2Q</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>Resina epóxi</td><td>Devcon</td><td>Nº da peça 20945</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>Ácido fórmico</td><td>Ciência de Ward </td><td>470301-120 500mL</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Capilar de sílica fundida, ID: 40 &micro; m, OD: 100 &micro; m</td><td>Tecnologias Polymicro</td><td>TSP040105</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>Capilar de sílica fundida, ID: 50 &micro; m, OD: 150 &micro; m</td><td>Tecnologias Polymicro</td><td>1068150015</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Lamínulas de vidro, 18mm</td><td>VWR </td><td>48380046</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Soro sintético HyClone (FBS)</td><td>Hyclone</td><td>SH3006603</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Incubadora </td><td>HeraCell (Heraeus)</td><td></td><td>Cultura de células </td></tr><tr><td>Extrator a laser</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td>Modelo P-2000</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>Lâmpada UV LED</td><td>Foshan Liang Ya Equipamento Odontológico</td><td>LY-C240</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>5A de McCoy </td><td>Gibco </td><td>2537128</td><td>Cultura de células </td></tr><tr><td>Microunião</td><td>IDEX Saúde & Ciência LLC</td><td>M-539</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Interface FAIMS pro modificada </td><td>Thermo Fisher </td><td>98100-20046</td><td>Análise </td></tr><tr><td>Kit de detecção de micoplasma MycoAlert PLUS</td><td>Lonza</td><td>LT07-703</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Placa óptica </td><td>Thorlabs Inc., Newton</td><td></td><td>Análise </td></tr><tr><td>Água de grau Optima LC/MS (Fisher Chemical, EUA)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>W6500</td><td>Preparação da amostra </td></tr><tr><td>Espectrômetro de massa Orbitrap Exploris 240 </td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>VWR</td><td>0780-50L</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Concentrador SpeedVac (Savant)</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td> SPD111 V</td><td>Preparação da amostra </td></tr><tr><td>Bomba de seringa (SKE10)</td><td>Chemyx Inc.</td><td>80561</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Seringa, 250 &micro; L</td><td>Hamilton</td><td>1725LTN250UL</td><td>Configuração do experimento SCMS</td></tr><tr><td>Contador de células automatizado TC20</td><td>Laboratórios Bio-Rad </td><td>1450102EDU</td><td>Contagem de células</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecidos, 100 mm</td><td>Fisher científico </td><td>FB012924</td><td>Cultura de células </td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>25200-072</td><td>Cultura de células</td></tr><tr><td>Microscópio digital USB ("Scorpio" 500 Zoom)</td><td>Chinavasion, Atacado Ltd.</td><td></td><td>Análise </td></tr><tr><td>Resina de cura UV</td><td>Odontológico Prime</td><td>Item nº 006.030</td><td>Fabricação de sonda única</td></tr><tr><td>Software Xcalibur</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Estágio XYZ (CONEX- MFACC)</td><td>Corporação Newport.</td><td></td><td>Análise </td></tr></tbody></table>

preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas

Sample Preparation for Single Cell Mass Spectrometry Metabolomics Studies: Combined Cell Washing, Quenching, Drying, and Storage

Este relatório descreve uma metodologia que integra lavagem celular, têmpera celular rápida, secagem a vácuo e armazenamento a -80 °C (Figura 1). Especificamente, essa abordagem é projetada para preservar o estado metabolômico das células antes da análise de SCMS. A eficácia deste protocolo foi testada preparando células sob duas condições diferentes: células recém-temperadas e secas (Grupo 1, servindo como controle) e células temperadas, secas e armazenadas a -80 ° C (Grupo 2). Cada grupo foi analisado usando o método SCMS de sonda única nos modos de íons positivos e negativos. A Análise de Componentes Principais (PCA) e a visualização do mapa de calor foram usadas para avaliar as diferenças nos perfis metabolômicos entre os grupos.
Os resultados da PCA no modo de íons positivos (Figura 2A) revelaram que os Grupos 1 e 2 tinham perfis de metabólitos gerais semelhantes. Os perfis quase idênticos do Grupo 1 e do Grupo 2 demonstram que o armazenamento de -80 ° C por 48 h não altera significativamente o metaboloma se as células forem devidamente extintas antes da secagem. No modo de íons negativos (Figura 2B), um padrão comparável é observado, embora o Grupo 2 pareça um pouco mais distinto - potencialmente devido a diferenças de ionização entre classes específicas de metabólitos, por exemplo, as fosfatidilcolinas são melhor detectadas no modo positivo, enquanto os ácidos graxos ionizam mais eficientemente no modo negativo60. Apesar dessa variação, o agrupamento consistente entre os Grupos 1 e 2 em ambos os modos apóia a conclusão de que o protocolo integrado de têmpera-secagem-armazenamento mantém a integridade metabólica.
A análise do mapa de calor validou ainda mais os achados do PCA, descrevendo abundâncias relativas dos 100 principais metabólitos em dois grupos. Conforme mostrado na Figura 3, os 100 principais metabólitos exibem padrões de abundância altamente consistentes entre o Grupo 1 e o Grupo 2 em ambos os modos iônicos. Não são observadas grandes mudanças ou agrupamento específico do grupo, embora pequenas variações em alguns grupos de metabólitos possam refletir diferenças na eficiência da ionização ou na estabilidade do metabólito. Esses resultados demonstram coletivamente que o fluxo de trabalho de têmpera-secagem-armazenamento preserva os perfis metabolômicos celulares com alta fidelidade, tornando-o adequado para aplicações SCMS ambientais.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig1.jpg"> 
Figura 1: Fluxo de trabalho geral para análise de espectrometria de massa de célula única (SCMS) investigando como a têmpera de LN2 e o armazenamento de 48 h a -80 ° C afetam os perfis de metabólitos em células individuais. (A) As células foram semeadas, incubadas e enxaguadas usando solução de formato de amônio (AF). (B) Dois grupos de células foram preparados - Grupo 1: as células foram lavadas, temperadas e liofilizadas para experimentos imediatos de SCMS sem armazenamento; Grupo 2: as células foram lavadas, temperadas, liofilizadas e armazenadas a -80 °C. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig2.jpg"> 
Figura 2: Análise de Componentes Principais (PCA) de dados SCMS de células HCT-116 em grupos experimentais em (A) modo de íon positivo e (B) modo de íon negativo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68995/68995fig3.jpg"> 
Figura 3: Mapas de calor mostrando os níveis relativos dos 100 principais metabólitos detectados em células HCT-116 únicas preparadas sob várias condições, apresentadas para (A) modo de íon positivo e (B) modo de íon negativo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68995/68995fig3large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas

Single-cell mass spectrometry (SCMS) has become an indispensable tool for studying cellular metabolism. Owing to advancements in modern mass spectrometry ...

sample-preparation-for-single-cell-mass-spectrometry-metabolomics

Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Este vídeo descreve uma técnica de preparação de amostras de células de câncer de mama para perfil de metabólitos. As células do câncer de mama são tratadas com estradiol, que se liga ao receptor de estrogênio alfa e causa alteração na composição do metabólito.

Preparação de amostras para metabolômica: um método para preparar amostras de células para perfil de metabólitos

Irrelevantes metabolômica fornece uma hipótese gerando instantâneo de um perfil metabólico. Este protocolo irá demonstrar a extracção e análise de metabolitos a partir de células, soro ou tecido. Uma gama de metabolitos são pesquisadas utilizando extracção de fase líquido-líquido, cromatografia líquida de microfluxo UltraPerformance /-espectrometria de massa de alta resolução (UPLC-HRMS), acoplado ao software de análise diferencial.

Metabolomics irrelevantes de fontes biológicas Usando UltraPerformance cromatografia líquida de alta resolução Espectrometria de Massa (UPLC-HRMS)

Metabolite perfis tem sido um ativo valioso para o estudo do metabolismo na saúde e na doença. Utilizando cromatografia normal em fases líquida acoplada à espectrometria de massa de alta resolução com mudança de polaridade e um ciclo rápido, nós descrevemos um protocolo para analisar a composição metabólica polar de material biológico com alta sensibilidade, precisão e resolução.

Uma estratégia para sensíveis, Large Scale quantitativos Metabolomics

Este artigo descreve a coleta e o processamento de amostras para análise de citometria de massa.

Preparação de Amostras para Análise Mass Citometria

Este artigo descreve um método para estudar o metabolismo celular em comunidades complexas de vários tipos de células, usando uma combinação de rastreamento de isótopos estáveis, classificação de células para isolar tipos específicos de células e espectrometria de massa.

Um método para medir o metabolismo em Ordenado subpopulações de Comunidades celulares complexas usando Stable Isotope Tracing

A finalidade deste artigo é descrever um protocolo para a extração de Metabolites aquoso das pilhas aderentes cultivadas para a análise Metabolômica, particular, a electroforese capilar-espectrometria maciça.

Extração de metabólitos aquosos de células aderentes cultivadas para análise Metabolomica por espectrometria de massa eletroforese capilar

Apresentamos um protocolo para identificação e quantitação das principais classes de metabólitos solúveis em água no levedura Saccharomyces cerevisiae. O método descrito é versátil, robusto e sensível. Permite a separação de isômeros estruturais e formas estereogômicas de metabólitos solúveis em água uns dos outros.

Metabolômica Quantitativa de Saccharomyces Cerevisiae Usando cromatografia líquida juntamente com espectrometria de massa tandem

Os esfingolípidos são metabólitos bioativos com papéis bem estabelecidos na doença humana. Caracterizar alterações em tecidos com espectrometria de massa pode revelar papéis na etiologia da doença ou identificar alvos terapêuticos. No entanto, o composto OCT usado para criopreservação em biorrepositórios interfere na espectrometria de massa. Delineamos métodos para analisar esfingolipídios em tecidos humanos incorporados em OCT com LC-ESI-MS/MS.

Preparação de tecidos humanos incorporados em composto de temperatura de corte ideal para análise de espectrometria de massa

Neste protocolo, apresentamos um fluxo de trabalho otimizado, que combina uma preparação eficiente e rápida de amostras de muitas amostras. Além disso, fornecemos um guia passo-a-passo para reduzir as variações analíticas para avaliação de alto rendimento de estudos metabólicos de GWAS.

Estudos de associação multi-omics em larga escala (Mo-GWAS): Diretrizes para preparação e normalização de amostras

Descrevemos aqui uma caracterização proteômica baseada em espectrometria de massa de linhagens celulares com destino tecidual conhecido no embrião do vertebrado Xenopus laevis .

Proteômica por Espectrometria de Massas Guiada por Linhagem Celular no Embrião em Desenvolvimento (Rã)

Neste protocolo, descrevemos como preparar células de mamíferos para análise proteômica unicelular via espectrometria de massa usando reagentes e equipamentos comercialmente disponíveis, com opções para pipetagem manual e automática.

Preparação de Proteômica de Célula Única para Análise de Espectrometria de Massa usando Lise de Calor Congelante e um Transportador Isobárico

Aprenda protocolos de preparação de amostras para metabolômica de célula única por espectrometria de massa. O método utiliza lavagem com formiato de amônio e têmpera em nitrogênio líquido para preservar perfis metabólicos celulares.

Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas (Vídeo) | JoVE Journal

Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas

Explorar mais vídeos