Name: Modelagem do Reparo Alveolar Pulmonar Displásico e Funcional após Infecção por Influenza (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 7 min 45 s
Description: Aprenda a administrar o vírus da influenza A por via intranasal em camundongos e analisar danos pulmonares. Este método revela mudanças transcricionais em células endoteliais e macrófagos alveolares, auxiliando no estudo de mecanismos de reparo pulmonar pós-infecção.

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<ol><li>Mammoto, A., Mammoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+niche+in+lung+alveolar+development%2C+homeostasis%2C+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Bioeng+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vascular niche in lung alveolar development, homeostasis, and regeneration.</a> Front Bioeng Biotechnol. 7, 318(2019).</li>
<li>Tsikis, S. T., Hirsch, T. I., Fligor, S. C., Quigley, M., Puder, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+lung+endothelial+niche+to+promote+angiogenesis+and+regeneration%3A+a+review+of+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Targeting the lung endothelial niche to promote angiogenesis and regeneration: a review of applications.</a> Front Mol Biosci. 9, 1093369(2022).</li>
<li>Torrego, A., Pajares, V., Mola, A., Lerma, E., Franquet, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+%28H1N1%29+organising+pneumonia%3A+figure+1%5BTitle%5D)+AND+%22BMJ+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Influenza A (H1N1) organising pneumonia: figure 1.</a> BMJ Case Rep. 2010, bcr1220092531(2010).</li>
<li>Murota, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+H1N1+virus-associated+pneumonia+often+resembles+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease+seen+in+collagen+vascular+diseases+and+COVID-19+pneumonia%3B+CT-pathologic+correlation+in+24+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Radiol+Open%22%5BJournal%5D)">Influenza H1N1 virus-associated pneumonia often resembles rapidly progressive interstitial lung disease seen in collagen vascular diseases and COVID-19 pneumonia; CT-pathologic correlation in 24 patients.</a> Eur J Radiol Open. 7, 100297(2020).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Klomp, M., Ghosh, S., Mohammed, S., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+virus+to+inflammation%2C+how+influenza+promotes+lung+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">From virus to inflammation, how influenza promotes lung damage.</a> J Leukoc Biol. 110 (1), 115-122 (2021).</li>
<li>Newton, A. H., Cardani, A., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+immune+response+in+respiratory+virus+infection%3A+balancing+virus+clearance+and+immunopathology%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">The host immune response in respiratory virus infection: balancing virus clearance and immunopathology.</a> Semin Immunopathol. 38 (4), 471-482 (2016).</li>
<li>Jones, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+injury-induced+mesenchymal-epithelial+cell+niche+coordinates+regenerative+responses+in+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">An injury-induced mesenchymal-epithelial cell niche coordinates regenerative responses in the lung.</a> Science. 386 (6727), eado5561(2024).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+single-cell+profiles+of+lung+regeneration+after+viral+infection+reveal+persistent+injury-associated+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Longitudinal single-cell profiles of lung regeneration after viral infection reveal persistent injury-associated cell states.</a> Cell Stem Cell. 32 (2), 302-321.e6 (2025).</li>
<li>Belser, J. A., Gustin, K. M., Katz, J. M., Maines, T. R., Tumpey, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+traditional+intranasal+and+aerosol+inhalation+inoculation+of+mice+with+influenza+A+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Comparison of traditional intranasal and aerosol inhalation inoculation of mice with influenza A viruses.</a> Virology. 481, 107-112 (2015).</li>
<li>Oltean, T., Maelfait, J., Saelens, X., Vandenabeele, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Need+for+standardization+of+influenza+A+virus-induced+cell+death+in+vivo+to+improve+consistency+of+inter-laboratory+research+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Discov%22%5BJournal%5D)">Need for standardization of influenza A virus-induced cell death in vivo to improve consistency of inter-laboratory research findings.</a> Cell Death Discov. 10 (1), 247(2024).</li>
<li>Nguyen, T. -Q., Rollon, R., Choi, Y. -K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+research%3A+strengths+and+weaknesses%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza research: strengths and weaknesses.</a> Viruses. 13 (6), 1011(2021).</li>
<li>Jin, X. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+pathogenicity+of+influenza+virus-induced+pneumonia+mouse+model+following+intranasal+and+aerosolized+intratracheal+inoculation%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Comparative pathogenicity of influenza virus-induced pneumonia mouse model following intranasal and aerosolized intratracheal inoculation.</a> Virol J. 21 (1), 240(2024).</li>
<li>Revelli, D. A., Boylan, J. A., Gherardini, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-invasive+intratracheal+inoculation+method+for+the+study+of+pulmonary+melioidosis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A non-invasive intratracheal inoculation method for the study of pulmonary melioidosis.</a> Front Cell Infect Microbiol. 2, 164(2012).</li>
<li>Cantu, A., Gutierrez, M. C., Dong, X., Leek, C., Anguera, M., Lingappan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+recovery+from+neonatal+hyperoxic+lung+injury+by+sex+as+a+biological+variable%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of recovery from neonatal hyperoxic lung injury by sex as a biological variable.</a> Redox Biol. 68, 102933(2023).</li>
<li>Sunagar, R., Kumar, S., Namjoshi, P., Rosa, S. J., Hazlett, K. R. O., Gosselin, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+an+outbred+mouse+model+for+Francisella+tularensis+vaccine+development+and+testing%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of an outbred mouse model for Francisella tularensis vaccine development and testing.</a> PLoS One. 13 (12), e0207587(2018).</li>
<li>Cowley, P. M., Roberts, C. R., Baker, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+the+health+status+of+mice+with+bleomycin-induced+lung+injury+by+using+body+condition+scoring%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Monitoring the health status of mice with bleomycin-induced lung injury by using body condition scoring.</a> Comp Med. 69 (2), 95-102 (2019).</li>
<li>Gonzalez, A. J., Ijezie, E. C., Balemba, O. B., Miura, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Attenuation+of+influenza+A+virus+disease+severity+by+viral+coinfection+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Attenuation of influenza A virus disease severity by viral coinfection in a mouse model.</a> J Virol. 92 (23), e00881-e00918 (2018).</li>
<li>Lv, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+pulmonary+immune+cells%2C+antibody+responses+and+their+correlations+with+the+viral+clearance+of+influenza+A+fatal+infection+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Virol+J%22%5BJournal%5D)">Kinetics of pulmonary immune cells, antibody responses and their correlations with the viral clearance of influenza A fatal infection in mice.</a> Virol J. 11, 57(2014).</li>
<li>Liberti, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+cell+fate+is+maintained+in+a+spatially+restricted+manner+to+promote+lung+regeneration+after+acute+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial cell fate is maintained in a spatially restricted manner to promote lung regeneration after acute injury.</a> Cell Rep. 35 (6), 109092(2021).</li>
<li>Cipolla, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhalable+and+nasal+biologics%3A+analytical%2C+formulation%2C+development%2C+and+regulatory+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Aerosol+Med+Pulm+Drug+Deliv%22%5BJournal%5D)">Inhalable and nasal biologics: analytical, formulation, development, and regulatory considerations.</a> J Aerosol Med Pulm Drug Deliv. 2024, (2025).</li>
<li>Cardiff, R. D., Miller, C. H., Munn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+hematoxylin+and+eosin+staining+of+mouse+tissue+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Protoc%22%5BJournal%5D)">Manual hematoxylin and eosin staining of mouse tissue sections.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2014 (6), (2014).</li>
<li>Bouvier, N. M., Lowen, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+influenza+virus+pathogenesis+and+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Animal models for influenza virus pathogenesis and transmission.</a> Viruses. 2 (8), 1530-1563 (2010).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,5 mL tubo &nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-557</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; Filtro de células M</td><td>Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 15 mL</td><td>Falcon</td><td>352196</td><td></td></tr><tr><td>1x PBS</td><td>Gibc0</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro; Filtro de células M</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de 5 mL</td><td>Globo</td><td>6101C</td><td></td></tr><tr><td>Tubo cônico de 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Estoque do Vírus da Influenza A/PR/8/34</td><td>ATCC&nbsp;</td><td>VR-95PQ</td><td>Lotes diferentes têm títulos virais diferentes</td></tr><tr><td>Buffer de Lise ACK</td><td>Qualidade Biológico</td><td>118-156-101</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-TRKB</td><td>R& Sistemas D</td><td>AF1494</td><td></td></tr><tr><td>Água sanitária</td><td>Clorox</td><td></td><td>10% de água sanitária</td></tr><tr><td>Albumina Sérica Bovina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A8022</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Indução de Anestesia por CO2</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase Tipo I</td><td>Gibco</td><td>17100017</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Milipore Sigma</td><td>28718-90-3</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Corning</td><td>CB-40235</td><td></td></tr><tr><td>Ferramentas de dissecação: tesoura, pinça curva, pinça reta</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dnase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>4716728001</td><td></td></tr><tr><td>D-PBS</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>Pharmco</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de vidro</td><td>DWK Ciências da Vida</td><td>986562</td><td></td></tr><tr><td>Balde de gelo</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Covetrus</td><td>29404</td><td></td></tr><tr><td>Agulhas, 21 e traço; 23 G</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta P20/P200 & nbsp;</td><td>Pipetman</td><td>F144056M/F144058M,</td><td></td></tr><tr><td>Pontas de pipeta P20/P200</td><td>Thomas Scientific</td><td>1159M43/1159M40</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)&nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>J19943-k2</td><td>2%PFA</td></tr><tr><td>Pipetman</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Caixas de freezer de plástico ou papelão</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Lâmina de barbear</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Suporte do Ringue</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pipetas sorológicas, 5 mL</td><td>Falcon</td><td>357543</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de Isoflurano de Isoflurano de Mouse por Indução de Topo Deslizante</td><td>Somni Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sutura</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9422522</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de seringa e luer-locks</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Seringa, 10 mL</td><td>Qualquer</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Máquina de Anestesia de Mesa Isoflurano</td><td>Ohmeda</td><td>Ohmeda Isotec- 4</td><td>A vazão deve ser 2,5 e traço; 3%</td></tr><tr><td>Agarose de fusão ultra-baixa</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5030-1G</td><td></td></tr><tr><td>Pesagem da balança</td><td>OHAUS</td><td>CS200</td><td></td></tr></tbody></table>

modelagem do reparo alveolar pulmonar displásico e funcional após infecção por influenza

Modeling Dysplastic and Functional Lung Alveolar Repair after Influenza Infection

Modelagem do Reparo Alveolar Pulmonar Displásico e Funcional após Infecção por Influenza

Viral infection causes both acute and long-term damage to the lung alveolus, the specialized tissue structure responsible for gas exchange between the ...

modeling-dysplastic-functional-lung-alveolar-repair-after-influenza

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Nós descrevemos o isolamento rápido de murinos primários células tipo II alveolares epiteliais (AECII) por meio de seleção por citometria de fluxo negativo. Estes AECII mostram viabilidade e pureza elevados e são adequadas para uma ampla gama de estudos funcionais e moleculares relativas ao seu papel em condições respiratórias, tais como doenças auto-imunes ou infecciosas.

Isolamento de citometria de fluxo de células primárias Murino Tipo II epiteliais alveolares de Estudos funcionais e Molecular

Desenvolvemos um modelo de lesão pulmonar em camundongos por injeção intratraqueal da bactéria Pseudomonas aeruginosa. Este modelo mimetiza a lesão pulmonar durante a pneumonia e é clinicamente relevante.

Pseudomonas aeruginosa Lesão Pulmonar Induzida Modelo

Descrevemos um meio de medir de forma rápida e simples a capacidade de difusão pulmonar em camundongos e mostrar que ela é suficientemente sensível a alterações fenotípicas em múltiplas patologias pulmonares comuns.  Essa métrica, portanto, traz relevância translacional direta para os modelos de camundongos, uma vez que a capacidade de difusão também é facilmente medida em humanos.

Função Pulmonar Fenotipagem Rato In Vivo Com a capacidade pulmonar Diffusing

A pneumonectomia de camundongos é um modelo comumente empregado de crescimento pulmonar compensatório. Este procedimento pode ser usado em conjunto com o rastreamento de linhagem ou modelos de camundongos transgênicos para elucidar os mecanismos subjacentes.

Rato Pneumonectomia modelo de crescimento compensatório pulmonar

A área de superfície pulmonar interna (ISA) é um critério crítico para avaliar a morfologia pulmonar e a fisiologia em doenças pulmonares e regeneração alveolar induzida por lesão. Descrevemos aqui um método padronizado que pode minimizar o viés de medição para ISA tanto na pneumonectomia pulmonar quanto nos modelos de mouse de implante de prótese.

Um Método Padronizado para Medição da Superfície de Pulmão Interna via Neumonectomia de Mouse e Implante de Prótese

Aqui, nós apresentamos métodos para melhorar estudos secundários da pneumonia bacteriana fornecendo uma rota não invasora da instilação no intervalo respiratório mais baixo seguido pela recuperação do micróbio patogénico e pela análise do transcrito. Estes procedimentos são reprodutíveis e podem ser executados sem equipamento especializado tal como cânulas, fios de guia, ou cabos da fibra óptica.

Um sistema de entrega e recuperação de patógenos precisos para modelos murinos de pneumonia bacteriana secundária

Este manuscrito descreve o estabelecimento de um modelo infeccioso de pneumonia em camundongos e a respectiva caracterização da resolução da lesão juntamente com métodos de crescimento de bactérias e instilação intratraqueal. Uma nova abordagem usando citometria de fluxo de alta dimensão para avaliar a paisagem imune também é descrita.

Modelo experimental para avaliar a resolução da pneumonia

Os modelos de pulmão em chip superam as culturas 2D tradicionais, imitando a interface ar-líquido e a perfusão de células endoteliais, simulando o fluxo sanguíneo e a troca de nutrientes cruciais para estudos de fisiologia pulmonar. Isso aumenta a relevância da pesquisa pulmonar, oferecendo um ambiente dinâmico e fisiologicamente preciso para avançar na compreensão e no tratamento de infecções respiratórias.

Modelo Alveolus-on-Chip Imunocompetente para Estudo das Respostas Imunes da Mucosa Alveolar

Este protocolo demonstra a técnica de aspiração orofaríngea para uso no modelo murino de bleomicina de fibrose pulmonar.

Administração orofaríngea de bleomicina no modelo murino de fibrose pulmonar

Este protocolo delineia um método para induzir fibrose pulmonar em camundongos por meio da administração orofaríngea repetida de bleomicina, produzindo características patológicas muito semelhantes às da fibrose pulmonar idiopática.

Modelo Murino Refinado de Fibrose Pulmonar Idiopática

Aprenda a administrar o vírus da influenza A por via intranasal em camundongos e analisar danos pulmonares. Este método revela mudanças transcricionais em células endoteliais e macrófagos alveolares, auxiliando no estudo de mecanismos de reparo pulmonar pós-infecção.

Modelagem do Reparo Alveolar Pulmonar Displásico e Funcional após Infecção por Influenza

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