Name: Modelagem de Hipóxia/Lesão por Reoxigenação em Células Epiteliais Tubulares Proximais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Aprenda a modelar lesão por isquemia-reperfusão renal em células epiteliais tubulares proximais usando hipóxia e reoxigenação. Este protocolo permite avaliar marcadores de lesão e função mitocondrial.

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<table><tbody><tr><td>Placa qPCR de 384 poços</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>4309849</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Ortoalresa</td><td>Biocen22R</td><td></td></tr><tr><td>Clorofórmio</td><td>VWR</td><td>0757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Gibco</td><td>21331020</td><td></td></tr><tr><td>Fator de Crescimento Epidérmico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Etanol</td><td>PanReac AppliChem</td><td>141086.1214</td><td></td></tr><tr><td>FCS</td><td>Biowest</td><td>S181B-500</td><td></td></tr><tr><td>Bloco de aquecimento</td><td>Eppendorf</td><td>ThermoMixer C</td><td></td></tr><tr><td>Hidrocortisona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0135</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora de Hipóxia</td><td>Memmert</td><td>ICO 50med</td><td></td></tr><tr><td>IFN-&gama;</td><td>ProspecBIo</td><td>CYT-358</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora</td><td>Memmert</td><td>ICO 105</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>VWR</td><td>0918-1L</td><td></td></tr><tr><td>ITSe</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>Gibco</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta multicanal</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora não2</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PCR Primers</td><td>Genômica Eurofins</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Penicilina - Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Mistura Mestre qPCR</td><td>NZYTech</td><td>MB22303</td><td></td></tr><tr><td>Sistema qPCR em Tempo Real</td><td>Biossistemas Aplicados</td><td>QuantStudio 5</td><td></td></tr><tr><td>Mistura Mestre de Transcrição Reversa</td><td>NZYTech</td><td>MB12502</td><td>Contém mistura enzimática</td></tr><tr><td>Água livre de RNAse</td><td>HyClone</td><td>SH3053802</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Teste de Estresse Mito da Célula XF Seahorse</td><td>Agilent</td><td>103015-100</td><td>Contém oligomicina, FCCP, Antimicina A e rotenona</td></tr><tr><td>Seahorse XF DMEM médio</td><td>Agilent</td><td>103575-100</td><td></td></tr><tr><td>Glicose XF Cavalo-marinho</td><td>Agilent</td><td>03577-100</td><td></td></tr><tr><td>Glutamina XF de cavalo-marinho</td><td>Agilent</td><td>103579-100</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XF Piruvato</td><td>Agilent</td><td>103578-100</td><td></td></tr><tr><td>Analisador Seahorse XFe96</td><td>Agilent</td><td>S7800BR</td><td></td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 FluxPak</td><td>Agilent</td><td>103792-100</td><td>Contém microplaca de cultura celular XFe96 e cartucho sensor XFe96</td></tr><tr><td>Ciclador térmico</td><td>BIO-RAD</td><td>Ciclador Térmico T100</td><td></td></tr><tr><td>Triiodotironina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5516</td><td></td></tr><tr><td>Trizol</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro UV-Vis</td><td>DeNovix</td><td>DS-11</td><td></td></tr></tbody></table>

modelagem de hipóxia/lesão por reoxigenação em células epiteliais tubulares proximais

Modeling Hypoxia/Reoxygenation Injury in Proximal Tubular Epithelial Cells

Modelagem de Hipóxia/Lesão por Reoxigenação em Células Epiteliais Tubulares Proximais

Kidney transplantation accounts for approximately 60%-65% of all transplanted solid organs. Most donor kidneys are obtained from deceased individuals, ...

modeling-hypoxiareoxygenation-injury-proximal-tubular-epithelial

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Os efeitos da activação da proteína quinase C (PKC) isozimas de funções mitocondriais associadas com a respiração e fosforilação oxidativa e na viabilidade celular são descritos. A abordagem técnica adapta adenoviral para superexpressar selectivamente as isozimas PKC em cultura primária de células e uma variedade de ensaios para determinar as funções mitocondriais e do estado de energia da célula.

Avaliação de funções mitocondriais e viabilidade celular em células renais Proteína Kinase C superexpressão Isozimas

Fonte: Alluri, H., et.al. Privação e reoxigenação de oxigênio-glicose como um modelo de lesão de isquemia-reperfusão in vitro para estudar a disfunção da barreira hematoencefálica. J. Vis. Exp. (2015).O vídeo demonstra o impacto da privação de oxigênio-glicose e subsequente reoxigenação nas células endoteliais microvasculares do cérebro de ratos (RBMECs), simulando condições hipóxicas e carentes de nutrientes. Essas condições resultam em depleção de ATP, aumento do cálcio intracelular e geração...

Impacto da privação e reoxigenação de oxigênio-glicose nas interações célula-célula

A lesão de isquemia-reperfusão (RI) está associada a uma alta taxa de morbidade e mortalidade. O objetivo do modelo in vitro de privação e reoxigenação de oxigênio-glicose (OGD-R) descrito aqui é avaliar os efeitos da lesão de isquemia e reperfusão em uma variedade de células, particularmente em células endoteliais da barreira hematoencefálica (BHE).

Oxigênio-Glucose Privação e reoxigenação como um<em&gt; In Vitro</em&gt; Isquemia e reperfusão Lesão modelo para estudar Disfunção Barreira Hematoencefálica

Este protocolo fornece uma abordagem econômica para isolar e caracterizar pilhas do rato primária renal tubular que podem posteriormente ser sub cultivadas para avaliar funções biológicas renal ex vivo, incluindo bioenergética mitocondrial.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

Este protocolo descreve um modelo de enterocolite necrosante a apical (NEC)-in-a-dish utilizando pequenos enteróides intestinais com polaridade invertida, permitindo o acesso à superfície apical. Fornecemos um protocolo de coloração imunofluorescente para detectar interrupção epitelial relacionada à NEC e um método para determinar a viabilidade de enteróides apical-out submetidos ao protocolo NEC-in-a-dish.

In vitro Modelo enteróide apical-out de enterocolite necrotizante

Aqui, descrevemos os protocolos para obtenção de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas (HRTEC) do córtex renal para desenvolver monocamadas e culturas tridimensionais em uma matriz extracelular (3D-HRTEC).

Desenvolvimento de culturas primárias de células epiteliais tubulares renais humanas em monocamadas e condições tridimensionais

Apresentamos um protocolo otimizado para o processamento de rins humanos inteiros para isolar e cultivar células epiteliais primárias do túbulo proximal renal e a aplicação dessas células em uma plataforma microfluídica tridimensional e microfisiológica para recapitular o túbulo proximal renal.

Isolamento de células epiteliais primárias do túbulo proximal humano e seu uso na criação de um modelo microfisiológico do túbulo proximal renal

Organoides cardíacos humanos auto-assembláveis (hCOs) são um sistema emergente para modelar o desenvolvimento e as doenças cardíacas humanas. Aqui, são apresentadas uma metodologia para gerar e prejudicar hCOs com reoxigenação por hipóxia-oxigenação e detalhes dos resultados histológicos e funcionais esperados após a lesão.

Um modelo de lesão por hipóxia-reoxigenação em cardióides humanos auto-montantes

Aqui nós descrevemos um método detalhado para o cultivo primário células epiteliais brônquicas humanas a partir de explantes de tecido das vias aéreas brônquicas humanas incluindo o crescimento diferenciado em uma interface ar-líquido. Este método fornece uma fonte abundante de células primárias para investigar o papel do epitélio das vias aéreas pulmonares em saúde humana e doenças.

Primárias células epiteliais brônquicas humanas Grown a partir de explantes

CHIRP é uma técnica recente e rápida de mapa genômico sítios de ligação de RNAs não-codificantes longos (lncRNAs). O método tira partido da especificidade dos oligonucleótidos anti-sentido ladrilhos para permitir que a enumeração de sítios lncRNA-bound genómicos.

Isolamento de cromatina por purificação de RNA (CHIRP)

Aprenda a modelar lesão por isquemia-reperfusão renal em células epiteliais tubulares proximais usando hipóxia e reoxigenação. Este protocolo permite avaliar marcadores de lesão e função mitocondrial.

Modelagem de Hipóxia/Lesão por Reoxigenação em Células Epiteliais Tubulares Proximais

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