Name: Avaliação radioquímica da atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-24T14:50:00.000+00:00
Duration: 2 min 30 s
Description: Aprenda a avaliar a atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal usando modelos murinos geneticamente modificados. Este método radioquímico de alta sensibilidade auxilia no desenvolvimento de tratamentos para doenças de armazenamento de glicogênio.

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<ol><li>Preiss, J., Walsh, D. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPreiss%2C+J+%22Biology+of+Carbohydrates%22">Biology of Carbohydrates</a>. Ginsburg, V., Robbins, P. 1, John Wiley. 199-314 (1981).</li>
<li>Pederson, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPederson%2C+BA+%22Enzymology+of+Complex+Alpha-Glucans%22">Enzymology of Complex Alpha-Glucans</a>. , CRC Press. 84-137 (2021).</li>
<li>Wayllace, N. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+enzyme-coupled+continuous+spectrophotometric+assay+for+glycogen+synthases%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Rep%22%5BJournal%5D)">An enzyme-coupled continuous spectrophotometric assay for glycogen synthases.</a> Mol Biol Rep. 39 (1), 585-591 (2012).</li>
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<li>Leloir, L. F., Olavarria, J. M., Goldemberg, S. H., Carminatti, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosynthesis+of+glycogen+from+uridine+diphosphate+glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Biosynthesis of glycogen from uridine diphosphate glucose.</a> Arch Biochem Biophys. 81 (2), 508-520 (1959).</li>
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<li>Huang, X., Hansson, M., Laurila, E., Ahren, B., Groop, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fat+feeding+impairs+glycogen+synthase+activity+in+mice+without+effects+on+its+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Metabolism%22%5BJournal%5D)">Fat feeding impairs glycogen synthase activity in mice without effects on its gene expression.</a> Metabolism. 52 (5), 535-539 (2003).</li>
<li>Holt, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+CD71+Centyrin%3A+Gys1+siRNA+conjugate+reduces+glycogen+synthesis+and+glycogen+levels+in+a+mouse+model+of+Pompe+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">A novel CD71 Centyrin: Gys1 siRNA conjugate reduces glycogen synthesis and glycogen levels in a mouse model of Pompe disease.</a> Mol Ther. 33 (1), 235-248 (2025).</li>
<li>Prats, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phosphorylation-dependent+translocation+of+glycogen+synthase+to+a+novel+structure+during+glycogen+resynthesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Phosphorylation-dependent translocation of glycogen synthase to a novel structure during glycogen resynthesis.</a> J Biol Chem. 280 (24), 23165-23172 (2005).</li>
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<li>Thomas, J. A., Schlender, K. K., Larner, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+filter+paper+assay+for+UDP-glucose-glycogen+glucosyltransferase%2C+including+an+improved+biosynthesis+of+UDP-14C-glucose%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">A rapid filter paper assay for UDP-glucose-glycogen glucosyltransferase, including an improved biosynthesis of UDP-14C-glucose.</a> Analytical Biochemistry. 25 (1), 486-499 (1968).</li>
<li>Parker, G. J., Lund, K. C., Taylor, R. P., McClain, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+resistance+of+glycogen+synthase+mediated+by+O-linked+N-acetylglucosamine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Insulin resistance of glycogen synthase mediated by O-linked N-acetylglucosamine.</a> J Biol Chem. 278 (12), 10022-10027 (2003).</li>
<li>Niederwanger, A., Kranebitter, M., Ritsch, A., Patsch, J. R., Pedrini, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gel+filtration+assay+to+determine+glycogen+synthase+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chromatogr+B+Analyt+Technol+Biomed+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">A gel filtration assay to determine glycogen synthase activity.</a> J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 820 (1), 143-145 (2005).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Insulin+control+of+glycogen+metabolism+in+knockout+mice+lacking+the+muscle-specific+protein+phosphatase+PP1G%2FRGL%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Insulin control of glycogen metabolism in knockout mice lacking the muscle-specific protein phosphatase PP1G/RGL.</a> Mol Cell Biol. 21 (8), 2683-2694 (2001).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quick+and+humane+sacrifice+of+a+mouse+by+cervical+dislocation%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quick and humane sacrifice of a mouse by cervical dislocation.</a> CSH Protoc. 2006 (1), prot4357(2006).</li>
<li>Gomes, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+storage+and+muscle+glucose+transporters+%28GLUT-4%29+of+mice+selectively+bred+for+high+voluntary+wheel+running%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Glycogen storage and muscle glucose transporters (GLUT-4) of mice selectively bred for high voluntary wheel running.</a> J Exp Biol. 212 (Pt 2), 238-248 (2009).</li>
<li>Greenberg, C. C., Jurczak, M. J., Danos, A. M., Brady, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycogen+branches+out%3A+new+perspectives+on+the+role+of+glycogen+metabolism+in+the+integration+of+metabolic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Endocrinol+Metab%22%5BJournal%5D)">Glycogen branches out: new perspectives on the role of glycogen metabolism in the integration of metabolic pathways.</a> Am J Physiol Endocrinol Metab. 291 (1), E1-E8 (2006).</li>
<li>Bradford, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+and+sensitive+method+for+the+quantitation+of+microgram+quantities+of+protein+utilizing+the+principle+of+protein-dye+binding%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.</a> Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).</li>
<li>Gilboe, D. P., Larson, K. L., Nuttall, F. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioactive+method+for+the+assay+of+glycogen+phosphorylases%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Radioactive method for the assay of glycogen phosphorylases.</a> Anal Biochem. 47 (1), 20-27 (1972).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>[14C] Uridina 5-difosfo-glicose</td><td>Produtos Químicos Radiomarcados Americanos</td><td>ARC 0154</td><td></td></tr><tr><td>31 artigo de cromatografia ETCHR</td><td>Whatman</td><td>3031 915</td><td></td></tr><tr><td>Hidrato de cloridrato de benzamidina</td><td>Sigma</td><td>B6506</td><td></td></tr><tr><td>Beta-mercaptoetanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td></td></tr><tr><td>Banho seco</td><td>Torey Pines Scientific</td><td>SC25</td><td></td></tr><tr><td>Etanol (200 proof)</td><td>PharmcoAaper</td><td>111000200</td><td></td></tr><tr><td>Ácido tetraacético de etilenoglicol (EGTA)</td><td>Sigma</td><td>E4378</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenediaminotetraacético (EDTA)</td><td>Sigma</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Glucose-6-fosfato sal sódico</td><td>Sigma</td><td>G7879</td><td></td></tr><tr><td>Glicogênio do fígado de coelho (Tipo III)</td><td>Sigma</td><td>G8876</td><td></td></tr><tr><td>Microplaca, fundo plano, 96 poços</td><td>Greiner</td><td>655101</td><td></td></tr><tr><td>Microplaca, PCR, 96 poços</td><td>DOT Scientific</td><td>951-PCR</td><td></td></tr><tr><td>Contador de Cintilação Multiuso</td><td>Beckman Coulter</td><td>LS 6500</td><td></td></tr><tr><td>Diidratado de flúor de potássio</td><td>Sigma</td><td>221872</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel inibidor de protease</td><td>GoldBio</td><td>GB-108-2</td><td></td></tr><tr><td>Coquetel de cintilação</td><td>Reasearch Products International</td><td>111195</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de cintilação</td><td>Reasearch Products International</td><td>125509</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreto de sódio</td><td>Sigma</td><td>S7920</td><td></td></tr><tr><td>Tearor de tecidos</td><td>Produtos Biospec</td><td>Modelo 398</td><td></td></tr><tr><td>Tosilisina Clorometil Cetona (TLCK)</td><td>Sigma</td><td>T7254</td><td></td></tr><tr><td>Base de Trizma (99,9%)</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de Trizma</td><td>Sigma</td><td>T3253</td><td></td></tr><tr><td>Uridina 5-difospoglicose</td><td>Sigma</td><td>U-4625</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação radioquímica da atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal

Radiochemical Assessment of Glycogen Synthase Enzyme Activity in Animal Tissue

Avaliação radioquímica da atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal

Glycogen is an important metabolite to many eukaryotic cells, integral to energy storage and quick energy release. The building of the molecule is ...

radiochemical-assessment-glycogen-synthase-enzyme-activity-animal

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JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Este vídeo descreve um ensaio espectrofotométrico para a estimativa da atividade da glicogênio sintase. O método baseia-se na redução da absorbância do NADH com o tempo e indica a atividade da glicogênio sintase.

Ensaio espectrofotométrico para determinar a atividade da glicogênio sintase

Neste vídeo, descrevemos um ensaio espectrofotométrico qualitativo para determinar a extensão da ramificação em uma amostra de glicogênio com uma estrutura não caracterizada. A comparação dos máximos de absorbância da amostra não caracterizada com os de polissacarídeos com estruturas ramificadas conhecidas indica a presença de ramificação na amostra não caracterizada.

Ensaio de ramificação de glicogênio para medir o grau de ramificação de glicogênio

Descrevemos aqui um método bioquímico exato, reprodutível e conveniente para a titulação de glicogênio in vitro. Esta técnica utiliza o kit de ensaio Abcam do glicogénio e é baseado na hidrólise sucessiva de glicogênio a glicose e glicose titulação por fluorescência.

Titulação Bioquímica de glicogênio<em&gt; In vitro</em

A coloração com ácido periódico de Schiff é uma técnica que visualiza o conteúdo de polissacarídeos dos tecidos. Este artigo demonstra o protocolo de coloração de Schiff com ácido periódico adaptado para uso em células mononucleares do sangue periférico purificadas de sangue venoso humano. Essas amostras são enriquecidas para linfócitos e outros glóbulos brancos do sistema imunológico.

Detecção de glicogênio no sangue periférico células mononucleares com Periodic Acid Schiff Coloração

Aqui, apresentamos um ensaio confiável e fácil para medir o teor de glicogênio em células cianobacterianas. O procedimento implica a precipitação, despolimerização selecionável e a detecção de resíduos de glicose. Este método é adequado para ambas as variedades de tipo selvagem e geneticamente modificado e pode facilitar a engenharia metabólica de cianobactérias.

Determinação do conteúdo de glicogênio em cianobactérias

A regulação intacta da absorção de glicose muscular é importante para manter a homeostase de glicose corporal inteira. Este protocolo apresenta avaliação da absorção de glicose estimulada pela insulina e contração em músculo esquelético maduro isolado e incubado ao delinear o impacto de várias intervenções fisiológicas em todo o metabolismo da glicose corporal.

Medição da absorção de glicose estimulada por insulina e contração em músculo esquelético maduro isolado e incubado de camundongos

Técnicas para medir a atividade de enzimas-chave do metabolismo do glicogênio são apresentadas, usando um espectrofotômetro simples operando na faixa visível.

Métodos espectrofotométricos para o estudo do metabolismo do glicogênio eucariótico

Uma concentração ótima de sacarose foi determinada para a extração de glicogênio hepático usando centrifugação por gradiente de densidade de sacarose. A adição de uma etapa de ebulição de 10 min para inibir enzimas degradadoras de glicogênio mostrou-se benéfica.

A extração de moléculas de glicogênio hepático para determinação da estrutura do glicogênio

Um procedimento pós-fixação modificado aumenta o contraste das partículas de glicogênio no tecido. Este artigo fornece um protocolo passo-a-passo descrevendo como lidar com o tecido, conduzir a imagem e usar métodos esterológicos para obter dados imparciales e quantitativos sobre a distribuição de glicogênio subcelular específico do tipo de fibra no músculo esquelético.

Quantificação da Distribuição de Glicogênio Subcelular em Fibras Musculares Esqueléticas usando Microscopia eletrônica de transmissão

Como as mitocôndrias são apenas uma pequena percentagem da célula vegetal, eles precisam ser purificado para uma gama de estudos. Mitocôndrias podem ser isoladas em uma variedade de órgãos da planta por homogeneização, seguida de centrifugação gradiente diferencial e densidade para obter uma fração mitocondrial altamente purificada.

Isolamento e medições respiratória de mitocôndrias de Arabidopsis thaliana

Aprenda a avaliar a atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal usando modelos murinos geneticamente modificados. Este método radioquímico de alta sensibilidade auxilia no desenvolvimento de tratamentos para doenças de armazenamento de glicogênio.

Avaliação radioquímica da atividade da enzima glicogênio sintase em tecido animal

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