Modelo de amputação do membro posterior do rato abaixo do joelho e reinervação muscular imediata direcionada

Uma pesquisa examina a dor relacionada a lesão nervosa e amputação e como o redirecionamento de nervos pode afetar essa dor. A amputação limita as avaliações padrão de dor. Este protocolo utiliza testes modificados e alternativos para medir comportamentos de dor pós-amputação.

Para começar, obtenha uma rata Sprague Dawley com idade entre oito e 10 semanas e peso entre 250 e 300 gramas. Ligue o tapete aquecido e prepare um campo cirúrgico estéril. Organize todas as ferramentas e materiais estéreis necessários para a cirurgia.

Após anestesiar o rato com isoflurano em uma dose de indução de 4% e uma dose de manutenção de 1 a 2%, faça a depilação da área começando pela região lombar e seguindo ao longo de todo o comprimento do membro posterior. Limpe o local cirúrgico com solução antisséptica de poviodina, seguido pela limpeza com um lenço umedecido com álcool. Repita este procedimento mais duas vezes.

Use uma seringa tuberculínica para injetar um miligrama por quilograma de meloxicam por via subcutânea. Use uma régua para marcar a linha da articulação do joelho. E faça duas marcas adicionais, dois centímetros e três centímetros distais ao joelho.

Use um bisturi para fazer uma incisão cutânea circunferencial a três centímetros distal ao joelho. Realize uma dissecação romba e afiada para separar circunferencialmente a pele dos músculos subjacentes até que ela se retrai livremente. Repita o processo de descolamento através das camadas musculares mais profundas para dissecar até o osso, preservando os planos teciduais.

Use um marcador para marcar a tíbia e a fíbula um centímetro proximal ao corte circunferencial. Use tesoura óssea pequena para seccionar a tíbia e a fíbula no local marcado. Use cauterização para controlar o sangramento e obter hemostasia.

Examine a extremidade do osso e retire ou corte as bordas afiadas conforme necessário. Use uma sutura absorvível trançada 4-O para aproximar as bordas anteriores dos compartimentos musculares sobre a tíbia e fixe-a com quatro a seis pontos separados e espaçados uniformemente. Alinhe e feche os compartimentos musculares anterior e posterior juntos sobre o osso para formar uma almofada muscular.

Fechamento da pele lateralmente com suturas absorvíveis trançadas interrompidas 4-O, evitando a colocação sobre o coto de sustentação de peso. Aplicar adesivo dérmico ao longo da linha da incisão. Fazer uma incisão longitudinal de separação glútea de 1,5 a dois centímetros, aproximadamente cinco milímetros posterior ao fêmur.

Utilize dissecação romba para separar os músculos glúteo e isquiotibiais e expor o nervo ciático próximo à sua trifurcação. Identifique os ramos motores proximais, incluindo o ramo grande localizado abaixo do músculo femoral caudal ou CFM e suas divisões. Eleve o CFM com pinça e seccione-o.

Use pinças microcirúrgicas finas do tipo Dumont para neuralizar as divisões do semimembranoso e do bíceps femoral por meio de dissecação romba. Segure o epineuro e abra-o longitudinalmente utilizando tesoura fina curva de mola. Em seguida, separe os ramos nervosos.

Preserve o ramo caudofemoral e divida os ramos restantes próximos ao tronco isquiático. Curve os ramos motores inferiormente para facilitar a coaptação. Utilize tesoura curva de mola para abrir o epineúrio e dividi-lo a fim de neuralizar a trifurcação isquiática.

Use pinças finas para separar suavemente os ramos nervosos. Use pinças para segurar cada um dos três ramos, peroneal comum, tibial e sural, a cinco a dez milímetros distalmente à trifurcação. Enquanto aplica tensão, seccione cada nervo distalmente e excise um segmento de cinco a dez milímetros.

Utilize suturas de náilon 10-0 para realizar as coaptações, conectando primeiro o nervo perineal comum ao semimembranoso. Faça pelo menos três nós por sutura. Assegure uma colocação sem tensão, evitando apertar em excesso e dobrar o nervo, e posicione as coaptações sem angulações acentuadas.

Em seguida, conecte o nervo tibial ao ramo grande do bíceps femoral e conecte o nervo sural ao ramo pequeno do bíceps femoral. Para amputação sem reinervação muscular-alvo, após expor os ramos do nervo ciático, utilize um fio de sutura de seda 5-0 e uma pinça para ligar os nervos fibular comum, tibial e sural, garantindo que a ligadura amarre o nervo e seja fixada com quatro nós quadrados. Puxe suavemente cada nervo proximalmente utilizando o nó e seccione um a dois milímetros distal à ligadura.

Remova 10 milímetros do segmento nervoso distal e, em seguida, prossiga com a amputação conforme demonstrado anteriormente. Após o fechamento da incisão, aplique adesivo cutâneo ao longo da linha da incisão. Monitore a rata diariamente por sete dias quanto à integridade da ferida, sinais de infecção, dor ou desconforto, e intervenha se necessário conforme as diretrizes do IACUC.

Os limiares de retirada mecânica medidos pelo teste de Von Frey foram significativamente reduzidos em relação à linha de base e permaneceram diminuídos nos diferentes momentos após a amputação. O teste com agulha demonstrou uma tendência ao aumento das respostas nociceptivas ao longo do tempo em comparação com a linha de base. A hipersensibilidade ao frio do coto foi acentuada e manteve-se sustentada em comparação com a linha de base em todos os momentos avaliados.

Este protocolo permite avaliar diferentes estratégias de manejo nervoso no contexto de amputação. O maior desafio durante a realização deste protocolo é manipular os nervos de forma indolor, sendo sua largura inferior a um milímetro. Estudos futuros podem expandir este trabalho para aprimorar modelos e desenvolver métodos mais confiáveis para o estudo da dor fantasma do membro.