Name: Dissecção de músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para abordagens de microscopia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-07T14:20:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: Aprenda a dissecar músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para análise por microscopia confocal. Este protocolo otimizado preserva estruturas sarcoméricas em pupas e adultos, permitindo estudar formação muscular e regulação de RNA na miogênese.

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<table><tbody><tr><td>Placas de cultura de tecidos de 60 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012921</td><td>60 mm, poliestireno</td></tr><tr><td>Ácido Acético, Glacial (ACS Certificado)</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38S-212</td><td></td></tr><tr><td>Adenosina Trifosfato (ATP)</td><td>Millipore Sigma</td><td>A1852</td><td></td></tr><tr><td>Papel alumínio, de alta resistência</td><td>Amazon</td><td></td><td>12 pol. x 1000 pés.</td></tr><tr><td>Recipientes de dissecação de silicone preto: pó de carvão ativado</td><td>Millipore Sigma</td><td>C9157</td><td>Também disponível na maioria das farmácias</td></tr><tr><td>Pratos de dissecação de silicone preto: Sylgard 184</td><td>Millipore Sigma</td><td>761036</td><td>Para fazer pratos de dissecação de silício, combine os componentes do Sylgard em um saco ziploc e misture bem. Adicione o pó de carvão ativado (~200 mg) ao Sylgard (~50 g), misture bem, corte o canto do saco, encha panelas de cultura de 60 mm, remova as bolhas com a ponta de uma pipeta e cure durante a noite.</td></tr><tr><td>Bandeja de papelão para slides, Research Products International Corp.</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-136-7558</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal, confocal invertida Nikon AXR</td><td>Nikon</td><td></td><td><a href="http://www.microscope.healthcare.nikon.com/">www.microscope.healthcare.nikon.com/</a></td></tr><tr><td>Microscópio confocal, Zeiss LSM 780 confocal invertido</td><td>Zeiss</td><td></td><td><a href="http://www.zeiss.com/">www.zeiss.com</a></td></tr><tr><td>Câmara de Criação de Insetos Darwin (Incubadora)</td><td>Fisher Scientific/Câmaras de Darwin</td><td>IN034</td><td>Incubadora com controle de luz, temperatura e umidade</td></tr><tr><td>Prato de dissecação (vidro preto)</td><td>Mikroskop Technik Diethelm</td><td>398011</td><td>Lymphbecken (tigelas de tingimento/tanques linfáticos), vidro preto, 4x4 cm, com cobertura de vidro transparente</td></tr><tr><td>Pinças Dumont #3</td><td>Ferramentas Científicas Finas</td><td>11231-30</td><td>Pinça Dumoxel com ponta reta de 12 cm com ponta de 0,17 x 0,1 mm &nbsp;</td></tr><tr><td>Pinça Dumont #5</td><td>Ferramentas Científicas Finas</td><td>11252-20</td><td>Pinça de ponta reta Inox de 11 cm, grau de Biologia com ponta de 0,05 x 0,02 mm &nbsp;</td></tr><tr><td>EGTA (Ácido Egtázico)</td><td>Millipore Sigma</td><td>324626</td><td></td></tr><tr><td>Etanol, Absoluto (200 Proof)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP28184</td><td>Grau em Biologia Molecular</td></tr><tr><td>Vidro Fishing Premium Cover (18 x 18 mm), coberturas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548A</td><td>Vidro, quadrado, espessura #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Vidro de cobertura premium Fisherbrand (22 x 22 mm), coberturas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12548B</td><td>Vidro, quadrado, espessura #1 (0,13 - 0,16 mm)</td></tr><tr><td>Placas de cultura celular de fundo plano (24 poços)</td><td>Fisher Scientific</td><td>7200740</td><td></td></tr><tr><td>câmera de microscópio fluorescente dissecante, câmera Infinity8</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td>6 megapixels, baixa luz, monocromático</td></tr><tr><td>Voar: Smn[E33]</td><td></td><td></td><td>Estoque de moscas; Presente de Gregório Matera</td></tr><tr><td>Voar: w[1118]</td><td>Centro de Estoques de Bloomington</td><td>RRID:BDSC_3605</td><td>Material de mosca</td></tr><tr><td>glicerol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP229-1</td><td>Grau em Biologia Molecular</td></tr><tr><td>Solução glioxal (40% em peso em H2O)</td><td>Millipore Sigma</td><td>128465</td><td>&nbsp; Essa é uma solução padrão de 40%</td></tr><tr><td>Software de processamento de imagem, Affinity Designer 2</td><td>Afinidade</td><td></td><td>https://affinity.serif.com/en-us/</td></tr><tr><td>Software de processamento de imagem, Image J (Fiji)</td><td>ImageJ2</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td></tr><tr><td>Pinos de insetos</td><td>Ferramentas Científicas Finas</td><td>26002-10</td><td>aço inoxidável, 0,1 mm de diâmetro (pinos minúcil)</td></tr><tr><td>Cloreto de Magnésio (MgCl2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA12315A1</td><td></td></tr><tr><td>Metanol (HPLC)</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>A452-4</td><td>Relaxar em -20? Antes do uso</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio, foscas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-400</td><td>Área de escrita, sem carga, 75 mm x 25 mm x 1 mm</td></tr><tr><td>Lâminas de microscópio, vidro simples</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-544-4</td><td>Pré-limpo, 75 mm x 25 mm</td></tr><tr><td>Lâminas de microtomo MX35 Ultra</td><td>epredia (Fisher Scientific)</td><td>3053835</td><td>Perfil baixo, 34 graus; ângulo de corte; Lâminas C35 feather 80mm funcionam bem</td></tr><tr><td>Esmalte de unhas, transparente (Sally Hansen Xtreme Wear Nail Polish)</td><td>Amazon</td><td></td><td>0,4 fl. oz.</td></tr><tr><td>Soro normal de cabra</td><td>Millipore Sigma</td><td>S26 LITROS</td><td></td></tr><tr><td>Nutator (Mini Nutating Rocker, Benchmark)</td><td>Midwest Scientific</td><td>H3D1020</td><td>24 rpm, fixo; 8 x 6 pol. plataforma com tapete com covinhas</td></tr><tr><td>Pincel (Rodada nº 0)</td><td>Amazon</td><td></td><td>Pincel redondo nº 0 ou similar de qualquer material de arte</td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)</td><td>Millipore Sigma</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>Soro Tamponado com Fosfato (PBS): KCl</td><td>Millipore Sigma</td><td>529552-250GM</td><td>Prepare PBS de acordo com o Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soro Tamponado de Fosfato (PBS): KH2PO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>P0662-500G</td><td>Prepare PBS de acordo com o Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soro Tamponado de Fosfato (PBS): Na2HPO4</td><td>Millipore Sigma</td><td>S9763-500G</td><td>Prepare PBS de acordo com o Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Soro Tamponado com Fosfato (PBS): NaCl</td><td>Fisher Chemical (Fisher Scientific)</td><td>S271-1</td><td>Prepare PBS de acordo com o Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.rec8247</td></tr><tr><td>Pontas de pipeta PR1MA (10 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR10XLRK-NS</td><td>Universal 10 & micro; Pontas da pipeta em L</td></tr><tr><td>Pontas de pipeta PR1MA (1000 e micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-1000RK-FL</td><td>Universal 1000 & micro; Pontas da pipeta em L</td></tr><tr><td>Pontas de pipeta PR1MA (200 & micro; L)</td><td>Midwest Scientific</td><td>PR-200RK-NS</td><td>Universal 200 & micro; Pontas da pipeta em L</td></tr><tr><td>Rodamina-Faloidina</td><td>Invitrogen, Sondas Moleculares</td><td>R415</td><td></td></tr><tr><td>Fita dupla face escocês</td><td>Scotch/3M (Staples)</td><td>649280</td><td>ambos os lados são revestidos com adesivo, 0,5" x 7 jardas, disponível na maioria dos manuseadores de materiais de escritório</td></tr><tr><td>Dihidrogénio fosfato de sódio diidratado (NaH2PO4)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAA1131636</td><td></td></tr><tr><td>Software: GraphPad Prism</td><td>GraphPad Prisma</td><td></td><td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td></tr><tr><td>Software: Infinity Analyze 7</td><td>Teledyne (Visual Dynamix)</td><td></td><td><a href="https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/">https://www.teledynevisionsolutions.com/products/infinity-analyze/</a></td></tr><tr><td>Software: Microscoft Excel</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://www.microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel</td></tr><tr><td>Limpadores delicados de tarefas, 1 camada Kimtech Science Kimwipes</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-666</td><td>Lenços de papel padrão</td></tr><tr><td>Pipeta de transferência</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-711-9AMMD</td><td>Pipeta plástica</td></tr><tr><td>Trition X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura mola Vannas</td><td>Ferramentas Científicas Finas</td><td>15000-00</td><td>Aresta de corte de 3 mm, diâmetro da ponta 0,05 mm, comprimento 8 cm</td></tr><tr><td>Vectashield com DAPI</td><td>Laboratórios Vector</td><td>H-2000</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield sem DAPI</td><td>Laboratórios Vector</td><td>H-1900</td><td></td></tr><tr><td>Papel Whatman</td><td>Millipore Sigma</td><td>WHA1004070</td><td>Círculos de papel de filtro, Grau 4, 70 mm</td></tr><tr><td>Microscópio estéreo fluorescente de dissecação Z10</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr><tr><td>Microscópio estéreo estéreo ergonômico de dissecação Z850</td><td>Visual Dynamix (Midwest Scientific)</td><td></td><td>http://www.visualdynamix.net/</td></tr></tbody></table>

dissecção de músculos de voo indireto de drosophila melanogaster para abordagens de microscopia

Dissection of Drosophila melanogaster Indirect Flight Muscles for Microscopy Approaches

Dissecção de músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para abordagens de microscopia

The indirect flight muscles (IFMs) of Drosophila melanogaster are a powerful genetic model to explore foundational principles of myogenesis. The ...

dissection-drosophila-melanogaster-indirect-flight-muscles-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Drosophila larval Dissection MNJ

Identificação dos mecanismos subjacentes à lesão muscular é crucial. Aqui apresentamos a técnica histológica para preparar parafina e congeladas seções do Drosophila músculos do tórax. Isto permite a análise da morfologia do músculo e localização de proteínas e outros componentes celulares do músculo.

Seções incluído em parafina e congelados de Drosophila Músculos Adulto

Dissecção e imagem das Zonas de Ativos no Drosophila Junção neuromuscular

Os músculos de vôo da Drosophila são usados como um sistema modelo para o desenvolvimento e fisiologia muscular. Este vídeo descreve a musculatura de voo de adultos e destaca um protocolo para dissecar o desenvolvimento de músculos de voo indireto que são adequados para o sequenciamento de RNA de pupas.

drosófila Dissecção do músculo de voo indireto (IFM) da pupa tardia: um método para coleta de tecido de alto rendimento

Este vídeo demonstra um protocolo para avaliar a integridade estrutural das junções neuromusculares nos músculos dorsais longitudinais de Drosophila. O procedimento envolve a coloração de neurônios e músculos com dois anticorpos distintos e a comparação de padrões de fluorescência entre moscas mutantes e selvagens. Uma redução na coloração neuronal em moscas mutantes indica neurodegeneração, enquanto a estrutura muscular permanece intacta.

Avaliação da integridade estrutural das junções neuromusculares do músculo longitudinal dorsal em Drosophila

Estudos da morfogênese neuronal usando Drosophila arborização dendrítica larval (da) neurônios beneficiar na visualização situ de proteínas neuronais e epidérmicas por imunofluorescência. Descreve-se um processo que melhora a análise de imunofluorescência de Da neurónios e células epidérmicas vizinhas através da remoção de tecido do músculo da parede do corpo larval.

Remoção de<em&gt; Drosophila</em&gt; Tecido muscular larval Filetes para Análise de imunofluorescência de neurônios sensoriais e células epidérmicas

Nós relatamos um método para quantificar a área do músculo, que é um método indireto para determinar a massa muscular em adultos de Drosophila . Demonstraremos que a aplicação de nossa metodologia, analisando o voo indirecto musculares em um modelo de drosófila de doença distrofia miotônica.

Determinação de área óptica transversal muscular dos músculos de voo indirecto adulto de Drosophila Melanogaster

O músculo de vôo de Drosophila é um modelo poderoso para estudar a regulação transcricional, splicing alternativo, metabolismo e mecanobiologia. Nós apresentamos um protocolo para a dissecção do músculo fluorescente-etiquetado do vôo das pupas vivos para gerar amostras altamente enriquecidas ideais para o proteômica e profundamente-arranjar em seqüência. Essas amostras podem oferecer importantes insights mecanísticos em diversos aspectos do desenvolvimento muscular.

Dissecção de músculos de vôo de Drosophila melanogaster para abordagens Omics

É apresentado um protocolo que permite a visualização de melanogaster de Drosophila intacto em qualquer estágio de desenvolvimento utilizando tomografia microcomputada.

Imagem Animal inteira de Drosophila melanogaster usando tomografia microcomputada

Este relatório fornece um novo procedimento de preparação de amostras para visualizar junções neuromusculares em larvas de Drosophila . Este método é mais eficaz na prevenção do enrolamento das amostras em comparação com o método tradicional e é particularmente útil para a análise ultraestrutural da junção neuromuscular de Drosophila .

Otimizando o processo de preparação de amostras para microscopia eletrônica de transmissão de junções neuromusculares em larvas de Drosophila

Drosophila é um modelo bem estabelecido para estudar moléculas-chave que regulam a miogênese. No entanto, os métodos atuais são insuficientes para determinar a dinâmica transcricional do RNAm e a distribuição espacial dentro dos sincícios. Para resolver essa limitação, otimizamos um método de hibridização in situ por fluorescência de RNA, permitindo a detecção e quantificação de mRNAs em escala de molécula única.

Estudando a Dinâmica Transcricional Muscular em Escalas de Molécula Única em Drosophila

Aprenda a dissecar músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para análise por microscopia confocal. Este protocolo otimizado preserva estruturas sarcoméricas em pupas e adultos, permitindo estudar formação muscular e regulação de RNA na miogênese.

Dissecção de músculos de voo indireto de Drosophila melanogaster para abordagens de microscopia

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