Name: Um modelo de camundongo neonatal de enterocolite necrosante e isolamento da lâmina própria para perfil de células imunes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 13 s
Description: Aprenda a induzir enterocolite necrosante em camundongos neonatos e isolar células da lâmina própria para perfil imunológico por citometria de fluxo. Este modelo reproduz características da doença humana em lactentes prematuros.

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<ol><li>Alsaied, A., Islam, N., Thalib, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+of+necrotizing+enterocolitis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Pediatr%22%5BJournal%5D)">Global incidence of necrotizing enterocolitis: A systematic review and meta-analysis.</a> BMC Pediatr. 20 (1), 344(2020).</li>
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<li>Leaphart, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+critical+role+for+TLR4+in+the+pathogenesis+of+necrotizing+enterocolitis+by+modulating+intestinal+injury+and+repair1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair1.</a> J Immunol. 179 (7), 4808-4820 (2007).</li>
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<li>Kaplina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necrotizing+enterocolitis%3A+The+role+of+hypoxia%2C+gut+microbiome%2C+and+microbial+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Necrotizing enterocolitis: The role of hypoxia, gut microbiome, and microbial metabolites.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2471(2023).</li>
<li>Good, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+rhamnosus+hn001+decreases+the+severity+of+necrotizing+enterocolitis+in+neonatal+mice+and+preterm+piglets%3A+Evidence+in+mice+for+a+role+of+TLR9%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus rhamnosus hn001 decreases the severity of necrotizing enterocolitis in neonatal mice and preterm piglets: Evidence in mice for a role of TLR9.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 306 (11), G1021-G1032 (2014).</li>
<li>Denning, T. L., Bhatia, A. M., Kane, A. F., Patel, R. M., Denning, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+nec%3A+Role+of+the+innate+and+adaptive+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Perinatol%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of nec: Role of the innate and adaptive immune response.</a> Semin Perinatol. 41 (1), 15-28 (2017).</li>
<li>Yu, Y. -R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+protocol+for+the+comprehensive+flow+cytometric+analysis+of+immune+cells+in+normal+and+inflamed+murine+non-lymphoid+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">A protocol for the comprehensive flow cytometric analysis of immune cells in normal and inflamed murine non-lymphoid tissues.</a> PLOS ONE. 11 (3), e0150606(2016).</li>
<li>Mihi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-22+signaling+attenuates+necrotizing+enterocolitis+by+promoting+epithelial+cell+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep+Med%22%5BJournal%5D)">Interleukin-22 signaling attenuates necrotizing enterocolitis by promoting epithelial cell regeneration.</a> Cell Rep Med. 2 (6), 100320(2021).</li>
<li>Bautista, G. M., Cera, A. J., Chaaban, H., Mcelroy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State-of-the-art+review+and+update+of+in+vivo+models+of+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Pediatr%22%5BJournal%5D)">State-of-the-art review and update of in vivo models of necrotizing enterocolitis.</a> Front Pediatr. 11, 1161342(2023).</li>
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<li>Blum, L., Vincent, D., Boettcher, M., Knopf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+aspects+of+necrotizing+enterocolitis+models%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunological aspects of necrotizing enterocolitis models: A review.</a> Front Immunol. 15, 1434281(2024).</li>
<li>Nolan, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Indole-3-carbinol-dependent+aryl+hydrocarbon+receptor+signaling+attenuates+the+inflammatory+response+in+experimental+necrotizing+enterocolitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunohorizons%22%5BJournal%5D)">Indole-3-carbinol-dependent aryl hydrocarbon receptor signaling attenuates the inflammatory response in experimental necrotizing enterocolitis.</a> Immunohorizons. 5 (4), 193-209 (2021).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1 mL Syringe-Tuberculin Slip Tip</td><td>Becton Dickinson</td><td>309659</td><td>Syringe for formula feeding</td></tr><tr><td>1.5 mL semi-micro Disposable Cuvettes</td><td>BRAND GMBH + CO KG</td><td>759085D</td><td></td></tr><tr><td>1.7 ml Microtubes Clear</td><td>Axygen - Corning Inc.</td><td>MCT-175-C</td><td>Nonpryogenic &amp; Rnase-/Dnase-free</td></tr><tr><td>5% Oxygen, Balance Nitrogen Certified Reference Material, Size 200 High Pressure Steel Cylinger, CGA 580</td><td>Airgas</td><td>X02NI95C2003186</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mo CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-85</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Mouse CD16/CD32 Purified Clone: 93</td><td>eBioscience Inc.&nbsp;</td><td>14-0161-86</td><td></td></tr><tr><td>APC anti-mouse Ly-6C Clone: HK1.4 Isotype: Rat IgGc</td><td>BioLegend</td><td>128015</td><td></td></tr><tr><td>autoMACS Rinsing Solution</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-222</td><td></td></tr><tr><td>BB515 Rat Anti-CD11b Clone: M1/70</td><td>BD Biosciences</td><td>564455</td><td></td></tr><tr><td>BB700 Rat Anti-Mouse CD4 Clone: RM4-5</td><td>BD Biosciences</td><td>566408</td><td></td></tr><tr><td>BD Microtainer SST</td><td>Becton Dickinson</td><td>365867</td><td>Serum Tube</td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p1200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-365</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p20</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-366</td><td></td></tr><tr><td>BIOTIX&nbsp;Rainin LTS Compatible Racked Filter Tips, p200</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-111-362</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Stain Buffer</td><td>BD Biosciences</td><td>563795</td><td></td></tr><tr><td>BUV615 Rat Anti-Mouse Ly-6G Clone: 1A8</td><td>BD Biosciences</td><td>751263</td><td></td></tr><tr><td>BV650 Rat Anti-Mouse I-A/I-E Clone: M5/114.15.2</td><td>BD Biosciences</td><td>563415</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J Neonatal Mice</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td></td></tr><tr><td>CD45-VioGreen mouse</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-102-412</td><td></td></tr><tr><td>CD64 Antibody, anti-mouse, PE-Vio 770, REAfinity Clone REA286</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-119-659</td><td></td></tr><tr><td>CFX Opus Real-Time PC Systems&nbsp;</td><td>Bio-Rad</td><td>12011319</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 4</td><td>Worthington Biochemical Corporation&nbsp;</td><td>LS004188</td><td></td></tr><tr><td>DL-dithiothreitol&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D9779-5g</td><td></td></tr><tr><td>eBioscience FOXP3/Transcription Factor Staining Buffer Set</td><td>Life Technologies Corp.&nbsp;</td><td>00-5523-00</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5M), pH 8.0</td><td>Quality Biological Inc</td><td>351-027-721</td><td></td></tr><tr><td>Esbilac Puppy Milk Replacer</td><td>Pet-Ag, Inc.</td><td>99502-1</td><td>Puppy Milk</td></tr><tr><td>Fisherbrand Disposable Cuvettes</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-127</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 10mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11E</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 25mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 50mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11F</td><td></td></tr><tr><td>Fisherbrand Sterile Polystyrene Disposable Serological Pipets with Magnifier Stripe (paper/plastic wrap), 5mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-11D</td><td></td></tr><tr><td>Genie Temp-Shaker 300</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>SI-G1600</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS Dissociator (protocol; m_intestine-01)</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>gentleMACS&nbsp; C Tubes</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130096334</td><td></td></tr><tr><td>Ghost Dye Red 780 Viability Dye</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0865-T100</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol ReagentPlus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7757-500ML</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prims Software, Version 10.0</td><td>GraphPad</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Greiner Bio-One Round Bottom Polypropylene Culture Tube with Two-Position Vent Stopper</td><td>Fisher Scientific</td><td>07-000-212</td><td></td></tr><tr><td>Handi+ Oxygen analyzer</td><td>Maxtec</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Hanks' Balanced Salt Solution</td><td>Gibco</td><td>141650-095</td><td></td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Mediatech, Inc.&nbsp;</td><td>25-060-CI</td><td></td></tr><tr><td>Hypoxia Chamber</td><td>Billups-Rothenburg, Inc.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>Schneider et al., 2012</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 10.2cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-655</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex MeisterHand Iris Scissors, 9cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-598</td><td></td></tr><tr><td>Integra Miltex&trade; Swiss Jeweler-Style Forceps</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-460-110</td><td></td></tr><tr><td>Isolette Infant Incubator</td><td>Air-Shields Vickers</td><td>C100-200-2 Series 02</td><td>Incubator for mice</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipes</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td>LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L3129-10mg</td><td></td></tr><tr><td>Luria Broth Broth, Miller Molecular Genetics Powder</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1426-500</td><td></td></tr><tr><td>MACS BSA Stock Solution</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-091-376</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tube Rotator</td><td>Miltenyi Biotec&nbsp;</td><td>130-090-753</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>1.5 ml, clear, graduated, sterile</td></tr><tr><td>NanoDrop OneC Microvolume UV-Vis Spectrophotometer</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>ND-ONEC-W</td><td></td></tr><tr><td>Ohaus scout portable balance</td><td>Fisher Scientific</td><td>30253024</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>Thermo Scientific</td><td>J

um modelo de camundongo neonatal de enterocolite necrosante e isolamento da lâmina própria para perfil de células imunes

A Neonatal Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis and Lamina Propria Isolation for Immune Cell Profiling

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Necrotizing enterocolitis (NEC) is a severe inflammatory disease of the neonatal intestine, primarily affecting preterm infants. NEC is characterized by ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Fonte: Seman, B. G., et al. Um modelo de imagem neonatal para sepse bacteriana gram-negativa. J. Vis. Exp. (2020)O vídeo demonstra um modelo neonatal de camundongo para estudar infecção sistêmica usando bactérias bioluminescentes encapsuladas. Filhotes neonatais são injetados com suspensões bacterianas de alta ou baixa dose e retornados à mãe para cuidados pós-natais. As bactérias encapsuladas escapam da detecção imune precoce, se espalham sistêmicamente e são visualizadas ao longo do tempo por...

Modelagem da Infecção em Camundongos Neonatais Usando Bactérias Bioluminescentes Encapsuladas

Aqui, é descrito um procedimento para o estabelecimento de uma infecção sistémica no rato neonatal com culturas de Escherichia coli K1. Este procedimento não-invasivo permite a colonização do tracto gastrointestinal, a translocação do agente patogénico para a circulação sistémica, e invasão do sistema nervoso central no plexo coróide.

Modelo não-invasiva da neuropatogênicos Escherichia coli Infecção no Rato Neonatal

Este protocolo fornece as etapas necessárias para estabelecer e avaliar a sepse neonatal em ratos de 7 dias de idade.

Um modelo de Mouse controlado para sepse Neonatal Polymicrobial

Este estudo detalha o processo de quantidades precisas de gavaging de probióticos para camundongos neonatais. A montagem experimental foi otimizada para incluir, mas não está limitada ao probiótico dosagem, métodos de administração e quantificação de bactérias no intestino.

Estudos de probiótico em camundongos neonatais usando Gavage

Enteroids estão emergindo como um novo modelo no estudo de doenças humanas. O protocolo descreve como simular um modelo enteroid de humano enterocolite necrosante usando lipopolissacarídeo (LPS) tratamento do enteroids gerados a partir de tecido neonatal. Enteroids coletados demonstram alterações inflamatórias parecido com aqueles vistos em enterocolite necrosante humana.

Um novo modelo Enteroid epitelial humana de enterocolite necrosante

Desenvolvemos um modelo de coioamnionite para simular a exposição fetal à inflamação materna (FEMI) sem complicações de organismos vivos para examinar os efeitos do FEMI no desenvolvimento do trato intestinal da prole. Isso permite o estudo de causas mecanicistas para o desenvolvimento de lesões intestinais após a coioamnionite.

Um modelo murino de exposição fetal à inflamação materna para estudar os efeitos da coioamnionite aguda no desenvolvimento intestinal recém-nascido

A infecção de camundongos neonatais com bioluminescente E. coli O1:K1:H7 resulta em uma infecção séptica com inflamação pulmonar significativa e patologia pulmonar. Aqui, descrevemos procedimentos para modelar e estudar mais a sepse neonatal utilizando imagens intravitais longitudinais em paralelo com a enumeração de cargas bacterianas sistêmicas, perfil inflamatório e histopatologia pulmonar.

Um modelo de imagem neonatal de sepse bacteriana gram-negativa

Função de barreira epitelial intestinal disregulada e respostas imunológicas são marcas de doença inflamatória intestinal que permanecem mal investigadas devido à falta de modelos fisiológicos. Aqui, descrevemos um modelo de alça intestinal de camundongos que emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado para estudar a permeabilidade mucosa e o recrutamento de leucócitos in vivo.

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

A enterocolite necrosante (NEC) é a doença gastrointestinal (GI) mais grave que ocorre frequentemente em bebês prematuros, especialmente bebês com baixo peso ao nascer, com alta mortalidade e patogênese pouco clara. A causa da NEC pode estar relacionada a anormalidades inflamatórias do sistema de regulação imunológica. Um modelo animal NEC é uma ferramenta indispensável para a pesquisa imunológica da doença NEC. Modelos animais NEC geralmente usam camundongos neonatais C57BL/6J; Os camundongos...

Um modelo de rato BALB/c neonatal de Enterocolite Necrotizante

Este protocolo descreve um modelo in vitro de enterocolite necrosante (ECN), que pode ser usado para estudos mecanísticos da patogênese da doença. Apresenta um chip microfluídico semeado com enteróides intestinais derivados do intestino neonatal humano, células endoteliais e o microbioma intestinal de um neonato com ECN grave.

Modelo Microfluídico de Enterocolite Necrosante Incorporando Enteróides Intestinais Neonatais Humanos e um Microbioma Disbiótico

O parto prematuro (parto &lt; 37 semanas) é um problema de saúde global urgente com opções de prevenção e tratamento abaixo do ideal. Apresentamos um modelo de camundongo de parto prematuro induzido por infecção bacteriana vaginal ascendente e descrevemos como analisar a morbidade e mortalidade neonatal resultante.

Modelagem de infecção vaginal ascendente, parto prematuro e morbidade neonatal em camundongos

Aprenda a induzir enterocolite necrosante em camundongos neonatos e isolar células da lâmina própria para perfil imunológico por citometria de fluxo. Este modelo reproduz características da doença humana em lactentes prematuros.

Um modelo de camundongo neonatal de enterocolite necrosante e isolamento da lâmina própria para perfil de células imunes

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