Name: Avaliação da Dinâmica de Fissão/Fusão Mitocondrial em Células Tubulares Proximais Renais (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-14T14:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprenda a avaliar dinâmicas de fissão e fusão mitocondrial em células tubulares proximais renais usando microscopia confocal e Dendra2. Este método permite rastrear mitocôndrias transplantadas e analisar sua integração funcional.

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<ol><li>Liesa, M., Palacin, M., Zorzano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+in+mammalian+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics in mammalian health and disease.</a> Physiol Rev. 89 (3), 799-845 (2009).</li>
<li>Chen, Z., Berquez, M., Luciani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondria%2C+mitophagy%2C+and+metabolic+disease%3A+towards+assembling+the+puzzle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stress%22%5BJournal%5D)">Mitochondria, mitophagy, and metabolic disease: towards assembling the puzzle.</a> Cell Stress. 4 (6), 147-150 (2020).</li>
<li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+segmentation+and+function+prediction+in+live-cell+images+with+deep+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial segmentation and function prediction in live-cell images with deep learning.</a> Nat Commun. 16, 743(2025).</li>
<li>Jiao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitocytosis%2C+a+migrasome-mediated+mitochondrial+quality-control+process%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Mitocytosis, a migrasome-mediated mitochondrial quality-control process.</a> Cell. 184 (11), 2896-2910.e13 (2021).</li>
<li>Kraus, F., Roy, K., Pucadyil, T. J., Ryan, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Function+and+regulation+of+the+divisome+for+mitochondrial+fission%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Function and regulation of the divisome for mitochondrial fission.</a> Nature. 590 (7844), 57-66 (2021).</li>
<li>He, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GTPBP8+modulates+mitochondrial+fission+through+a+Drp1-dependent+process%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">GTPBP8 modulates mitochondrial fission through a Drp1-dependent process.</a> J Cell Sci. 137 (8), jcs261612(2024).</li>
<li>San-Millán, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+key+role+of+mitochondrial+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxidants%22%5BJournal%5D)">The key role of mitochondrial function in health and disease.</a> Antioxidants. 12 (4), 782(2023).</li>
<li>Ponte, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drp1-mediated+mitochondrial+fission+regulates+calcium+and+F-actin+dynamics+during+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Open%22%5BJournal%5D)">Drp1-mediated mitochondrial fission regulates calcium and F-actin dynamics during wound healing.</a> Biol Open. 9 (5), bio048629(2020).</li>
<li>Sabouny, R., Shutt, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+mitochondrial+dynamics+in+mtDNA+maintenance%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of mitochondrial dynamics in mtDNA maintenance.</a> J Cell Sci. 134 (24), jcs258944(2021).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+tracking+with+two-photon+phosphorescent+terpyridyl+iridium%28III%29+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics tracking with two-photon phosphorescent terpyridyl iridium(III) complexes.</a> Sci Rep. 6, 20887(2016).</li>
<li>Chen, W., Zhao, H., Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+in+health+and+disease%3A+mechanisms+and+potential+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics in health and disease: mechanisms and potential targets.</a> Signal Transduct Target Ther. 8 (1), 333(2023).</li>
<li>Sabouny, R., Shutt, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reciprocal+regulation+of+mitochondrial+fission+and+fusion%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Reciprocal regulation of mitochondrial fission and fusion.</a> Trends Biochem Sci. 45 (7), 564-577 (2020).</li>
<li>Jin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+adaptation+in+cancer+drug+resistance%3A+prevalence%2C+mechanisms%2C+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22J+Hematol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial adaptation in cancer drug resistance: prevalence, mechanisms, and management.</a> J Hematol Oncol. 15 (1), 97(2022).</li>
<li>Wai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+membrane+scaffold+SLP2+anchors+a+proteolytic+hub+in+mitochondria+containing+PARL+and+the+i-AAA+protease+YME1L%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Rep%22%5BJournal%5D)">The membrane scaffold SLP2 anchors a proteolytic hub in mitochondria containing PARL and the i-AAA protease YME1L.</a> EMBO Rep. 17 (12), 1844-1856 (2016).</li>
<li>Schiavon, C. R., Shadel, G. S., Manor, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+mitochondrial+mobility+in+Charcot-Marie-Tooth+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Impaired mitochondrial mobility in Charcot-Marie-Tooth disease.</a> Front Cell Dev Biol. 9, 624823(2021).</li>
<li>Sivakumar, A., Shanmugarajan, S., Subbiah, R., Balakrishnan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiac+mitochondrial+PTEN-L+determines+cell+fate+between+apoptosis+and+survival+during+chronic+alcohol+consumption%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Cardiac mitochondrial PTEN-L determines cell fate between apoptosis and survival during chronic alcohol consumption.</a> Apoptosis. 25 (7-8), 590-604 (2020).</li>
<li>Simula, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+metabolism+sustains+CD8%2B+T+cell+migration+for+an+efficient+infiltration+into+solid+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial metabolism sustains CD8+ T cell migration for an efficient infiltration into solid tumors.</a> Nat Commun. 15 (1), 2203(2024).</li>
<li>Kopek, B. G., Shtengel, G., Xu, C. S., Clayton, D. A., Hess, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlative+3D+superresolution+fluorescence+and+electron+microscopy+reveal+the+relationship+of+mitochondrial+nucleoids+to+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Correlative 3D superresolution fluorescence and electron microscopy reveal the relationship of mitochondrial nucleoids to membranes.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (16), 6136-6141 (2012).</li>
<li>Whelan, D. R., Bell, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+artifacts+in+single+molecule+localization+microscopy%3A+why+optimization+of+sample+preparation+protocols+matters%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Image artifacts in single molecule localization microscopy: why optimization of sample preparation protocols matters.</a> Sci Rep. 5, 7924(2015).</li>
<li>Palmer, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopy+reveals+the+arrangement+of+inner+membrane+protein+complexes+in+mammalian+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopy reveals the arrangement of inner membrane protein complexes in mammalian mitochondria.</a> J Cell Sci. 134 (13), jcs252197(2021).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+interactome+of+intact+mitochondria+by+cross-linking+mass+spectrometry+provides+evidence+for+coexisting+respiratory+supercomplexes%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">The interactome of intact mitochondria by cross-linking mass spectrometry provides evidence for coexisting respiratory supercomplexes.</a> Mol Cell Proteomics. 17 (2), 216-232 (2018).</li>
<li>Karbowski, M., Cleland, M. M., Roelofs, B. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Methods+Enzymol%22">Methods Enzymol</a>. , Elsevier. Netherlands. (2014).</li>
<li>Kleih, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+impact+of+cisplatin+on+mitochondria+induces+ROS+production+that+dictates+cell+fate+of+ovarian+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Dis%22%5BJournal%5D)">Direct impact of cisplatin on mitochondria induces ROS production that dictates cell fate of ovarian cancer cells.</a> Cell Death Dis. 10 (11), 851(2019).</li>
<li>Bouchareb, R., Yu, L., Lassen, E., Daehn, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+conditionally+immortalized+mouse+glomerular+endothelial+cells+with+fluorescent+mitochondria%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of conditionally immortalized mouse glomerular endothelial cells with fluorescent mitochondria.</a> J Vis Exp. (187), e64147(2022).</li>
<li>Chu, C. H., Tseng, W. W., Hsu, C. M., Wei, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+analysis+of+the+mitochondrial+network+morphology+with+applications+in+cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Phys%22%5BJournal%5D)">Image analysis of the mitochondrial network morphology with applications in cancer research.</a> Front Phys. 10, 855775(2022).</li>
<li>Montecinos-Franjola, F., Ramachandran, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontecinos-Franjola%2C+F+%22Methods+Mol+Biol%22">Methods Mol Biol</a>. , Springer, US. (2020).</li>
<li>Gaspar, M. L., Chang, Y. F., Jesch, S. A., Aregullin, M., Henry, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+between+repressor+Opi1p+and+ER+membrane+protein+Scs2p+facilitates+transit+of+phosphatidic+acid+from+the+ER+to+mitochondria+and+is+essential+for+INO1+gene+expression+in+the+presence+of+choline%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interaction between repressor Opi1p and ER membrane protein Scs2p facilitates transit of phosphatidic acid from the ER to mitochondria and is essential for INO1 gene expression in the presence of choline.</a> J Biol Chem. 292 (45), 18713-18728 (2017).</li>
<li>Karbowski, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKarbowski%2C+M+%22Adv+Exp+Med+Biol%22">Adv Exp Med Biol</a>. , Springer, US. (2010).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+quantitatively+revealed+by+STED+nanoscopy+with+an+enhanced+squaraine+variant+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics quantitatively revealed by STED nanoscopy with an enhanced squaraine variant probe.</a> Nat Commun. 11 (1), 3699(2020).</li>
<li>Opstad, I. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+structured+illumination+microscopy+data+of+mitochondria+and+lysosomes+in+cardiomyoblasts+under+normal+and+galactose-adapted+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Data%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional structured illumination microscopy data of mitochondria and lysosomes in cardiomyoblasts under normal and galactose-adapted conditions.</a> Sci Data. 9 (1), 98(2022).</li>
<li>Kunz, T. C., Götz, R., Gao, S., Sauer, M., Kozjak-Pavlovic, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+expansion+microscopy+to+visualize+and+characterize+the+morphology+of+mitochondrial+cristae%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Using expansion microscopy to visualize and characterize the morphology of mitochondrial cristae.</a> Front Cell Dev Biol. 8, 617(2020).</li>
<li>Teixeira, P., Galland, R., Chevrollier, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Super-resolution+microscopies%2C+technological+breakthrough+to+decipher+mitochondrial+structure+and+dynamic%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Cell+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Super-resolution microscopies, technological breakthrough to decipher mitochondrial structure and dynamic.</a> Semin Cell Dev Biol. 159 - 160, 38-51 (2024).</li>
<li>Kirchweger, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Snapshots+of+mitochondrial+fission+imaged+by+cryo-scanning+transmission+electron+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Snapshots of mitochondrial fission imaged by cryo-scanning transmission electron tomography.</a> J Cell Sci. 138 (9), jcs263639(2025).</li>
<li>Collins, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+morphology+and+mitophagy+in+heart+diseases%3A+qualitative+and+quantitative+analyses+using+transmission+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Aging%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial morphology and mitophagy in heart diseases: qualitative and quantitative analyses using transmission electron microscopy.</a> Front Aging. 2, 670267(2021).</li>
<li>Marshall, A. G., Damo, S. M., Hinton, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+focused+ion+beam+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biochem+Sci%22%5BJournal%5D)">Revisiting focused ion beam scanning electron microscopy.</a> Trends Biochem Sci. 48 (6), 585-586 (2023).</li>
<li>Adebayo, M., Singh, S., Singh, A. P., Dasgupta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+fusion+and+fission%3A+the+fine-tune+balance+for+cellular+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial fusion and fission: the fine-tune balance for cellular homeostasis.</a> FASEB J. 35 (6), e21620(2021).</li>
<li>Munro, D., Baldy, C., Pamenter, M. E., Treberg, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+exceptional+longevity+of+the+naked+mole-rat+may+be+explained+by+mitochondrial+antioxidant+defenses%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">The exceptional longevity of the naked mole-rat may be explained by mitochondrial antioxidant defenses.</a> Aging Cell. 18 (3), e12916(2019).</li>
<li>Varuzhanyan, G., Chan, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dynamics+during+spermatogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dynamics during spermatogenesis.</a> J Cell Sci. 133 (14), jcs235937(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Cultura Celularnbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp;</td><td>Meio basal &nbsp;</td><td>(Gibco/Cat. Nº 11320033 )&nbsp;</td><td>Cultura celular tubular proximal &nbsp;</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)&nbsp;</td><td>5-10% de suplementação &nbsp;</td><td>(Biowest/Cat. Nº S181B) e nbsp;</td><td>Enriquecimento do meio cultural &nbsp;</td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>100X&nbsp;</td><td>(Gibco/Cat. Nº 15140122) &nbsp;</td><td>Proteção antibiótica & nbsp;</td></tr><tr><td>Colágeno IV & nbsp;</td><td>revestimento &nbsp;</td><td>(Sigma-C5533-5M)&nbsp;</td><td>Revestimento de placas Ibidi &nbsp;</td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA&nbsp;</td><td>0,25% solução &nbsp;</td><td>(Gibco/Cat. Nº 25200056)&nbsp;</td><td>Destacamento de celas&nbsp;</td></tr><tr><td>Salina Tamponada com Fosfato (PBS)&nbsp;</td><td></td><td>(Gibco/Cat. Nº 10010023 )&nbsp;</td><td>Lavagem de células&nbsp;</td></tr><tr><td><forte>Tratamentos&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cisplatina&nbsp;</td><td>2 & micro; M concentração de trabalho &nbsp;</td><td>(Selleck Chemicals/Cat. Nº S1166) e nbsp;</td><td>Indução de estresse&nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Dimetil Sulfóxido (DMSO)&nbsp;</td><td>Controle de Veículos & NBSP;</td><td>(Fisher Scientific/Cat. Nº D1391) e nbsp;</td><td>Controle de solventes de cisplatina &nbsp;</td></tr><tr><td><forte>Imagem&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Médio Vermelho Livre de Fenol &nbsp;</td><td>Imagem ao vivo &nbsp;</td><td>(Gibco/Cat. Nº 21041025)&nbsp;</td><td>Fluorescência de fundo reduzida&nbsp;</td></tr><tr><td>Biologia Molecular &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>TRIzol&reg; &nbsp;</td><td>Extração de RNA &nbsp;</td><td>(Gibco/Cat. Nº 15596018)&nbsp;</td><td>Isolamento total de RNA &nbsp;</td></tr><tr><td>SYBR Green Master Mix &nbsp;</td><td>qPCR química&nbsp;</td><td>(Thermo Scientific/Cat. Nº K0221)&nbsp;</td><td>Expressão gênica da dinâmica mitocondrial (DNM1L, FIS1, MFN1, MFN2, OPA1) e nbsp;</td></tr><tr><td>Ferramentas Fluorescentes &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dendra2&nbsp;</td><td>Etiqueta matricial mitocondrial &nbsp;</td><td>Laboratório Jacson (PhAMexcisado)&nbsp;</td><td>Repórter fotocomutável (conversão 405nm, imagem 488/561nm) & nbsp;</td></tr><tr><td><forte>Microscópios&nbsp; </forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Confocal &nbsp;</td><td>Leica DMi8&nbsp;</td><td>Imagem de células vivas e FRAP&nbsp;</td><td>lasers de 405nm/488nm/561nm&nbsp;</td></tr><tr><td>Imagem J&nbsp;</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RGB Profiler Plugin&nbsp;</td><td></td><td>https://imagej.net/ij/plugins/rgb-profiler.html.&nbsp;</td><td>Análise de eventos de fusão (sobreposição de sinais vermelho/verde)&nbsp;</td></tr></tbody></table>

avaliação da dinâmica de fissão/fusão mitocondrial em células tubulares proximais renais

Assessment of Mitochondrial Fission/Fusion Dynamics in Kidney Proximal Tubular Cells

Avaliação da Dinâmica de Fissão/Fusão Mitocondrial em Células Tubulares Proximais Renais

Mitochondria are best recognized for their role in ATP synthesis and serve as key regulators of cellular metabolism. Mitochondrial dynamics comprehend the ...

assessment-mitochondrial-fissionfusion-dynamics-kidney-proximal

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fusão mitocondrial foi medida seguindo o equilíbrio da GFP matriz segmentada photoconverted através da rede mitocondrial ao longo do tempo. Até agora, apenas uma célula possa ser sujeita a uma análise de longo horas cinética de cada vez. Nós apresentamos um método que mede simultaneamente várias células, acelerando assim o processo de coleta de dados.

Uma resolução mais rápida, alta, MTPA-GFP baseada em ensaio de fusão mitocondrial aquisição de dados cinéticos de várias células em paralelo usando microscopia confocal

Os efeitos da activação da proteína quinase C (PKC) isozimas de funções mitocondriais associadas com a respiração e fosforilação oxidativa e na viabilidade celular são descritos. A abordagem técnica adapta adenoviral para superexpressar selectivamente as isozimas PKC em cultura primária de células e uma variedade de ensaios para determinar as funções mitocondriais e do estado de energia da célula.

Avaliação de funções mitocondriais e viabilidade celular em células renais Proteína Kinase C superexpressão Isozimas

Aqui, descrevemos como estudar a localização mitocondrial de uma quinase (ciclo celular) e como determinar sua localização submitocondrial, bem como potenciais substratos/alvos mitocondriais. A expressão forçada de proteínas nas mitocôndrias fornece uma ferramenta útil para estudar as consequências funcionais da localização mitocondrial de uma proteína de interesse.

Abordagens experimentais para estudar mitocondrial Localização e função de um ciclo celular Nuclear Kinase, Cdk1

Este protocolo fornece uma abordagem econômica para isolar e caracterizar pilhas do rato primária renal tubular que podem posteriormente ser sub cultivadas para avaliar funções biológicas renal ex vivo, incluindo bioenergética mitocondrial.

Isolamento, caracterização e alto Throughput análise de fluxo extracelular de Mouse primária Renal Tubular as células epiteliais

Aqui, apresentamos um protocolo para analisar mudanças na densidade mitocondrial e distribuição longitudinal por imagens de músculo esquelético vivo usando microscopia confocal para varredura de rede mitocondrial.

Análise da densidade mitocondrial e distribuição longitudinal em fibras musculares esqueléticas vivas de ratos por microscopia confocal

Neste estudo, descrevemos um protocolo passo a passo e enfatizamos os principais detalhes para determinar as características morfológicas das mitocôndrias em células vivas, incluindo preparação de amostras, aquisição de imagens e análise de dados. Este método é comumente usado para examinar a morfologia mitocondrial para estudar várias condições.

Determinação da morfologia mitocondrial em células vivas usando microscopia confocal

Aqui descrevemos o localizador de eventos mitocondriais (MEL), um plugin ImageJ útil na quantificação das mudanças tridimensionais na fissão mitocondrial e na atividade de fusão ao longo do tempo. Também descrevemos um pipeline de processamento de imagem útil para a limpeza de micrografias antes da análise no ImageJ.

Compreendendo as mudanças na morfologia mitocondrial por meio de micrografias de fluorescência dinâmicas e tridimensionais

Aqui, descrevemos um protocolo in vitro para modelar danos por hipóxia/reoxigenação nas células epiteliais tubulares proximais, altamente metabólicas. Este modelo foi projetado para induzir danos induzidos por estresse metabólico, que podem ser medidos pela expressão de marcadores de dano dos túbulos proximais e avaliação da função respiratória mitocondrial.

Modelagem de Hipóxia/Lesão por Reoxigenação em Células Epiteliais Tubulares Proximais

Injeções locais de um corante mitocondrial marcando mitocôndrias da célula terminal de Schwann in vivo para microscopia confocal. Esse método utiliza prova de conceito demonstrada em tecido muscular esquelético de camundongos com músculo saudável ou doente para fornecer visualização mitocondrial de alta resolução.

Métodos para Quantificação In Situ da Morfologia Mitocondrial em Células Musculares e Terminais de Schwann de Camundongos

Grânulos de estresse (SGs) são grânulos de RNA citoplasmático contendo partículas paralisadas ribonucleoproteínas (RNPs), e importante na resposta celular a várias tensões. Dinâmica da SGS pode ser seguido em células vivas, visualizando a localização de um componente marcado da SGS em células primárias transfectadas após o estresse.

Visualização de G3BP Estresse grânulos Dynamics em pilhas ao vivo

Aprenda a avaliar dinâmicas de fissão e fusão mitocondrial em células tubulares proximais renais usando microscopia confocal e Dendra2. Este método permite rastrear mitocôndrias transplantadas e analisar sua integração funcional.

Avaliação da Dinâmica de Fissão/Fusão Mitocondrial em Células Tubulares Proximais Renais

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