Name: Geração de um modelo baseado em organoides prostáticos de camundongos para estudar as interações hospedeiro-patógeno (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Aprenda a gerar um modelo 2D derivado de organoides prostáticos de camundongos para estudar interações hospedeiro-patógeno com UPEC. Este protocolo preserva a diversidade epitelial e permite acesso à superfície apical.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>Placas de 48 poços</td><td>Sarstedt</td><td>83.3923</td><td>Formato inferior: plano</td></tr><tr><td>5&alfa;-Androstan-17&beta;-ol-3-uma dihidrotestosterona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A8380</td><td>Ele foi designado como DHT. Solução original 10&mu; M em 100% etanol</td></tr><tr><td>Slide PET de 8 poços com 40 eletrodos por poço &nbsp;</td><td>Biofísica Aplicada</td><td>8W10E+</td><td>Slides usados para medições TEER</td></tr><tr><td>Placas de 96 poços</td><td>Sarstedt</td><td>82.1583</td><td>Formato inferior: cônico</td></tr><tr><td>Advance Dulbecco' s Eagle Medium modificado/F12&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12634028</td><td>Foi designado adDMEM/F12+/+ quando suplementado com 10 mmol L&minus; 1 HEPES e 1x GlutaMAX</td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Roth</td><td>K029.2&nbsp;</td><td>Estoque de concentração 100 mg/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-CD24a</td><td>Proteintech</td><td>10600-1-AP</td><td>Anticorpo primário; diluição 1:100 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anti-Citoqueratina 5 Alexa Fluor 647 anticorpo &nbsp;</td><td>Abcam&nbsp;</td><td>ab193895</td><td>Anticorpo primário; diluição 1:100 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>anti-Rabbit IgG Alexa Fluor 488&nbsp; anticorpo</td><td>Invitrogen</td><td>A21441</td><td>Anticorpo secundário; diluição 1:500 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Anticorpo policlonal anti-ZO-1</td><td>Proteintech</td><td>21773-1-AP</td><td>Anticorpo primário; diluição 1:750 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>B27, 50x</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12587010</td><td></td></tr><tr><td>Bovines Serumalbumin (BSA) Fraktion V, NZ-Origin</td><td>Roth</td><td>8076.3</td><td>Componente do buffer de bloqueio usado a 1% em 1x PBS</td></tr><tr><td>poços micro-slide 8 com câmara</td><td>Ibidi</td><td>80806</td><td>Modificação de superfície: ibiTreat</td></tr><tr><td>Tubo cônico (15 mL)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T1943</td><td>O fundo plano é melhor para pellets pequenos. &nbsp;</td></tr><tr><td>Etilenediamina dissódica tetraacetato 2H2O (EDTA)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>8043.2</td><td>Caseiro: 93,0 g em 400 mL de H2O, ajuste o pH para 8,0, ajuste o volume com H2O até 500 mL; 0,5 M EDTA; Componente do buffer do citometro de fluxo</td></tr><tr><td>Solução Salada Equilibrada de Dulbecco (DPBS)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td>PBS</td></tr><tr><td>Microscópio ECHO Revolve&nbsp;</td><td>ECHO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ECIS&nbsp; Z-Theta -&nbsp; Sistema de análise de células baseado em impedância</td><td>Biofísica Aplicada</td><td>ECIS&nbsp; Z-Theta</td><td>O sistema inclui: estações de 16 e/ou 96 poços; módulo de controle externo; Laptop PC; software de controle, aquisição e exibição ECIS; módulo de campo elevado para migração e eletroporação automatizada de células &nbsp;</td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS) Superior</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S0615</td><td>Componente do buffer de citômetro de fluxo; componente do meio de cultivo da linha celular 293T; componente do meio de cultura HEK293T linha celular</td></tr><tr><td>Flash Phalloidin Red 594</td><td>Biolenda</td><td>424203</td><td>Diluição 1:250 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>Buffer de citômetro de fluxo</td><td></td><td></td><td>1x PBS, 10% FBS, 5 mM EDTA</td></tr><tr><td>Gentamicina&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G1272</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050-038</td><td>Dipeptídeo L-alanyl-L-glutamina, componente do adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Medidor de Densidade de Células Harvard Biochrom Ultrospec 10</td><td>Fisher Scientific</td><td>10704417</td><td></td></tr><tr><td>Coloração Deep Red HCS CellMask</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>H32721</td><td>Diluição 1:1.000 em 1x PBS 1%BSA</td></tr><tr><td>HEK293T linha celular transfectada com vetor de expressão de Noggin-Fc em camundongos</td><td>Linha celular do Prof. Dr. Clevers</td><td></td><td>Usado para produzir Noggin; meio de cultura: 500ml DMEM, alta glicose, GlutaMAX, piruvato (Gibco Life Technologies, 31966)+ 50ml FBS; Farin et al. Gastroenterology 143.6 (2012): 1518-1529</td></tr><tr><td>HEPES&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630056</td><td>Componente do adDMEM/F12+/+&nbsp;</td></tr><tr><td>Hoechst 33342&nbsp;</td><td>Tecnologias de Vida</td><td>H3570</td><td>Diluição 1:5.000 em 1x PBS</td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico humano (EGF) e nbsp;</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>Estoque de concentração 500 & micro; g/mL</td></tr><tr><td>Anéis de inoculação</td><td>Sarstedt</td><td>86.1567.010</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de inoculação</td><td>Sarstedt</td><td>62.515.006</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal Leica Stellaris 5</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria Bertani (caldo LB)</td><td>Roth&nbsp;</td><td>X968.1</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>356231</td><td>Matriz Extracelular (ECM)</td></tr><tr><td>N-Acetilcisteína&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9165-25G</td><td>Estoque de concentração 500 mM</td></tr><tr><td>Noggin CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NovoCyte Quanteon&nbsp;</td><td>Agilent</td><td></td><td>Citômetro de Fluxo</td></tr><tr><td>Paraformaldeído (PFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P6148</td><td>usado a 4% em 1x PBS, 4% de sacarose</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>Ant-pm-1</td><td></td></tr><tr><td>Q-VETTES semi-micro</td><td>Ratiolab</td><td>2712120</td><td></td></tr><tr><td>RHOKi (Y-27632)</td><td>AbMole</td><td>M1817</td><td>Inibidor de RhoA/ROCK; Estoque de concentração 10 mM</td></tr><tr><td>R-spodin1 CM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>R-Spondin1 expressando a linha celular 293T</td><td>Sigma Aldrich</td><td>SCC111</td><td>Usado para produzir R-spo1 CM; meio de cultura: 500ml DMEM, alta glicose, GlutaMAX, piruvato (Gibco Life Technologies, 31966)+ 60ml FBS&nbsp;</td></tr><tr><td>TGF & beta; i (A-83-01)</td><td>Tocris</td><td>2939</td><td>inibidor ALK4/5/7; Estoque de concentração 5 mM&nbsp;</td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9284</td><td>usado 0,5% diluído no PBS 1x</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzima&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Agente enzimático de dissociação celular para digerir organoides prostáticos de camundongos 3D</td></tr><tr><td>Cepa uropatogênica Escherichia coli cepa UTI89</td><td>Cepa WT do Prof. Dr. Dobrindt</td><td></td><td>transformado com pFPV-mCherry (addgene #20956)</td></tr></tbody></table>

geração de um modelo baseado em organoides prostáticos de camundongos para estudar as interações hospedeiro-patógeno

Generation of a Mouse Prostate Organoid-Based Model for Studying Host-Pathogen Interactions

Geração de um modelo baseado em organoides prostáticos de camundongos para estudar as interações hospedeiro-patógeno

Aging men are highly affected by prostate diseases, such as benign prostatic hyperplasia, prostatitis, and prostate cancer. Together, these conditions ...

generation-mouse-prostate-organoid-based-model-for-studying-host

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Organoides derivados de tumores são um tipo de modelo de cultura de células 3D que pode manter as características patológicas e a linhagem celular específica de órgãos de tumores. No protocolo de exemplo, veremos os cientistas gerarem organoides a partir de um tumor de próstata a partir de um modelo de camundongo geneticamente modificado.

Preparação de organoides a partir de tumores: um modelo de tumor 3D in vitro

Neste vídeo, demonstramos a cultura de células epiteliais isoladas da próstata de camundongo usando uma técnica de cultura baseada em anel de gel de matriz. Essa abordagem pode fornecer informações complementares sobre a capacidade de diferenciação das células epiteliais da próstata para formar estruturas glandulares 3D em resposta à manipulação genética ou farmacológica.

Ensaio de organoide de próstata: uma técnica de cultura ex vivo baseada em anel de gel de matriz para estudar a capacidade de diferenciação de células epiteliais da próstata

As culturas derivadas de células-tronco abrigam um tremendo potencial para modelar doenças infecciosas. Aqui, a cultura de organoides gástricos de camundongos e humanos derivados de células-tronco adultas é descrita. Os organoides são microinjetados com o patógeno gástrico Helicobacter pylori.

Organóides como modelo para Doenças Infecciosas: Cultura dos Direitos Humanos e Organóides e estômago murino Microinjection do Helicobacter pylori

Camundongos geneticamente modificados são modelos úteis para investigar mecanismos de câncer de próstata. Aqui nós apresentamos um protocolo para identificar e dissecar os lobos da próstata de um sistema urogenital do rato, diferenciá-los com base em histologia e isolar e cultura primária de células da próstata em vitro como esferoides para análises a jusante.

Identificação, caracterização histológica e dissecação dos lobos da próstata do rato para em Vitro Spheroid 3D modelos de cultura

Aqui, apresentamos um protocolo para orientar a manipulação de organoides humano de próstata primário, em seguida, sugerir pontos de extremidade para avaliar o fenótipo. Semeadura, manutenção de cultura, recuperação de gel da matriz, quantificação morfológica, incorporação e seccionamento, FFPE seccionamento, toda a montagem coloração e aplicação de ensaios comerciais são descritos.

Manipulação e avaliação da cultura de organoides humano de próstata primário

Nós mostramos um método para a necropsia e a dissecção de modelos do cancro da próstata do rato, focalizando na dissecção do tumor da próstata. Um protocolo passo a passo para a geração de organóides do tumor da próstata do rato é apresentado igualmente.

Geração de organóides tumorais de modelos de camundongo geneticamente modificados de câncer de próstata

Os organóides da próstata do rato representam um contexto prometedor para avaliar os mecanismos que regulam a diferenciação. Este artigo descreve uma abordagem melhorada para estabelecer organóides da próstata e introduz métodos para (1) coletar lysato de proteína de organóides e (2) corrigir e manchar organóides para microscopia confocal de montagem inteira.

Avaliando a capacidade de diferenciação das células epitelias da próstata do camundongo usando a cultura organóide

Apresentado aqui é um protocolo para estudar as respostas farmacológicas em organóides epitelia da próstata. Organóides se assemelham à biologia in vivo e recapitulam a genética do paciente, tornando-os sistemas modelo atraentes. Organóides da próstata podem ser estabelecidos a partir de próstatas wildtype, modelos de camundongos geneticamente modificados, tecido humano benigno, e câncer de próstata avançado.

Culturas organóides da próstata como ferramentas para traduzir genótipos e perfis mutacionais para respostas farmacológicas

Culturas tridimensionais de amostras de BMPC pacientes e xenoenxertos de câncer de próstata metastático mantêm a heterogeneidade funcional de seus tumores originais resultando em cistos, esferoides e organoides complexos, semelhantes a tumores. Este manuscrito fornece uma estratégia de otimização e protocolo para a cultura 3D de amostras derivadas de pacientes heterogêneos e sua análise utilizando IFC.

Estabelecimento e Análise de Organoides Tridimensionais (3D) derivados de amostras de metástase óssea do câncer de próstata paciente e seus Xenoenxertos

A heterogeneidade do câncer de próstata e a resistência ao tratamento continuam sendo desafios. Descrevemos um protocolo para gerar organoides derivados de pacientes (PDOs) que preservam as principais características do tumor parental. Este modelo padronizado suporta a triagem de medicamentos e os avanços da medicina de precisão.

Estabelecimento e manutenção de organoides de câncer de próstata derivados de pacientes: um protocolo experimental detalhado

O estudo apresenta um método para investigação in vitro de infecção bacteriana utilizando organoides intestinais derivados de células-tronco teciduais. O protocolo descreve como cultivar e diferenciar organoides em duas dimensões, infectá-los com Escherichia coli invasiva aderente e avaliar leituras-chave, incluindo ruptura da barreira epitelial, imagem de infecção e resposta de RNA epitelial.

Uma cultura organoide bidimensional em extrato de invasina ou membrana basal para estudar as interações hospedeiro-bactéria

Aprenda a gerar um modelo 2D derivado de organoides prostáticos de camundongos para estudar interações hospedeiro-patógeno com UPEC. Este protocolo preserva a diversidade epitelial e permite acesso à superfície apical.

Geração de um modelo baseado em organoides prostáticos de camundongos para estudar as interações hospedeiro-patógeno

Explorar mais vídeos