Modelos camundongos de epididimite induzidos por padrões moleculares associados a patógenos

Investigamos o impacto da inflamação na fisiologia do epidídimo na fertilidade masculina. Injeção compartimentada precisa de indutores inflamatórios sem danos. O ducto epididimal em modelos de camundongos requer uma combinação avançada de habilidades cirúrgicas e treinamento.

Para começar, coloque o animal anestesiado em posição supina no campo cirúrgico. Usando um aparador elétrico, realize uma tricotomia do abdômen do camundongo para remover completamente o pelo. Depois, use algodão estéril embebido com solução de clorexidina a 0,25%.

E depois com álcool para realizar a abspsia abdominal. Com um bisturi tamanho 15, faça uma incisão vertical de aproximadamente quatro milímetros no lado direito da parede abdominal. Agora, separe suavemente a pele com pinças cirúrgicas angulares de ponta romba.

Depois, usando o mesmo bisturi, faça outra incisão vertical de aproximadamente quatro milímetros no peritônio ao lado da primeira incisão. Levante cuidadosamente o epidídimo no testículo da cavidade abdominal empurrando suavemente o lado direito do escroto. Usando pinças cirúrgicas curvas, puxe suavemente o tecido adiposo branco do epidídimo para localizar o segmento inicial do epidídimo.

Com a ajuda do tecido adiposo branco epididimário, exponha o segmento inicial no local da incisão. Em seguida, posicione a seringa Hamilton pré-carregada com a solução de injeção em um ângulo de aproximadamente 90 graus paralelo ao segmento número um do segmento inicial. Insira cuidadosamente a agulha no espaço intersticial com o chanfro orientado para baixo.

Em seguida, posicione as pinças cirúrgicas curvas no local de inserção da agulha e belisque suavemente a cápsula epididimal e a agulha. Pressione lentamente o êmbolo da seringa, até que toda a solução do estímulo tenha sido injetada. Mantendo as pinças cirúrgicas curvas no lugar, remova cuidadosamente a agulha e libere as pinças cirúrgicas curvas após aproximadamente 30 segundos.

Em seguida, usando o tecido adiposo branco epididimo, retorne suavemente o tecido testicular à cavidade abdominal. Identifique o peritônio e feche-o fazendo dois pontos de sutura usando um suporte de agulha e uma sutura cirúrgica tamanho cinco-0, e feche a incisão na pele com dois pontos de sutura. Após a cirurgia, observe o camundongo para garantir a recuperação adequada no pós-operatório.

Após administrar a anestesia, coloque o rato em posição supina no campo cirúrgico. Coloque o dedo indicador e o polegar abaixo do escroto para palpar e confirmar a posição dos testículos e do epidídimo. Se necessário, massageie suavemente as laterais do abdômen em direção ao escroto para guiar os testículos e o epidídimo na posição.

Usando uma caneta aparadora elétrica, realize uma tricotomia do escroto para remover completamente os pelos e desinfete a área com algodão estéril embebido em solução de clorexidina 0,25% e depois com álcool. Com o dedo indicador e o polegar abaixo do escroto, estique-se suavemente a pele do escroto. Usando um bisturi tamanho 15, faça uma incisão vertical de aproximadamente dois milímetros na porção medial do escroto.

Agora, mova suavemente o testículo e o epidídimo esquerdos de volta para a cavidade abdominal, mantendo o testículo e o epidídimo direitos no escroto. Com o dedo indicador e o polegar posicionados abaixo do testículo e epidídimo direitos, mantenha a pele escrotal suavemente esticada. Depois, usando pinças cirúrgicas angulares de extremidade romba, abra e feche cuidadosamente as pontas sobre a fáscia espermática interna para romper a fáscia espermática interna e a túnica vaginal.

Em seguida, alivie a pressão do dedo indicador e do polegar e insira a pinça cirúrgica inclinada pela abertura da túnica vaginal em direção à base do escroto. Usando a pinça, puxe cuidadosamente a gordura epidídima distal para localizar o epidídimo da cauda. Agora localize o canal deferente e posicione as pinças cirúrgicas retas abaixo dele.

Coloque a pinça de bulldog no canal deferente, garantindo espaço suficiente entre o epidídimo da cauda e a pinça. Em seguida, posicione a seringa Hamilton pré-carregada com a solução de injeção em um ângulo de aproximadamente 10 a 15 graus paralelo ao canal deferente e insira a agulha no canal deferent com o bisel voltado para cima. Aperte suavemente a pinça cirúrgica reta para liberar o canal deferente e pressione lentamente o êmbolo da seringa para injetar toda a solução do estímulo.

Agora, remova a pinça cirúrgica reta. Usando a pinça cirúrgica curva, belisque suavemente a região ao redor do local de inserção da agulha e, em seguida, retire cuidadosamente a agulha da seringa. Após aproximadamente 30 segundos, remova as pinças cirúrgicas curvas e a pinça de buldogue e retorne suavemente o canal deferente ao escroto.

Em seguida, identifique a túnica vaginal e feche-a com um ponto de sutura usando um suporte de agulha e uma sutura cirúrgica tamanho cinco-0. Usando o dedo indicador, empurre suavemente o testículo e o epidídimo direitos de volta para o abdômen e mova o testículo e o epidídimo esquerdos para dentro do escroto. Por fim, feche a incisão cutânea escrotal com dois pontos de sutura usando um suporte de agulha e pontos cirúrgicos tamanho 5-0, e observe o camundongo para garantir a recuperação adequada no pós-operatório.

A injeção intersticial no segmento inicial resultou na restrição do corante azul Evans injetado principalmente ao segmento um por até 30 minutos após a injeção e posteriormente se difundindo para segmentos vizinhos do segmento inicial e do epidídimo capular. A injeção intravassala no canal deferente confinou o corante azul Evans dentro do lúmen do segmento 10 por até 30 minutos após a injeção. Fotomicrografias histológicas confirmaram que as injeções de controle fisiológico não alteraram a morfologia do epididimo 72 horas após o tratamento.

A injeção intersticial de LPS no segmento inicial induziu edema intersticial e infiltrações intensas de células imunes intersticiais, intraepiteliais e intraluminais 72 horas após o tratamento. A injeção intravasal de LPS ou LTA no epidídimo da cauda produziu edema intersticial e infiltrações de células imunes nos compartimentos intersticial e intraluminal 72 horas após o tratamento. Falta de modelos animais reprodutíveis que estudem inflamação epididimal localizada e seu impacto na fertilidade masculina.

A injeção regional direta de substâncias químicas inflamativas permite uma análise precisa das respostas imunes específicas de regiões nos desfechos do epidídimo.