Name: Estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 51 s
Description: Aprenda a estabelecer organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago. Este protocolo elimina a variabilidade entre pacientes para estudar interações tumor-estroma.

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<ol><li>Sung, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Cancer+Statistics+2020%3A+GLOBOCAN+estimates+of+incidence+and+mortality+worldwide+for+36+cancers+in+185+countries%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J+Clin%22%5BJournal%5D)">Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries.</a> CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).</li>
<li>Abbas, G., Krasna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Cardiothorac+Surg%22%5BJournal%5D)">Overview of esophageal cancer.</a> Ann Cardiothorac Surg. 6 (2), 131-136 (2017).</li>
<li>Morgan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+colorectal+cancer+in+2020+and+2040%3A+Incidence+and+mortality+estimates+from+GLOBOCAN%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Global burden of colorectal cancer in 2020 and 2040: Incidence and mortality estimates from GLOBOCAN.</a> Gut. 72 (2), 338-344 (2023).</li>
<li>Lagergren, J., Smyth, E., Cunningham, D., Lagergren, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oesophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Oesophageal cancer.</a> Lancet. 390 (10110), 2383-2396 (2017).</li>
<li>Lordick, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oesophageal+cancer%3A+ESMO+Clinical+Practice+Guidelines+for+diagnosis%2C+treatment+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Oncol%22%5BJournal%5D)">Oesophageal cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up.</a> Ann Oncol. 27 (suppl 5), v50-v57 (2016).</li>
<li>Chhabra, Y., Weeraratna, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblasts+in+cancer%3A+Unity+in+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Fibroblasts in cancer: Unity in heterogeneity.</a> Cell. 186 (8), 1580-1609 (2023).</li>
<li>Caligiuri, G., Tuveson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+fibroblasts+in+cancer%3A+Perspectives+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">Activated fibroblasts in cancer: Perspectives and challenges.</a> Cancer Cell. 41 (3), 434-449 (2023).</li>
<li>Mezawa, Y., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+roles+of+tumor-+and+metastasis-promoting+carcinoma-associated+fibroblasts+in+human+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Tissue+Res%22%5BJournal%5D)">The roles of tumor- and metastasis-promoting carcinoma-associated fibroblasts in human carcinomas.</a> Cell Tissue Res. 365 (3), 675-689 (2016).</li>
<li>Mezawa, Y., Orimo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+heterogeneity%2C+stability+and+plasticity+in+tumor-promoting+carcinoma-associated+fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">Phenotypic heterogeneity, stability and plasticity in tumor-promoting carcinoma-associated fibroblasts.</a> FEBS J. 289 (9), 2429-2447 (2022).</li>
<li>Qiu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts%3A+An+emerging+target+against+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts: An emerging target against esophageal squamous cell carcinoma.</a> Cancer Lett. 546, 215860(2022).</li>
<li>Xue, M., Tong, Y., Xiong, Y., Yu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+cancer-associated+fibroblasts+in+the+progression%2C+therapeutic+resistance+and+targeted+therapy+of+oesophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Role of cancer-associated fibroblasts in the progression, therapeutic resistance and targeted therapy of oesophageal squamous cell carcinoma.</a> Front Oncol. 13, 1257266(2023).</li>
<li>Dunbar, K. J., Wong, K. K., Rustgi, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+fibroblasts+in+esophageal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated fibroblasts in esophageal cancer.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 17 (5), 687-695 (2024).</li>
<li>Pimkhaokham, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonrandom+chromosomal+imbalances+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+cell+lines%3A+Possible+involvement+of+the+ATF3+and+CENPF+genes+in+the+1q32+amplicon%5BTitle%5D)+AND+%22Jpn+J+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Nonrandom chromosomal imbalances in esophageal squamous cell carcinoma cell lines: Possible involvement of the ATF3 and CENPF genes in the 1q32 amplicon.</a> Jpn J Cancer Res. 91 (11), 1126-1133 (2000).</li>
<li>Kijima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+organoids+reveal+therapy+resistance+of+esophageal+and+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional organoids reveal therapy resistance of esophageal and oropharyngeal squamous cell carcinoma cells.</a> Cell Mol Gastroenterol Hepatol. 7 (1), 73-91 (2019).</li>
<li>Fuchino, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+residual+cancer+by+comparison+of+a+pair+of+organoids+established+from+a+patient+with+esophageal+squamous+cell+carcinoma+before+and+after+neoadjuvant+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Cell%22%5BJournal%5D)">Characterization of residual cancer by comparison of a pair of organoids established from a patient with esophageal squamous cell carcinoma before and after neoadjuvant chemotherapy.</a> Hum Cell. 37 (2), 491-501 (2024).</li>
<li>Shen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancing+precision+medicine+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma+using+patient-derived+organoids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Advancing precision medicine in esophageal squamous cell carcinoma using patient-derived organoids.</a> J Transl Med. 22 (1), 1168(2024).</li>
<li>Zhang, S., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+to+establish+patient-derived+xenograft+and+organoid+for+radiosensitivity+of+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol to establish patient-derived xenograft and organoid for radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma.</a> STAR Protoc. 5 (4), 103273(2024).</li>
<li>Miyoshi, H., Stappenbeck, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+and+genetic+modification+of+gastrointestinal+stem+cells+in+spheroid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion and genetic modification of gastrointestinal stem cells in spheroid culture.</a> Nat Protoc. 8 (12), 2471-2482 (2013).</li>
<li>Mashima, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((KIF24+depletion+induces+clustering+of+supernumerary+centrosomes+in+PDAC+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells.</a> Life Sci Alliance. 5 (11), e202201470(2022).</li>
<li>Hogstrom, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+isolation+of+hormone+receptor-positive+breast+cancer+organoids+and+fibroblasts+reveals+stroma-mediated+resistance+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Simultaneous isolation of hormone receptor-positive breast cancer organoids and fibroblasts reveals stroma-mediated resistance mechanisms.</a> J Biol Chem. 299 (8), 105021(2023).</li>
<li>Schuth, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patient-specific+modeling+of+stroma-mediated+chemoresistance+of+pancreatic+cancer+using+a+three-dimensional+organoid-fibroblast+co-culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Patient-specific modeling of stroma-mediated chemoresistance of pancreatic cancer using a three-dimensional organoid-fibroblast co-culture system.</a> J Exp Clin Cancer Res. 41 (1), 312(2022).</li>
<li>Farin, H. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Colorectal+cancer+organoid-stroma+biobank+allows+subtype-specific+assessment+of+individualized+therapy+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Colorectal cancer organoid-stroma biobank allows subtype-specific assessment of individualized therapy responses.</a> Cancer Discov. 13 (10), 2192-2211 (2023).</li>
<li>Zapatero, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trellis+tree-based+analysis+reveals+stromal+regulation+of+patient-derived+organoid+drug+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Trellis tree-based analysis reveals stromal regulation of patient-derived organoid drug responses.</a> Cell. 187 (25), 7335-7349 (2024).</li>
<li>Rademaekers, M., Johansson, E. O., Johansson, E., Roberg, K., Wiechec, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor-matched+and+unmatched+cancer+associated+fibroblasts+exhibit+differential+effect+on+proliferation+and+FMOD+and+MMP9+gene+expression+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+cells+when+co-cultured+in+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell+Int%22%5BJournal%5D)">Tumor-matched and unmatched cancer associated fibroblasts exhibit differential effect on proliferation and FMOD and MMP9 gene expression in head and neck squamous cell carcinoma cells when co-cultured in spheroids.</a> Cancer Cell Int. 24 (1), 190(2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Antena parabólica de 100 mm</td><td>TPP</td><td>93100</td><td></td></tr><tr><td>100x Penicilina-Estreptomicina (PS)</td><td>Nacalai</td><td>26253-84</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de 15 ml</td><td>FastGene</td><td>FG2001</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura celular de 24 poços</td><td>TPP</td><td>92024</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura celular de 48 poços</td><td>TPP</td><td>92448</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de 50 ml</td><td>FastGene</td><td>FG2004</td><td></td></tr><tr><td>Antena parabólica de 60 mm</td><td>TPP</td><td>93060</td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura celular de 6 poços</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>A83-01</td><td>Cayman</td><td>9001799</td><td></td></tr><tr><td>DMEM Avançado/F12&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td>Meio basal organoide = DMEM avançado/F12 + GlutaMAX + 1x PS</td></tr><tr><td>Alexa488 anti-mouse IgG</td><td>Invitrogen</td><td>A11029</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>ThermoFisher</td><td>15290018</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Vimentina (V9)</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-6260</td><td>1/500 diluição para uso</td></tr><tr><td>B-27</td><td>ThermoFisher</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>Filtro de tampa de garrafa</td><td>Sartorius</td><td>180F15</td><td></td></tr><tr><td>Filtro celular, 100 & micro; m pore</td><td>BD Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase, Tipo I</td><td>SIGMA</td><td>C0130</td><td></td></tr><tr><td>Dishe de 60 mm revestido com colágeno</td><td>IWAKI</td><td>4010-010</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sulfóxido (DMSO)</td><td>Wako</td><td>043-07216</td><td></td></tr><tr><td>Dispase I</td><td>GODO SHUSEI</td><td>386-02271</td><td></td></tr><tr><td>Eagle Médio Modificado (DMEM) de Dulbecco</td><td>Nacalai</td><td>08459-64</td><td></td></tr><tr><td>ECLIPSE Ti2</td><td>Nicon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal (FBS)</td><td>SERANA</td><td>S-FBS-CO-015</td><td></td></tr><tr><td>Meio de Crescimento de Fibroblastos 2</td><td>PromoCell</td><td>C-23020</td><td>Meio de fibroblastos-1 = Meio de crescimento de fibroblastos 2</td></tr><tr><td>G418</td><td>Invivogen</td><td>ANT-GN-1</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HFDM-1</td><td>KSK</td><td>87-160</td><td>Fibroblasto médio-2 = HFDM-1 + 1% FBS + 1 x PS</td></tr><tr><td>Hoechst33342&nbsp;</td><td>Nacalai</td><td>04929-82</td><td></td></tr><tr><td>Higromicina</td><td>Invivogen</td><td>ANT-HG-1</td><td></td></tr><tr><td>Sistema IncuCyte</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Células L-WRN</td><td>ATCC</td><td>CRL-3276</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354234</td><td>Matriz de Membrana do Embasamento = Matrigel</td></tr><tr><td>N2</td><td>ThermoFisher</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>N-acetil-L-Cisteína</td><td>Wako</td><td>017-05131</td><td></td></tr><tr><td>Nicotinamida</td><td>TCI</td><td>N0078</td><td></td></tr><tr><td>Soro Tamponado com Fosfato (PBS)</td><td>Nacalai</td><td>14249-24</td><td></td></tr><tr><td>Primocin</td><td>Invivogen</td><td>ANT-PM-05</td><td></td></tr><tr><td>EGF humano recombinante</td><td>PEPROTECH</td><td>AF-100-15</td><td></td></tr><tr><td>FGF-10 humano recombinante</td><td>PEPROTECH</td><td>PEP-100-26</td><td></td></tr><tr><td>SB202190</td><td>Selleck</td><td>S1077</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi, nº 11</td><td>Feather</td><td>8-3086-02</td><td></td></tr><tr><td>STEMFULL</td><td>Baquelite sumitomo</td><td>MS-90150</td><td>Tubo de baixa fixação de 15 mL = STEMFULL</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Gibco</td><td>12605028</td><td>Tripsina para organoide = TrypLE Express</td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Nacalai</td><td>35556-44</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>Selleck</td><td>S1049</td><td></td></tr></tbody></table>

estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago

Establishment of Tumor Organoids, Carcinoma-Associated Fibroblasts, and Counterpart Fibroblasts from the Same Esophageal Cancer Patient

Estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago

In esophageal squamous cell carcinoma (ESCC), the acquisition of treatment resistance and tumor recurrence remain major clinical challenges. ...

establishment-tumor-organoids-carcinoma-associated-fibroblasts

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Pesquisa sobre o Câncer

Este protocolo descreve os métodos de subcultura e criopreservação de organoides adenocarcinoma esofágico com e sem digestão celular única para permitir que os pesquisadores escolham estratégias apropriadas com base em seu desenho experimental.

Subcultura e Criopreservação de Organoides Adenocarcinoma Esofágico: Prós e Contras para Digestão Celular Única

Este protocolo descreve os principais passos para gerar e caracterizar organoides 3D oro-esofágicos murinos que representam lesões normais, pré-neoplásicas e de carcinoma espinocelular induzidas por carcinogênese química.

Modelagem do carcinoma epidermóide orco-esofágico em organoides 3D

Co-culturas organóide-fibroblastos fornecem um modelo para estudar o nicho de células-tronco in vivo . Aqui é descrito um protocolo para co-culturas esofágico-organóide-fibroblasto. Além disso, imagens de montagem inteira são usadas para visualizar a interação fibroblasto-organoide.

Caracterização funcional e visualização de fibroblastos esofágicos utilizando co-culturas organoides

Os organoides tumorais revolucionaram a pesquisa do câncer e a abordagem da medicina personalizada. Eles representam um modelo de tumor clinicamente relevante que permite aos pesquisadores ficar um passo à frente do tumor na clínica. Este protocolo estabelece organoides tumorais a partir de amostras de tecido tumoral pancreático fresco e xenoenxertos derivados do paciente de origem adenocarcinoma pancreático.

Estabelecimento de organoides tumorais derivados do câncer de pâncreas e fibroblastos a partir de tecido fresco

O presente protocolo descreve o estabelecimento e a análise histológica de modelos organoides esofágicos que representam diferentes estágios da progressão tumoral. Este método permite que os pesquisadores estudem mudanças na morfologia celular, organização espacial e padrões de expressão de marcadores moleculares durante a transição de tecidos normais para cancerígenos.

Estabelecimento e Análise Histológica de Organoides Esofágicos Modelando a Progressão de Tecidos Normais para Cancerosos

Para permitir a detecção altamente sensível do câncer colorretal humano divulgação células (CRC) colonizar os tecidos, mostramos aqui um protocolo para transdução eficiente de particulas de Lentivirus de proteína verde fluorescente (GFP) em células de organoides CRC PDX-derivado antes da sua injeção em ratos destinatários, com a observação microscópica de estéreo-fluorescência.

Deteção de alta sensibilidade de Micrometastases gerado pelo Organoids GFP de Lentivirus-transfectadas cultivadas de um Tumor de cólon derivado de paciente

Culturas tridimensionais de amostras de BMPC pacientes e xenoenxertos de câncer de próstata metastático mantêm a heterogeneidade funcional de seus tumores originais resultando em cistos, esferoides e organoides complexos, semelhantes a tumores. Este manuscrito fornece uma estratégia de otimização e protocolo para a cultura 3D de amostras derivadas de pacientes heterogêneos e sua análise utilizando IFC.

Estabelecimento e Análise de Organoides Tridimensionais (3D) derivados de amostras de metástase óssea do câncer de próstata paciente e seus Xenoenxertos

Um protocolo para co-injetar células cancerosas e fibroblastos e monitorar o crescimento do tumor ao longo do tempo é fornecido. Este protocolo pode ser utilizado para entender as bases moleculares do papel dos fibroblastos como reguladores do crescimento tumoral.

Um Modelo de Camundongo para Investigar o Papel de Fibroblastos Associados ao Câncer no Crescimento Tumoral

Este artigo tem como objetivo fornecer um protocolo para o isolamento e cultura de fibroblastos primários associados ao câncer a partir de um modelo de murina síngênica de câncer de mama triplo-negativo e sua aplicação para o estudo pré-clínico de novas nanopartículas projetadas para atingir o microambiente tumoral.

Isolamento de fibroblastos associados ao câncer primário de um modelo de murina síndica do câncer de mama para o estudo de nanopartículas-alvo

Um sistema de ensaio in vitro de alta throughput foi desenvolvido para avaliar drogas anticancerígenas usando organoides tumorais derivados do paciente (PDOs), semelhantes aos tecidos cancerígenos, mas são inadequados para sistemas de ensaio in vitro de alto rendimento com placas de 96 poços e 384 poços.

Ensaio in vitro de alta produtividade usando organoides tumorais derivados do paciente

Aprenda a estabelecer organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago. Este protocolo elimina a variabilidade entre pacientes para estudar interações tumor-estroma.

Estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago (Vídeo) | JoVE Journal

Estabelecimento de organoides tumorais, fibroblastos associados ao carcinoma e fibroblastos equivalentes do mesmo paciente com câncer de esôfago

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