Name: Isolamento de Células Epiteliais Alveolares Tipo II de Pulmões Neonatais, Juvenis e Adultos Múrios Adaptáveis a Ambientes Experimentais Infecciosos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-12-19T14:10:00.000+00:00
Duration: 6 min 14 s
Description: Aprenda a isolar células epiteliais alveolares tipo II de pulmões de camundongos em diferentes estágios de desenvolvimento usando citometria de fluxo. Este método viabiliza estudos sobre funções imunorreguladoras e resposta a infecções respiratórias.

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<ol><li>Stegemann-Koniszewski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+type+II+epithelial+cells+contribute+to+the+anti-influenza+A+virus+response+in+the+lung+by+integrating+pathogen-+and+microenvironment-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Alveolar type II epithelial cells contribute to the anti-influenza A virus response in the lung by integrating pathogen- and microenvironment-derived signals.</a> mBio. 7 (3), (2016).</li>
<li>Kumova, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Severity+of+neonatal+influenza+infection+is+driven+by+type+I+interferon+and+oxidative+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Severity of neonatal influenza infection is driven by type I interferon and oxidative stress.</a> Mucosal Immunol. 15 (6), 1309-1320 (2022).</li>
<li>Angelidis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+atlas+of+the+aging+lung+mapped+by+single-cell+transcriptomics+and+deep+tissue+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An atlas of the aging lung mapped by single-cell transcriptomics and deep tissue proteomics.</a> Nat Commun. 10 (1), 963(2019).</li>
<li>Cleaver, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+cells+are+essential+effectors+of+inducible+resistance+to+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial cells are essential effectors of inducible resistance to pneumonia.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 78-88 (2014).</li>
<li>Boehme, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigenetic+changes+and+serotype-specific+responses+of+alveolar+type+II+epithelial+cells+to+Streptococcus+pneumoniae+in+resolving+influenza+A+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Epigenetic changes and serotype-specific responses of alveolar type II epithelial cells to Streptococcus pneumoniae in resolving influenza A virus infection.</a> Cell Commun Signal. 23 (1), 278(2025).</li>
<li>Worrell, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+structural+cells+are+altered+by+influenza+virus+leading+to+rapid+immune+protection+following+re-challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Lung structural cells are altered by influenza virus leading to rapid immune protection following re-challenge.</a> Nat Commun. 16 (1), 7061(2025).</li>
<li>Sinha, M., Lowell, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+highly+pure+primary+mouse+alveolar+epithelial+type+II+cells+by+flow+cytometric+cell+sorting%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of highly pure primary mouse alveolar epithelial type II cells by flow cytometric cell sorting.</a> Bio Protoc. 6 (22), (2016).</li>
<li>Chen, Q., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+mouse+alveolar+type+II+cells+to+study+type+II+to+type+I+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of mouse alveolar type II cells to study type II to type I cell differentiation.</a> STAR Protoc. 2 (1), 100241(2021).</li>
<li>Gereke, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+isolation+of+primary+murine+type+II+alveolar+epithelial+cells+for+functional+and+molecular+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric isolation of primary murine type II alveolar epithelial cells for functional and molecular studies.</a> J Vis Exp. (70), e4322(2012).</li>
<li>Avelin, V., Sissonen, S., Julkunen, I., Österlund, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+efficacy+of+H5N1+avian+influenza+virus+by+commonly+used+sample+preparation+reagents+for+safe+laboratory+practices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Inactivation efficacy of H5N1 avian influenza virus by commonly used sample preparation reagents for safe laboratory practices.</a> J Virol Methods. 304, 114527(2022).</li>
<li>Jureka, A. S., Silvas, J. A., Basler, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Propagation%2C+inactivation%2C+and+safety+testing+of+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Propagation, inactivation, and safety testing of SARS-CoV-2.</a> Viruses. 12 (6), (2020).</li>
<li>Fukuyama, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-spectral+fluorescent+reporter+influenza+viruses+%28Color-flu%29+as+powerful+tools+for+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Multi-spectral fluorescent reporter influenza viruses (Color-flu) as powerful tools for in vivo studies.</a> Nat Commun. 6, 6600(2015).</li>
<li>Hanssen, A., Loges, S., Pantel, K., Wikman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+circulating+tumor+cells+in+non-small+cell+lung+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Detection of circulating tumor cells in non-small cell lung cancer.</a> Front Oncol. 5, 207(2015).</li>
<li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Microbiol+Immunol+%28Bp%29%22%5BJournal%5D)">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur J Microbiol Immunol (Bp). 2 (2), 112-120 (2012).</li>
<li>Soutiere, S. E., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+postnatal+lung+growth+and+development+between+C3H%2FHeJ+and+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of postnatal lung growth and development between C3H/HeJ and C57BL/6J mice.</a> J Appl Physiol. 100 (5), 1577-1583 (2006).</li>
<li>Alberts, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+the+host+response+between+resistant+and+susceptible+inbred+mouse+strains+after+influenza+A+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Microbes+Infect%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in the host response between resistant and susceptible inbred mouse strains after influenza A infection.</a> Microbes Infect. 12 (4), 309-318 (2010).</li>
<li>Kida, K., Fujino, Y., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+lung+structure+in+male+DBA+and+C57+black+mice+and+their+F1+offspring%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">A comparison of lung structure in male DBA and C57 black mice and their F1 offspring.</a> Am Rev Respir Dis. 139 (5), 1238-1243 (1989).</li>
<li>Reinhard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inbred+strain+variation+in+lung+function%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm+Genome%22%5BJournal%5D)">Inbred strain variation in lung function.</a> Mamm Genome. 13 (8), 429-437 (2002).</li>
<li>Soutiere, S. E., Tankersley, C. G., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+alveolar+size+in+inbred+mouse+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Differences in alveolar size in inbred mouse strains.</a> Respir Physiol Neurobiol. 140 (3), 283-291 (2004).</li>
<li>Koerner, I., Matrosovich, M. N., Haller, O., Staeheli, P., Kochs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+receptor+specificity+and+fusion+activity+of+the+haemagglutinin+contribute+to+high+virulence+of+a+mouse-adapted+influenza+A+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Altered receptor specificity and fusion activity of the haemagglutinin contribute to high virulence of a mouse-adapted influenza A virus.</a> J Gen Virol. 93 (Pt 5), 970-979 (2012).</li>
<li>Weinheimer, V. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influenza+A+viruses+target+type+II+pneumocytes+in+the+human+lung%5BTitle%5D)+AND+%22J+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Influenza A viruses target type II pneumocytes in the human lung.</a> J Infect Dis. 206 (11), 1685-1694 (2012).</li>
<li>Youk, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+human+alveolar+stem+cell+culture+models+reveal+infection+response+to+SARS-CoV-2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional human alveolar stem cell culture models reveal infection response to SARS-CoV-2.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 905-919.e10 (2020).</li>
<li>Ziegler, C. G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+receptor+ACE2+is+an+interferon-stimulated+gene+in+human+airway+epithelial+cells+and+is+detected+in+specific+cell+subsets+across+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 receptor ACE2 is an interferon-stimulated gene in human airway epithelial cells and is detected in specific cell subsets across tissues.</a> Cell. 181 (5), 1016-1035.e19 (2020).</li>
<li>Katsura, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+stem+cell-based+alveolospheres+provide+insights+into+SARS-CoV-2-mediated+interferon+responses+and+pneumocyte+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Human lung stem cell-based alveolospheres provide insights into SARS-CoV-2-mediated interferon responses and pneumocyte dysfunction.</a> Cell Stem Cell. 27 (6), 890-904.e8 (2020).</li>
<li>Fehrenbach, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+epithelial+type+II+cell%3A+Defender+of+the+alveolus+revisited%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Alveolar epithelial type II cell: Defender of the alveolus revisited.</a> Respiratory Res. 2 (1), 33(2001).</li>
<li>Mason, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+alveolar+type+II+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Biology of alveolar type II cells.</a> Respirology. 11 (Suppl), S12-S15 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Buffer ACK</td><td>-</td><td>-</td><td>8,29 g NH4Cl, 1 g KHCO3, 200 g e micro; L de 0. 5 M EDTA, adicione 1000 mL de Milli-Q, ajuste o pH para 7,2 a 7,4</td></tr><tr><td>anti-mouse CD11b</td><td>eBiociência</td><td>12-0112-83</td><td>clone M1/70; PE acoplado</td></tr><tr><td>CD11c anti-mouse</td><td>Biolenda</td><td>117310</td><td>clone N418; APC acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD16/32</td><td>BD em Biociências</td><td>553141</td><td>clone 93; purificado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD16/32</td><td>BD em Biociências</td><td>561727</td><td>clone 2.4G2; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD19</td><td>Biolenda</td><td>115508</td><td>clone 6D5; PE acoplado</td></tr><tr><td>CD24 anti-mouse</td><td>Biolenda</td><td>101808</td><td>clone M1/69; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD31</td><td>Biolenda</td><td>102408</td><td>clone 390; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD326</td><td>Biolenda</td><td>118245</td><td>clone G8.8; BV785 acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD45</td><td>BD em Biociências</td><td>553081</td><td>clone 30-F11; PE acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse CD93</td><td>eBiociência</td><td>17-5892-82</td><td>clone AA4-1; APC acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse F4/80</td><td>Biolenda</td><td>123116</td><td>clone BM8; APC acoplado</td></tr><tr><td>anti-mouse SPC&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab211326</td><td>Espécie hospedeira: Coelho; Clone: EPR19839; purificado</td></tr><tr><td>Aria-Fusão</td><td>BD em Biociências</td><td></td><td>Classificador de células</td></tr><tr><td>Aria-II SORP</td><td>BD em Biociências</td><td></td><td>Classificador de células</td></tr><tr><td>Placa Biozym Agarose</td><td>Biozym</td><td>840101</td><td>1% (v/v) em H2O</td></tr><tr><td>Filtro celular (100 & micro; M, 70 & Micro; M, 40 & Micro; m)</td><td>BD Falcon</td><td>352360, 352350, 352340</td><td></td></tr><tr><td>CellTrics (50 & micro; m)</td><td>Sysmex</td><td>04-004-2327</td><td></td></tr><tr><td>Desoxirribonuclease I do pâncreas bovino, 2000 unidades de Kunitz/frasco</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4263</td><td>Conteúdo recém-dissolvido de 1 frasco em 330 & micro; L DMEM</td></tr><tr><td>Dispase, 100 mL (5000 unidades caseinolíticas)</td><td>Corning</td><td>354235</td><td>realizar filtração estéril (tamanho dos poros 0,22 & micro; m), prepare 4 mL alíquotas em tubos de 15 mL, armazene em -20 & deg; C</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>31885-049</td><td>glicose baixa, com piruvanato, adicione HEPES (concentração final de 25 mM)</td></tr><tr><td>FACS Diva</td><td>BD em Biociências</td><td></td><td>Software de Classificação</td></tr><tr><td>FlowJo</td><td></td><td></td><td>Software de Avaliação para dados FACS</td></tr><tr><td>O Anti-Coelho da Cabra</td><td></td><td></td><td>Alexa 594 acoplada</td></tr><tr><td>Cânula Interna Introcan 22G</td><td>Braun</td><td>4252098B</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy FFPE Kit</td><td>Qiagen</td><td>73504</td><td></td></tr><tr><td>Sinfonia S6 SE</td><td>BD em Biociências</td><td></td><td>Classificador de células</td></tr></tbody></table>

isolamento de células epiteliais alveolares tipo ii de pulmões neonatais, juvenis e adultos múrios adaptáveis a ambientes experimentais infecciosos

Isolation of Alveolar Type II Epithelial Cells from Neonatal, Juvenile, and Adult Murine Lungs Adaptable to Infectious Experimental Settings

Isolamento de Células Epiteliais Alveolares Tipo II de Pulmões Neonatais, Juvenis e Adultos Múrios Adaptáveis a Ambientes Experimentais Infecciosos

Alveolar type II epithelial cells (AECII) critically contribute to immune regulation in the lung and thus are key elements orchestrating pulmonary ...

isolation-alveolar-type-ii-epithelial-cells-from-neonatal-juvenile

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Aqui, nós descrevemos um protocolo para isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos. Este método compreende mecânico e dissociação enzimática do tecido pulmonar, bem como um processo de purificação passo 2, utilizando anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpos conjugados com esferas magnéticas, que produz uma população de células endoteliais pura de origem principalmente microvascular.

Isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos Neonatal

Células epiteliais pulmonares podem ser isolados do trato respiratório de camundongos e cultivadas em ar-líquido interface como um modelo de epitélio respiratório diferenciado. Um protocolo é descrito para o isolamento, cultura e expondo essas células à fumaça de cigarro mainstream, a fim de estudar as respostas moleculares para esta toxina ambiental.

Isolamento de rato células epiteliais respiratórias e exposição à fumaça de cigarro Experimental da Air interface líquido

A preparação altamente purificada de células dendríticas pulmonares do rato é descrito. Ênfase específica é dada para o isolamento de um subconjunto de células dendríticas convencionais.

Isolamento de células dendríticas pulmonares do rato

Nós descrevemos o isolamento rápido de murinos primários células tipo II alveolares epiteliais (AECII) por meio de seleção por citometria de fluxo negativo. Estes AECII mostram viabilidade e pureza elevados e são adequadas para uma ampla gama de estudos funcionais e moleculares relativas ao seu papel em condições respiratórias, tais como doenças auto-imunes ou infecciosas.

Isolamento de citometria de fluxo de células primárias Murino Tipo II epiteliais alveolares de Estudos funcionais e Molecular

Este vídeo demonstra uma técnica in vitro para identificar células imunes que residem em pulmões murinos. Depois de isolar as células-alvo do tecido pulmonar murino, elas são marcadas na superfície usando um coquetel de anticorpos marcados com fluoróforo contra marcadores específicos em células imunes inatas e adaptativas. Além disso, monócitos, macrófagos e células dendríticas são marcados usando um marcador intracelular. Os vários tipos de células imunes são então identificados usando...

Um método in vitro para identificar células imunes inatas e adaptativas que residem em pulmões murinos

Esta comunicação descreve metodologias para isolamento e cultura de macrófagos alveolares dos humanos e modelos murino para fins experimentais.

Isolamento e cultura In Vitro de macrófagos alveolares murino e humanos

Apresentado aqui é um protocolo para isolamento do monócito sanguíneo humano primário, bem como sua diferenciação em macrófagos e células dendríticas e montagem com células epiteliais em um modelo pulmonar humano multicelular. Respostas biológicas de coculturas compostas de células imunes diferenciadas de monócitos recém-isolados ou descongelados, após exposição a estímulos proinflamatórios, são comparadas.

Modelo Alveolar Humano Multicelular Composto por Células Epiteliais e Células Imunes Primárias para Avaliação de Riscos

Neste artigo, células endoteliais primárias do pulmão foram isoladas e cultivadas de camundongos neonatais.

Isolamento de Células Endoteliais Primárias de Pulmão de Camundongo

O presente protocolo descreve células pluripotentes pluripotentes induzidas por células-tronco derivadas do tipo 2 (iAT2s). Essas células podem ser cultivadas como esferas de auto-renovação na cultura 3D ou adaptadas à cultura de interface ar-líquido (ALI).

Gerando esferas 3D e culturas de interface ar-líquido 2D de células-tronco pluripotentes induzidas pelo homem

Apresentamos aqui um método reprodutível, acessível e robusto para o isolamento e expansão de células epiteliais brônquicas primárias para biobanco de longo prazo e geração de células epiteliais diferenciadas por cultura na interface ar-líquido.

Isolando Células Epiteliais Brônquicas de Tecido Pulmonar Ressecado para Biobanco e Estabelecendo Culturas de Interface Ar-Líquido Bem Diferenciadas

Este protocolo detalha o isolamento de populações imunes e não imunes vivas do pulmão de camundongo em estado estacionário e após a infecção por influenza. Ele também fornece estratégias de gating para identificar subconjuntos de células epiteliais e mieloides.

Isolamento de populações de células mieloides e epiteliais vivas do pulmão de camundongo

Aprenda a isolar células epiteliais alveolares tipo II de pulmões de camundongos em diferentes estágios de desenvolvimento usando citometria de fluxo. Este método viabiliza estudos sobre funções imunorreguladoras e resposta a infecções respiratórias.

Isolamento de Células Epiteliais Alveolares Tipo II de Pulmões Neonatais, Juvenis e Adultos Múrios Adaptáveis a Ambientes Experimentais Infecciosos (Vídeo) | JoVE Journal

Isolamento de Células Epiteliais Alveolares Tipo II de Pulmões Neonatais, Juvenis e Adultos Múrios Adaptáveis a Ambientes Experimentais Infecciosos

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