Name: Procedimentos para a Identificação de Inibidores de Entrada do SARS-CoV-2 como Potenciais Antivirais Utilizando Pseudovírus Baseados em MLV (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T14:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Aprenda a gerar pseudovírus baseados em MLV expressando a proteína spike do SARS-CoV-2 para triagem segura de inibidores de entrada viral em condições de biossegurança nível 2.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+and+emerging+variants%3A+Unmasking+structure%2C+function%2C+infection%2C+and+immune+escape+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Infect+Microbiol%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 and emerging variants: Unmasking structure, function, infection, and immune escape mechanisms.</a> Front Cell Infect Microbiol. 12, 869832(2022).</li>
<li>Jackson, C. B., Farzan, M., Chen, B., Choe, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+SARS-CoV-2+entry+into+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of SARS-CoV-2 entry into cells.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 23 (1), 3-20 (2022).</li>
<li>Le, K., Kannappan, S., Kim, T., Lee, J. H., Lee, H. -R., Kim, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+understanding+of+SARS-CoV-2+virus+entry+to+host+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Structural understanding of SARS-CoV-2 virus entry to host cells.</a> Front Mol Biosci. 10, 1288686(2023).</li>
<li>Ayoub, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+SARS-CoV-2+spike+glycoproteins+for+pseudotyping+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Virol%22%5BJournal%5D)">Improved SARS-CoV-2 spike glycoproteins for pseudotyping lentiviral vectors.</a> Front Virol. 1, 793320(2021).</li>
<li>Lippi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biosafety+measures+for+preventing+infection+from+COVID-19+in+clinical+laboratories%3AIFCC+Taskforce+Recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Biosafety measures for preventing infection from COVID-19 in clinical laboratories:IFCC Taskforce Recommendations.</a> Clin Chem Lab Med. 58 (7), 1053-1062 (2020).</li>
<li>Cruz-Cardenas, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+pseudovirus-based+platform+to+measure+neutralizing+antibodies+in+Mexico+using+SARS-CoV-2+as+proof-of-concept%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A pseudovirus-based platform to measure neutralizing antibodies in Mexico using SARS-CoV-2 as proof-of-concept.</a> Sci Rep. 12 (1), 17966(2022).</li>
<li>Rizatdinova, S. N., Ershova, A. E., Astrakhantseva, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotyped+viruses%3A+A+useful+platform+for+pre-clinical+studies+conducted+in+a+BSL-2+laboratory+setting%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Pseudotyped viruses: A useful platform for pre-clinical studies conducted in a BSL-2 laboratory setting.</a> Biomolecules. 15 (1), 135(2025).</li>
<li>Millet, J. K., Whittaker, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+%28MLV%29-based+coronavirus+spike-pseudotyped+particle+production+and+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus (MLV)-based coronavirus spike-pseudotyped particle production and infection.</a> Bio Protoc. 6 (23), e2035(2016).</li>
<li>Millet, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+pseudotyped+particles+to+study+highly+pathogenic+coronaviruses+in+a+biosafety+level+2+setting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Production of pseudotyped particles to study highly pathogenic coronaviruses in a biosafety level 2 setting.</a> J Vis Exp. (145), e59010(2019).</li>
<li>Eichler, M., Aksi, E., Pfeilschifter, J., Imre, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudotyped+virus+particles+to+monitor+Ebola+virus+and+SARS-CoV-2+viral+entry+in+human+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Application of pseudotyped virus particles to monitor Ebola virus and SARS-CoV-2 viral entry in human cell lines.</a> STAR Protoc. 2 (4), 100818(2021).</li>
<li>Thomas, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+pseudo-typed+virus+particle+based+method+to+determine+the+efficacy+of+virucidal+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Development of a pseudo-typed virus particle based method to determine the efficacy of virucidal agents.</a> Sci Rep. 14 (1), 2174(2024).</li>
<li>Yang, S., Zhou, X., Li, R., Fu, X., Sun, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+PEI-based+transfection+method+for+transient+transfection+and+lentiviral+production%3APEI-based+transfection+for+lentiviral+production%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Chem+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimized PEI-based transfection method for transient transfection and lentiviral production:PEI-based transfection for lentiviral production.</a> Curr Protoc Chem Biol. 9 (3), 147-157 (2017).</li>
<li>Gee, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+nanovesicles+for+packaging+of+CRISPR-Cas9+protein+and+sgRNA+to+induce+therapeutic+exon+skipping%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Extracellular nanovesicles for packaging of CRISPR-Cas9 protein and sgRNA to induce therapeutic exon skipping.</a> Nat Commun. 11 (1), 1334(2020).</li>
<li>Ferrara, F., Temperton, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pseudotype+neutralization+assays%3AFrom+laboratory+bench+to+data+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Pseudotype neutralization assays:From laboratory bench to data analysis.</a> Methods Protoc. 1 (1), 8(2018).</li>
<li>Soneoka, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+transient+three-plasmid+expression+system+for+the+production+of+high+titer+retroviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">A transient three-plasmid expression system for the production of high titer retroviral vectors.</a> Nucleic Acids Res. 23 (4), 628-633 (1995).</li>
<li>Chen, Y., Miller, W. M., Aiyar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transduction+efficiency+of+pantropic+retroviral+vectors+is+controlled+by+the+envelope+plasmid+to+vector+plasmid+ratio%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Prog%22%5BJournal%5D)">Transduction efficiency of pantropic retroviral vectors is controlled by the envelope plasmid to vector plasmid ratio.</a> Biotechnol Prog. 21 (1), 274-282 (2005).</li>
<li>Zhang, J. H., Chung, T. D., Oldenburg, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+statistical+parameter+for+use+in+evaluation+and+validation+of+high+throughput+screening+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomol+Screen%22%5BJournal%5D)">A simple statistical parameter for use in evaluation and validation of high throughput screening assays.</a> J Biomol Screen. 4 (2), 67-73 (1999).</li>
<li>Wool-Lewis, R. J., Bates, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+Ebola+virus+entry+by+using+pseudotyped+viruses%3AIdentification+of+receptor-deficient+cell+lines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Characterization of Ebola virus entry by using pseudotyped viruses:Identification of receptor-deficient cell lines.</a> J Virol. 72 (4), 3155-3160 (1998).</li>
<li>Giroglou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retroviral+vectors+pseudotyped+with+severe+acute+respiratory+syndrome+coronavirus+S+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Retroviral vectors pseudotyped with severe acute respiratory syndrome coronavirus S protein.</a> J Virol. 78 (17), 9007-9015 (2004).</li>
<li>Ma, M., Kersten, D. B., Kamrud, K. I., Wool-Lewis, R. J., Schmaljohn, C., González-Scarano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+leukemia+virus+pseudotypes+of+La+Crosse+and+Hantaan+bunyaviruses%3AA+system+for+analysis+of+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">Murine leukemia virus pseudotypes of La Crosse and Hantaan bunyaviruses:A system for analysis of cell tropism.</a> Virus Res. 64 (1), 23-32 (1999).</li>
<li>Bruett, L., Clements, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+murine+leukemia+virus+vectors+pseudotyped+with+the+visna+virus+envelope+show+expanded+visna+virus+cell+tropism%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional murine leukemia virus vectors pseudotyped with the visna virus envelope show expanded visna virus cell tropism.</a> J Virol. 75 (23), 11464-11473 (2001).</li>
<li>Radoshitzky, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transferrin+receptor+1+is+a+cellular+receptor+for+New+World+haemorrhagic+fever+arenaviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Transferrin receptor 1 is a cellular receptor for New World haemorrhagic fever arenaviruses.</a> Nature. 446 (7131), 92-96 (2007).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+retroviral+pseudotypes+with+influenza+hemagglutinins+from+H1%2C+H3%2C+and+H5+subtypes+for+sensitive+and+specific+detection+of+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of retroviral pseudotypes with influenza hemagglutinins from H1, H3, and H5 subtypes for sensitive and specific detection of neutralizing antibodies.</a> J Virol Methods. 153 (2), 111-119 (2008).</li>
<li>Bulcha, J. T., Wang, Y., Ma, H., Tai, P. W. L., Gao, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vector+platforms+within+the+gene+therapy+landscape%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Viral vector platforms within the gene therapy landscape.</a> Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 53(2021).</li>
<li>Sholukh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+cell-based+and+surrogate+SARS-CoV-2+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of cell-based and surrogate SARS-CoV-2 neutralization assays.</a> J Clin Microbiol. 59 (10), e0052721(2021).</li>
<li>Xiang, Q., Li, L., Wu, J., Tian, M., Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+pseudovirus+system+in+the+development+of+vaccine%2C+antiviral-drugs%2C+and+neutralizing+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiol+Res%22%5BJournal%5D)">Application of pseudovirus system in the development of vaccine, antiviral-drugs, and neutralizing antibodies.</a> Microbiol Res. 258, 126993(2022).</li>
<li>Johnson, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+pseudotyping+conditions+for+the+SARS-CoV-2+spike+glycoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Optimized pseudotyping conditions for the SARS-CoV-2 spike glycoprotein.</a> J Virol. 94 (21), e01062-e01120 (2020).</li>
<li>Xiaojie, S., Yu, L., Lei, Y., Guang, Y., Min, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+targeting+SARS-CoV-2+spike+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies targeting SARS-CoV-2 spike protein.</a> Stem Cell Res. 50, 102125(2021).</li>
<li>Cao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((De+novo+design+of+picomolar+SARS-CoV-2+miniprotein+inhibitors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">De novo design of picomolar SARS-CoV-2 miniprotein inhibitors.</a> Science. 370 (6515), 426-431 (2020).</li>
<li>Monteil, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+SARS-CoV-2+infections+in+engineered+human+tissues+using+clinical-grade+soluble+human+ACE2%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Inhibition of SARS-CoV-2 infections in engineered human tissues using clinical-grade soluble human ACE2.</a> Cell. 181 (4), 905-913.e7 (2020).</li>
<li>Ahmad, I., Pawara, R., Surana, S., Patel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repurposed+ACE2+inhibitors%3ASARS-CoV-2+entry+blockers+of+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Top+Curr+Chem%22%5BJournal%5D)">The repurposed ACE2 inhibitors:SARS-CoV-2 entry blockers of COVID-19.</a> Top Curr Chem. 379 (6), 40(2021).</li>
<li>Alqaaf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovering+natural+products+as+potential+inhibitors+of+SARS-CoV-2+spike+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Discovering natural products as potential inhibitors of SARS-CoV-2 spike proteins.</a> Sci Rep. 15 (1), 200(2025).</li>
<li>Chan, C. C. -Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+novel+small-molecule+inhibitors+of+SARS-CoV-2+by+chemical+genetics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharm+Sin+B%22%5BJournal%5D)">Identification of novel small-molecule inhibitors of SARS-CoV-2 by chemical genetics.</a> Acta Pharm Sin B. 14 (9), 4028-4044 (2024).</li>
<li>Lei, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralization+of+SARS-CoV-2+spike+pseudotyped+virus+by+recombinant+ACE2-Ig%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Neutralization of SARS-CoV-2 spike pseudotyped virus by recombinant ACE2-Ig.</a> Nat Commun. 11 (1), 2070(2020).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-influenza+virus+drug%2C+arbidol+is+an+efficient+inhibitor+of+SARS-CoV-2+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discov%22%5BJournal%5D)">The anti-influenza virus drug, arbidol is an efficient inhibitor of SARS-CoV-2 in vitro.</a> Cell Discov. 6 (1), 28(2020).</li>
<li>Kang, Y., Shi, Y., Xu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Arbidol%3AThe+current+demand%2C+strategies%2C+and+antiviral+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Immun+Inflamm+Dis%22%5BJournal%5D)">Arbidol:The current demand, strategies, and antiviral mechanisms.</a> Immun Inflamm Dis. 11 (8), e984(2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.2 & micro; m Filtros de seringa de baixa ligação a proteínas &nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>720-1320</td><td>Filtros de Seringa (0,2 & mu; m,13 mm, PES, estéril)</td></tr><tr><td>Solução 1X de Tripsina-EDTA 0,25%</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td>Tripsina-EDTA (0,25%), fenol vermelho</td></tr><tr><td>0,45 & micro; m Unidades de Filtro de Tampa de Garrafa PVDF &nbsp;</td><td>Avantor</td><td>514-1045</td><td>Sistemas de Filtragem a Vácuo com Tampa de Garrafa (PVDF, 250 ml, 50 mm, 0,45 & micro; m)</td></tr><tr><td>Tubos de Microcentrífuga Estéreis de 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>30123611</td><td>Lock-Safe&nbsp; Tubos</td></tr><tr><td>Solução 100 X de penicilina Estreptomicina</td><td>Corning</td><td>30-002-CI</td><td>Solução de Penicilina-Estreptomicina, 100x</td></tr><tr><td>5 x Luciferase ensaio de lise buffer &nbsp;</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>parte do Sistema de Ensaio de Luciferase Promega Bright-Glo</td></tr><tr><td>Tubos cônicos estéreis de 50 mL</td><td>Corning&nbsp;</td><td>352070</td><td>Tubo centrífugo PP de alta clareza de 50 mL, fundo cônico, estéril</td></tr><tr><td>Placas de Cultura de Tecidos de 6 Poços</td><td>Termo Científica</td><td>140675</td><td>Multipratos tratados com cultura celular</td></tr><tr><td>Placas de Cultura de Tecidos com 96 poços</td><td>Termo Científica</td><td>168055</td><td>Nunc&trade; MicroWell&comércio; 96-Poço, Nunclon Delta, Microplaca de fundo plano</td></tr><tr><td>Cloridrato de arbidol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SML0860</td><td></td></tr><tr><td>Polietilenemina ramificada, 25 kDa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>408727</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio a laser confocal &nbsp; (FV 3000)</td><td>Olympus Co.</td><td>SKU: FV3000</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sulfóxido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418</td><td></td></tr><tr><td>DMEM (Médium Eagle Modificado da Dulbecco) com: glicose alta, L-glutamina, fenol vermelho, piruvato de sódio)</td><td>Gibco</td><td>11995-065</td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal (FBS)</td><td>Gibco</td><td>26140-079</td><td>Inativado por calor (56&deg; C, 30 min)</td></tr><tr><td>Células derivadas de HEK293T (Linha Celular Lenti-X 293T)</td><td>Biografia de Takara</td><td>632180</td><td>Subclone altamente transfectável da linhagem celular HEK293 e suporta altos níveis de expressão de proteínas virais</td></tr><tr><td>HEPES Buffer</td><td>Gibco</td><td>15630-080</td><td></td></tr><tr><td>Células altamente suscetíveis à infecção (293T-ACE2. TMPRSS2 (mCherry) Linha Celular)</td><td>Recursos do BEI</td><td>NR-55293</td><td>HEK293T linha celular modificada para expressar ACE2 e TMPRSS2</td></tr><tr><td>Ácido clorídrico &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H1758-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de contraste de fase invertido &nbsp;</td><td>Olympus Co.&nbsp;</td><td>SKU: 2404040005</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9516-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Substrato de luciferase</td><td>Promega</td><td>E2650</td><td>parte do Sistema de Ensaio de Luciferase Bright-Glo</td></tr><tr><td>Leitor de microplacas com detecção de luminescência</td><td>Agilent BioTek</td><td>BTH1MG</td><td></td></tr><tr><td>MTT [brometo 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio]</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2128</td><td></td></tr><tr><td>Placas brancas opacas de 96 poços</td><td>Corning</td><td>3917</td><td>Microplacas de poliestireno branco plano com fundo sólido de 96 poços tratados com TC</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM999</td><td></td></tr><tr><td>plasmídeo pcDNA3-EGFP</td><td>Addgene</td><td>13031</td><td>pcDNA3-EGFP foi um presente de Doug Golenbock (plasmídeo Addgene #13031 ; http://n2t.net/addgene:13031 ; RRID:Addgene_13031)</td></tr><tr><td>pCMV-MLVgagpol plasmid</td><td>-</td><td>-</td><td>Doação gentilmente feita pelo Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>Soro salino tamponado com fosfato sem Ca2+ e Mg2+ (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-040-CV</td><td>Soro tampado com fosfato, 1X sem cálcio e magnésio</td></tr><tr><td>Sistema de Plasmídeos Promega PureYield Maxiprep</td><td>Promega</td><td>A2393</td><td></td></tr><tr><td>Plasmídeo pTG-Luc</td><td>-</td><td>-</td><td>Doação gentilmente feita pelo Dr. Gary Whittaker&nbsp;</td></tr><tr><td>Plasmídeo do Spike pUNO1-SARS-CoV-2 (Wuhan)</td><td>Invivogen</td><td>P1-Espinho</td><td></td></tr><tr><td>plasmídeo pVSV-G</td><td>Addgene</td><td>138479</td><td>pVSV-G foi um presente de Akitsu Hotta (plasmídeo Addgene # 138479 ; http://n2t.net/addgene:138479 ; RRID:Addgene_138479)</td></tr><tr><td>Proteína de fusão humana ACE2-Fc recombinante</td><td>Invivogen</td><td>FC-HACE2</td><td></td></tr><tr><td>Meio sérico reduzido (Opti-MEM)</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>Opti-MEM Meio Sérico Reduzido</td></tr></tbody></table>

procedimentos para a identificação de inibidores de entrada do sars-cov-2 como potenciais antivirais utilizando pseudovírus baseados em mlv

Procedures for the Identification of SARS-CoV-2 Entry Inhibitors as Potential Antivirals using MLV-Based Pseudoviruses

Procedimentos para a Identificação de Inibidores de Entrada do SARS-CoV-2 como Potenciais Antivirais Utilizando Pseudovírus Baseados em MLV

The SARS-CoV-2 virus is an emergent, zoonotic pathogen that has caused a huge burden of disease and mortality around the world since its emergence in ...

procedures-for-identification-sars-cov-2-entry-inhibitors-as

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra um ensaio de fixação viral para triagem de compostos antivirais. Usando o vírus da hepatite C geneticamente modificado e a luciferase, ele avalia os efeitos inibitórios na fixação viral, conforme indicado pela menor intensidade de luz em poços co-tratados em comparação com poços tratados apenas com o vírus.

Um ensaio de fixação viral para triagem de compostos antivirais

Três ensaios, incluindo o efeito citopático (CPE) baseado em ensaio, o ensaio de dose-resposta e (TOA) ensaio de Tempo-de-adição ter sido desenvolvido, optimizado e validado e utilizado para identificar novos medicamentos antivirais contra o vírus da febre catarral (VFC), bem como para determinar o possível mecanismo de ação-de-(MOA) para antivirais recentemente identificados.

Ensaios para a identificação de novos antivirais contra a febre catarral ovina vírus

Aqui, apresentamos um protocolo que examina etapas específicas da entrada viral para identificar e avaliar novos agentes antivirais.

No início virais Ensaios de entrada para a identificação e avaliação de compostos antivirais

Aqui, apresentamos um protocolo para gerar pseudotyped partículas em um cenário de BSL-2 incorporando a proteína de aumento da síndrome respiratória do vírus de alta patogenicidade Oriente e coronavírus síndrome respiratória aguda grave. Estas partículas pseudotyped contêm um gene do repórter do luciferase permitindo a quantificação de entrada de vírus em células de host de destino.

Produção de partículas Pseudotyped para estudar a alta patogenicidade coronavírus em uma configuração de nível 2 de biossegurança

O objetivo do protocolo é ilustrar os diferentes ensaios relativos à entrada viral que podem ser utilizados para identificar os inibidores da entrada viral do candidato.

Uso de ensaios de entrada viral e análise de ancoragem molecular para a identificação de candidatos antivirais contra coxsackievirus a16

O protocolo descrito aqui descreve um método rápido e eficaz para medir anticorpos neutralizantes contra a proteína de pico SARS-CoV-2, avaliando a capacidade de amostras de soro convalescente para inibir a infecção por um vírus de estomatite vesicular rotulado por proteína verde aumentada com pseudotipto de glicoproteína.

Detecção de anticorpos neutralizantes SARS-CoV-2 usando imagens fluorescentes de alto rendimento da infecção por pseudovírus

Este protocolo descreve a dinâmica das infecções virais usando recombinação expressante (r)SARS-CoV-2 e um sistema de imagem in vivo (IVIS) em camundongos transgênicos K18 hACE2 para superar a necessidade de abordagens secundárias necessárias para estudar infecções sars-cov-2 in vivo.

Imagem ao vivo e quantificação da infecção viral em K18 hACE2 Camundongos transgênicos usando o recombinante SARS-CoV-2

Fornecemos um protocolo que pode ser geralmente aplicado a aptâmeros selecionados que se ligam apenas a vírus infecciosos e não a vírus que foram tornados não infecciosos por um método de desinfecção ou a quaisquer outros vírus semelhantes. Isso abre a possibilidade de determinar o estado de infectividade em testes portáteis e rápidos.

Seleção In Vitro de Aptamers para Diferenciar Vírus Infecciosos de Não-Infecciosos

Vírus pseudotipados (PVs) são virions defeituosos de replicação que são usados para estudar interações vírus-hospedeiro em condições mais seguras do que manusear vírus autênticos. Apresentado aqui é um protocolo detalhado que mostra como os PVs SARS-CoV-2 podem ser usados para testar a capacidade de neutralização do soro dos pacientes após a vacinação COVID-19.

Vírus pseudotipados como uma ferramenta molecular para monitorar respostas imunes humorais contra SARS-CoV-2 via ensaio de neutralização

Este protocolo descreve a aplicação de um pseudovirus híbrido novo alphavirus-SARS-CoV-2 (Ha-CoV-2) como uma plataforma para a quantificação rápida da infecciosidade das variantes SARS-CoV-2 e sua sensibilidade aos anticorpos neutralizantes.

Aplicação do pseudovírus Ha-CoV-2 para quantificação rápida de variantes do SARS-CoV-2 e anticorpos neutralizantes

Apresentamos um protocolo in vitro otimizado para a produção de partículas semelhantes ao vírus SARS-CoV-2 que imitam de perto o vírus autêntico. Essa abordagem permite a investigação dos mecanismos de infecção, montagem e saída viral sem as restrições de exigir um laboratório de nível 3 de biossegurança.

Produção de um sistema de partículas semelhante ao vírus SARS-CoV-2 para investigar os ciclos de vida virais in vitro

Aprenda a gerar pseudovírus baseados em MLV expressando a proteína spike do SARS-CoV-2 para triagem segura de inibidores de entrada viral em condições de biossegurança nível 2.

Procedimentos para a Identificação de Inibidores de Entrada do SARS-CoV-2 como Potenciais Antivirais Utilizando Pseudovírus Baseados em MLV (Vídeo) | JoVE Journal

Procedimentos para a Identificação de Inibidores de Entrada do SARS-CoV-2 como Potenciais Antivirais Utilizando Pseudovírus Baseados em MLV

Explorar mais vídeos