Separação Automatizada de HPLC Usando LC-mate: um Autosampler Repetitivo Integrado e Coletor de Frações para Purificação em Microescala

Nossa pesquisa foca em projetar um instrumento que se conecte diretamente a configurações HPLC para automatizar todos esses passos manuais repetitivos. A injeção manual de amostras e a coleta de frações são muito tediosas. A LC-Mate oferece uma solução automatizada multiplataforma para purificação de amostras de HPLC.

Para começar, verifique as conexões de encanamento com solvente entre o sistema HPLC, o LC-Mate e a coluna cromatográfica para garantir caminhos de fluxo adequados. Para verificar a conexão da linha de transmissão de sinal entre o detector UV e o LC-Mate, conecte o fio preto ao terminal vermelho e o fio branco ao terminal preto para igualar a polaridade da saída do sinal analógico. Observe a tela LC-Mate para confirmar que a forma de onda do sinal analógico aparece.

Se não houver forma de onda visível, inverta as conexões dos fios conectando o fio preto ao terminal preto e o fio branco ao terminal vermelho. Para verificar a conexão de disparo entre o detector de ultravioleta e o LC-Mate, conecte a única extremidade do cabo de dados na porta de saída do detector de ultravioleta. Conecte os fios preto e branco da outra extremidade do cabo aos terminais preto e azul do gatilho LC-Mate, respectivamente. Aperte os terminais para garantir uma conexão firme no gatilho.

Em seguida, garanta a inicialização correta do sistema HPLC e do LC-Mate. Clique no ícone LC Mate na interface para executar automaticamente o programa de autoteste do sistema e inicializar módulos-chave de hardware. Aguarde pelo breve tom de prompt e pelo desaparecimento da mensagem de autoteste para confirmar que a inicialização está completa.

Configure as condições de separação do HPLC e inicie a elução para equilibrar a coluna. Na interface de teste, insira o volume de injeção, o tempo de elução e os tempos de repetição, depois pressione o ícone Start para iniciar a operação do auto-sampler, coletor de frações e HPLC. Identificar condições viáveis de separação, incluindo resolução, tempo de funcionamento, tempo de retenção, volume de injeção e comprimento de onda ultravioleta.

Selecione o módulo de função Limiar no lado esquerdo da interface para abrir a tela de definição de parâmetros. Insira o volume de injeção, tempos de repetição, limiar e tempo de elução, e pressione Start para iniciar a operação automatizada. Monitore os indicadores de status.

Observe a injeção em andamento para confirmar a introdução da amostra. Verifique o indicador de Separação em andamento para verificar se a separação cromatográfica está acontecendo. Note o indicador de esvaziamento da seringa para identificar quando a seringa está purgando líquido residual.

Para realizar a coleta de frações baseada no tempo, selecione o módulo de coleta temporária no lado esquerdo da interface para abrir o menu de parâmetros. Volume de injeção de entrada, tempos de repetição, tempo de elução e os tempos de coleta necessários. Pressione o botão Start para iniciar a sequência automatizada repetida.

Em seguida, selecione o módulo de função Coletar Tudo no lado esquerdo da interface. Defina um valor limiar de coleta para coletar todos os picos cromatográficos separadamente. Para a limpeza do duto, insira o pipeline de injeção do auto-amostrador em uma pequena garrafa contendo solvente limpo.

Selecione o módulo de Purificação no lado esquerdo da interface para abrir o menu de parâmetros. Depois, ajuste o volume de injeção entre zero e 1000, e os tempos de repetição para a limpeza do pipeline do injetor. Clique em Limpeza abaixo de Limpeza Concluída para iniciar a limpeza do canal do injetor.

Monitore a contagem de ciclos para acompanhar os ciclos de lavagem concluídos. Defina o tempo de limpeza para a limpeza do pipeline de coleta. Clique em Limpeza abaixo de Current Pipeline para iniciar a limpeza do pipeline de coleta.

Monitore a exibição atual do duto para confirmar a limpeza sequencial do duto 0 ao duto 10. Ative o salvamento automático para permitir que o sistema salve cromatogramas após cada ciclo de elução. Alternativamente, clique no botão Salvar após a elução para salvar manualmente os dados.

Após inserir os metadados na caixa de diálogo, escolha o local de armazenamento entre o armazenamento local, um cartão SD ou um drive de barramento serial universal externo. A separação semi-preparativa do HPLC com LC-Mate permitiu injeção contínua e estável de amostras e coleta de frações durante a purificação do hiperósido de 2"O-galloyl. Impurezas menores eram efetivamente removidas para obter hiperósido purificado de 2"O-galloyl usando o sistema LC-Mate.

A injeção contínua e estável de amostras e a coleta de frações também foram alcançadas com sucesso durante a purificação de floridzina e trilobatina. Demonstrando que o sistema LC-Mate melhora significativamente a eficiência operacional ao reduzir significativamente a intervenção manual. O desvio padrão relativo da área máxima de injeção em anel foi de 0,813%, indicando excelente estabilidade e reprodutibilidade das injeções de LC-Mate.

Esse sistema facilita a purificação automatizada e a coleta precisa de frações para fluxos de trabalho eficientes em escala macro HPLC. A variante correta do sinal, a seleção correta do modo e a configuração dos parâmetros são fundamentais para a aplicação bem-sucedida do instrumento LC-Mate. Estamos planejando aumentar a capacidade do canal e integrar novos detectores para melhor compatibilidade multiplataforma.