Name: Um método simplificado para a transformação mediada por agrobactérias de Phytophthora palmivora (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-03-20T13:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Aprenda um método simplificado de transformação mediada por Agrobacterium para Phytophthora palmivora e P. capsici. Este protocolo reprodutível facilita estudos de função gênica em patógenos de plantas.

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<ol><li>Kamoun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+top+10+oomycete+pathogens+in+molecular+plant+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">The top 10 oomycete pathogens in molecular plant pathology.</a> Mol Plant Pathol. 16 (4), 413-434 (2015).</li>
<li>Jones, J. D., Staskawicz, B. J., Dangl, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plant+immune+system%3A+From+discovery+to+deployment%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The plant immune system: From discovery to deployment.</a> Cell. 187 (9), 2095-2116 (2024).</li>
<li>Tocafundo, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+and+cross-pathogenicity+of+Phytophthora+palmivora+against+cacao%2C+papaya%2C+and+peach+palm%5BTitle%5D)+AND+%22Trop+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Direct and cross-pathogenicity of Phytophthora palmivora against cacao, papaya, and peach palm.</a> Trop Plant Pathol. 46 (6), 664-673 (2021).</li>
<li>Morales-Cruz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Independent+whole-genome+duplications+define+the+architecture+of+the+genomes+of+the+devastating+West+African+cacao+black+pod+pathogen+Phytophthora+megakarya+and+its+close+relative+Phytophthora+palmivora%5BTitle%5D)+AND+%22G3+%28Bethesda%29%22%5BJournal%5D)">Independent whole-genome duplications define the architecture of the genomes of the devastating West African cacao black pod pathogen Phytophthora megakarya and its close relative Phytophthora palmivora.</a> G3 (Bethesda). 10 (7), 2241-2255 (2020).</li>
<li>Ali, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PCR-based+identification+of+cacao+black+pod+causal+agents+and+identification+of+biological+factors+possibly+contributing+to+Phytophthora+megakarya%27s+field+dominance+in+West+Africa%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">PCR-based identification of cacao black pod causal agents and identification of biological factors possibly contributing to Phytophthora megakarya's field dominance in West Africa.</a> Plant Pathol. 65 (7), 1095-1108 (2016).</li>
<li>Marelli, J. -P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chocolate+under+threat+from+old+and+new+cacao+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Phytopathology%22%5BJournal%5D)">Chocolate under threat from old and new cacao diseases.</a> Phytopathology. 109 (8), 1331-1343 (2019).</li>
<li>Cvitanich, C., Judelson, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+transformation+of+the+oomycete%2C+Phytophthora+infestans%2C+using+microprojectile+bombardment%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Genet%22%5BJournal%5D)">Stable transformation of the oomycete, Phytophthora infestans, using microprojectile bombardment.</a> Curr Genet. 42 (4), 228-235 (2003).</li>
<li>Judelson, H. S., Tyler, B. M., Michelmore, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transformation+of+the+oomycete+pathogen%2C+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Transformation of the oomycete pathogen, Phytophthora infestans.</a> Mol Plant Microbe Interact. 4 (6), 602-607 (1991).</li>
<li>Wang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((an+oxathiapiprolin-resistance+gene%2C+functions+as+a+novel+selection+marker+for+Phytophthora+transformation+and+CRISPR%2FCas9+mediated+genome+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">an oxathiapiprolin-resistance gene, functions as a novel selection marker for Phytophthora transformation and CRISPR/Cas9 mediated genome editing.</a> Front Microbiol. 10, 2402(2019).</li>
<li>Dai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+transformation+system+for+Phytophthora+cinnamomi+using+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">An improved transformation system for Phytophthora cinnamomi using green fluorescent protein.</a> Front Microbiol. 12, 682754(2021).</li>
<li>Fang, Y., Cui, L., Gu, B., Arredondo, F., Tyler, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+genome+editing+in+the+oomycete+Phytophthora+sojae+using+CRISPR%2FCas9%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Efficient genome editing in the oomycete Phytophthora sojae using CRISPR/Cas9.</a> Curr Protoc Microbiol. 44 (1), 21A.1.1-21A.1.26 (2017).</li>
<li>Evangelisti, E., Yunusov, T., Shenhav, L., Schornack, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-acetyltransferase+AAC+%283%29-i+confers+gentamicin+resistance+to+Phytophthora+palmivora+and+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">N-acetyltransferase AAC (3)-i confers gentamicin resistance to Phytophthora palmivora and Phytophthora infestans.</a> BMC Microbiol. 19 (1), 265(2019).</li>
<li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+the+straightforward+electro-transformation+system+for+Phytophthora+infestans+and+its+comparison+with+the+improved+PEG%2FCaCl2+transformation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microbiol+Methods%22%5BJournal%5D)">Establishment of the straightforward electro-transformation system for Phytophthora infestans and its comparison with the improved PEG/CaCl2 transformation.</a> J Microbiol Methods. 112, 83-86 (2015).</li>
<li>Huitema, E., Smoker, M., Kamoun, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+straightforward+protocol+for+electro-transformation+of+Phytophthora+capsici+zoospores%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">A straightforward protocol for electro-transformation of Phytophthora capsici zoospores.</a> Methods Mol Biol. 712, 129-135 (2011).</li>
<li>Vijn, I., Govers, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium+tumefaciens+mediated+transformation+of+the+oomycete+plant+pathogen+Phytophthora+infestans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Pathol%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of the oomycete plant pathogen Phytophthora infestans.</a> Mol Plant Pathol. 4 (6), 459-467 (2003).</li>
<li>Wu, D., Navet, N., Liu, Y., Uchida, J., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+simple+and+efficient+Agrobacterium-mediated+transformation+system+for+Phytophthora+palmivora%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Establishment of a simple and efficient Agrobacterium-mediated transformation system for Phytophthora palmivora.</a> BMC Microbiol. 16 (1), 204(2016).</li>
<li>Gumtow, R., Wu, D., Uchida, J., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Phytophthora+palmivora+extracellular+cystatin-like+protease+inhibitor+targets+papain+to+contribute+to+virulence+on+papaya%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">A Phytophthora palmivora extracellular cystatin-like protease inhibitor targets papain to contribute to virulence on papaya.</a> Mol Plant Microbe Interact. 31 (3), 363-373 (2018).</li>
<li>Pettongkhao, S., Navet, N., Schornack, S., Tian, M., Churngchow, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+secreted+protein+of+15+kDa+plays+an+important+role+in+Phytophthora+palmivora+development+and+pathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A secreted protein of 15 kDa plays an important role in Phytophthora palmivora development and pathogenicity.</a> Sci Rep. 10 (1), 2319(2020).</li>
<li>Minz, A., Sharon, A. Electroporation and Agrobacterium-mediated spore transformation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMinz%2C+A+%22Molecular+and+Cell+Biology+Methods+for+Fungi%22">Molecular and Cell Biology Methods for Fungi</a>. Sharon, A. , Humana Press. Totowa, NJ. 21-32 (2010).</li>
<li>Bellemain, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ITS+as+an+environmental+DNA+barcode+for+fungi%3A+An+in+silico+approach+reveals+potential+PCR+biases%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">ITS as an environmental DNA barcode for fungi: An in silico approach reveals potential PCR biases.</a> BMC Microbiol. 10 (1), 189(2010).</li>
<li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+Agrobacterium-mediated+transformation+for+two+oomycete+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">A modified Agrobacterium-mediated transformation for two oomycete pathogens.</a> PLoS Pathog. 19 (4), e1011346(2023).</li>
<li>Wu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+Agrobacterium-mediated+sorghum+transformation+protocol+and+molecular+data+of+transgenic+sorghum+plants%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Plant%22%5BJournal%5D)">Optimized Agrobacterium-mediated sorghum transformation protocol and molecular data of transgenic sorghum plants.</a> In Vitro Cell Dev Biol Plant. 50 (1), 9-18 (2014).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TDNAscan%3A+A+software+to+identify+complete+and+truncated+T-DNA+insertions%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Genet%22%5BJournal%5D)">TDNAscan: A software to identify complete and truncated T-DNA insertions.</a> Front Genet. 10, 685(2019).</li>
<li>Navet, N., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agrobacterium-mediated+transformation+of+sweet+basil+%28Ocimum+basilicum%29%5BTitle%5D)+AND+%22Bio+Protoc%22%5BJournal%5D)">Agrobacterium-mediated transformation of sweet basil (Ocimum basilicum).</a> Bio Protoc. 10 (22), e3828-e3828 (2020).</li>
<li>Hasley, J., Dinulong, R. -J., Adhikari, A., Christopher, D., Tian, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome+editing+of+papaya+using+both+Cas9+and+Cas12a%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Genome editing of papaya using both Cas9 and Cas12a.</a> bioRxiv. , (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Tubos de microcentrífuga de 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>525-1126</td><td></td></tr><tr><td>4'-Hidroxi-3',5' dimetoxiacetofenona</td><td>TCI</td><td>D2666</td><td>Acetosiringona (AS)</td></tr><tr><td>Tubo de 50 mL</td><td>Greiner Bio-one</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>Etanol Absoluto</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP28184</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP1423-500</td><td></td></tr><tr><td>Papel alumínio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana Hybond-N+ (30 cm e vezes 3 m)</td><td>Cytiva</td><td>RPN303B</td><td></td></tr><tr><td>Carbonato de cálcio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>239216-500G</td><td>CaCO3</td></tr><tr><td>Cefotaxima sal de sódio</td><td>Termo-Química Científica</td><td>AAJ6269006</td><td></td></tr><tr><td>D-(+)-glicose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Kit Microbiano DNeasy PowerLyzer</td><td>Qiagen</td><td>12255-50</td><td></td></tr><tr><td>Pinças</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>Zeiss</td><td></td><td>Microscópio de fluorescência ZEISS Axioscope 5 com conjunto de filtro 38 HE</td></tr><tr><td>G418 sulfato</td><td>Termo-Química Científica</td><td>AC329400010</td><td></td></tr><tr><td>Glicerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>911046-1L</td><td></td></tr><tr><td>Hemacitômetro (Linha Brilhante)</td><td>Hausser Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de kanamicina</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-257635</td><td></td></tr><tr><td>L-Asparagina anidro</td><td>MP Biomédicos</td><td>ICN10079425</td><td></td></tr><tr><td>LB Broth, Miller</td><td>Biorreagentes Fisher</td><td>BP1426-2</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de magnésio heptahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63138-250G</td><td>MgSO4&middot; 7H2O</td></tr><tr><td>MES Hydrate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2933-100G</td><td></td></tr><tr><td>Médio Basal Murashige e Skoog</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5519-50L</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Petri (100 mm x 15 mm)</td><td>VWR</td><td>25384-342</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrofosfato de potássio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1370391000</td><td>KH2PO4</td></tr><tr><td>Rifampicina</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-200910</td><td></td></tr><tr><td>Taq 2X Master Mix</td><td>NEB</td><td>M0270L</td><td></td></tr><tr><td>Cloridrato de tiamina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T4625-5G</td><td></td></tr><tr><td>Espectrofotômetro UV-Visível</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-385-355</td><td></td></tr><tr><td>V8 Original 100% Suco de Vegetais</td><td>Companhia de Sopas Campbell</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vórtice</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-955-163</td><td></td></tr><tr><td>Água</td><td></td><td></td><td>Grau de Biologia Molecular, purificado usando o sistema de purificação de água Mill-Q</td></tr><tr><td>Extrato de Levedura</td><td>ACROS</td><td>611805000</td><td>Atualmente disponível pela Thermo Scientific Chemicals</td></tr><tr><td>&beta;-Sitosterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>85451-100G</td><td></td></tr></tbody></table>

um método simplificado para a transformação mediada por agrobactérias de phytophthora palmivora

A Simplified Method for Agrobacterium-mediated Transformation of Phytophthora palmivora

Um método simplificado para a transformação mediada por agrobactérias de Phytophthora palmivora

Phytophthora is an oomycete genus that contains numerous destructive plant pathogens, among which is the broad-host-range species P. palmivora. Functional ...

a-simplified-method-for-agrobacterium-mediated-transformation

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Polietileno Glicol eficiente Transformação Mediada (PEG) do Moss Physcomitrella patens</em

Neste vídeo, demonstramos a transformação genética do genoma do arroz usando um vetor binário de Agrobacterium tumefaciens. Esta bactéria facilita a transferência de um plasmídeo de DNA estranho usando proteínas de virulência de Agrobacterium.

Transformação genética mediada por agrobactérias: um método para transformar geneticamente o genoma do arroz por meio de Agrobacterium tumefaciens geneticamente modificado

A metodologia de alto rendimento, automatizada, produção e transformação de protoplastos de tabaco é descrito. O sistema robótico permite a expressão do gene massivamente paralelo e descoberta no sistema modelo BY-2 que podem ser traduzidas para as culturas não-modelo.

A plataforma robótica de alta capacidade de protoplastos Isolamento e Transformação

Planta de conexões intercelulares, os dictiossomos (Pd), desempenham um papel central na planta de interações planta-vírus e fisiologia. Crítica para o transporte de Pd está classificando os sinais que dirigem proteínas à polícia. No entanto, nosso conhecimento sobre estas sequências é ainda em sua infância. Nós descrevemos uma estratégia para identificar sinais de localização de Pd em proteínas Pd-alvo.

Identificação de sequências de localização Plasmodesmal em proteínas em Planta

Usando um vetor binário pBIBAC-GW faz gerar plantas transgénicas com inserções de cópia única intactas, um processo fácil. Aqui, uma série de protocolos é apresentada que guia o leitor através do processo de geração de plantas transgênicas de Arabidopsis e teste as plantas para integridade e copiar o número de inserções.

Geração de plantas transgênicas com inserções de cópia única usando vetor binário BIBAC-GW

Transformação mediada por Agrobacterium, usando um método de imersão floral pode ser empregada com sucesso para criar linhas transgênicas estáveis do modelo extremophyte Schrenkiella parvula. Apresentamos um protocolo modificado do que para a Arabidopsis thaliana, considerando o crescimento de diferentes hábitos e características fisiológicas do extremophyte.

Planta de crescimento e transformação de Floral-mergulho mediada por Agrobacterium do Extremophyte Schrenkiella parvula

Aqui, apresentamos dois protocolos para transformar plantas de batata. A transformação de Agrobacterium tumefaciens leva a uma planta transgénica completa enquanto o Agrobacterium rhizogenes produz raízes peludas transgênicas em uma selvagem tipo de fotos que podem ser propagados Self. Nós então detectar atividade de promotor por GUS coloração nas raízes transformadas.

Agrobacterium tumefaciens e Agrobacterium rhizogenes-transformação mediada de batata e a atividade de promotor de um Gene de suberina por GUS Staining

Genes morfogênicos vegetais podem ser usados para melhorar a transformação genética de genótipos recalcitrantes. Descrito aqui está um protocolo de transformação genética mediado pela Agrobacterium(QuickCorn) para três importantes linhas de milho público.

Agrobacterium-Transformação de embrião imaturo mediado de linhas de milho recalcitrante usando genes morfogênicos

Devido à sua versátil aplicação como espécie-modelo em vários campos de estudo, há a necessidade de um kit de ferramentas de transformação genética em banana-da-terra (Plantago lanceolata) de  folha estreita. Aqui, utilizando a transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, é apresentado um protocolo que resulta em linhagens transgênicas estáveis com eficiência de transformação de 20%.

Transformação Genética Mediada por Agrobacterium tumefaciens de Plátano de Folha Estreita

Este protocolo descreve a utilização da transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens (AMT) para integrar gene(s) de interesse no genoma nuclear da microalga verde Chlorella vulgaris, levando à produção de transformantes estáveis.

Engenharia Genética Mediada por Agrobacterium tumefaciens de Microalgas Verdes, Chlorella vulgaris

Aqui, apresentamos o protocolo detalhado de um método de transformação em uma etapa mediado por Agrobacterium tumefaciens para produzir plantas compostas.

Um Método Eficiente e Reprodutível para Produção de Compósitos por Transformação de Raízes Pelosas à Base de Agrobacterium rhizogenes

Aprenda um método simplificado de transformação mediada por Agrobacterium para Phytophthora palmivora e P. capsici. Este protocolo reprodutível facilita estudos de função gênica em patógenos de plantas.

Um método simplificado para a transformação mediada por agrobactérias de Phytophthora palmivora

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