Visualização de Nectários Foliares e Bracteais do Algodão Usando Microscopia Digital para Melhorar a Precisão da Pontuação e a Preservação de Dados

O estudo atual tem como objetivo o método que avalia com precisão a expressão do traço nectário. Para ilustrar a expressão da característica nectária, tanto as folhas de algodão quanto as néctaras bractáceas foram usadas como tecidos modelo. Esse método supera as limitações da pontuação tradicional, que é pouco confiável e imprecisa para a pontuação de comércio nectâneo.

Para começar, transporte um cooler e sacos Ziploc rotulados para a estufa para coleta de amostras, colete tecido de folhas jovens de plantas de algodão cultivadas em estufa de dois a três meses e coloque nos sacos de amostra rotulados. Coloque pelo menos duas folhas por amostra de planta no respectivo saco rotulado e feche o saco com segurança após a coleta. Coloque cada saco de amostra lacrado contendo tecido foliar no cooler.

Colha flores saudáveis dos galhos superiores quando as plantas estiverem no estágio médio de floração. Coloque pelo menos duas flores em um saco de amostra rotulado e feche o saco. Transfira os sacos de amostras lacrados contendo flores para o cooler para transporte ao laboratório.

Ligue um microscópio e complete as etapas iniciais de inicialização. Coloque uma folha branca A4 meio dobrada, cortada para combinar com o tamanho do palco do microscópio, sobre a plataforma. Use os pequenos botões de luz do controle do console para ajustar a luz no palco do microscópio até a intensidade máxima.

Depois, gire o botão grande de brilho três quartos do caminho para colocá-lo em médio-alto. No computador, selecione ampliação 10x no software do microscópio. Coloque o tecido foliar sobre a folha branca pré-cortada no palco do microscópio com o lado abaxial voltado para cima e centralize-o no palco.

Gire suavemente os botões de ajuste e de ajuste fino para focar na nervura central da folha. Continue ajustando até que a imagem pareça clara e sem desfoque. Posicione a extremidade inferior da nervura média onde o nectário está localizado no centro do campo de visão, garantindo uma visibilidade clara das veias laterais divergentes.

Usar os botões de ajuste de percurso e finos refina ainda mais o foco para melhorar a clareza da imagem digital. Capture a imagem do nectário. Quando solicitado pelo software, salve a imagem com o número de identificação da amostra no local desejado e então atribua uma pontuação de um a quatro com base no fenótipo do nectário das folhas observado.

Use pinças ou a mão para remover as brácteas da flor. Coloque a flor em uma tábua de cortar limpa. Usando uma lâmina estéril, corte o caule da flor e faça uma incisão reta ao longo da borda das brácteas removidas.

Coloque o tecido floral preparado de cabeça para baixo sobre a folha branca pré-cortada no palco do microscópio. Use os botões de ajuste de curso e finos para melhorar a clareza da imagem exibida na tela. Salve a imagem com o número de identificação da amostra apropriado.

A pontuação digital da superfície abaxial da folha na parte inferior da costela média mostrou dois fenótipos, sendo que um pontuação não tem nectários na costela média. E ponto quatro com um nectário totalmente desenvolvido com néctar. Quando amostras de flores foram analisadas para nectários brácteos, dois fenótipos foram observados: o score um mostrando ausência de nectário e o score quatro mostrando néctar totalmente formado.

Imagens digitais de plantas nectárias mostraram claramente estruturas de néctar foliar e brácteo com ampliações de 10 x, 20 x e 40 x. Imagens digitais selecionadas das folhas correspondentes ao formato padrão de pontuação mostraram pontuação um com ausência de nectário, pontuação dois com um nectário subdesenvolvido, pontuação três com néctar menor e pontuação quatro com néctar totalmente desenvolvido. A pontuação precisa das plantas sem néctário das populações segregantes de cruzamentos sem nectário e sem nectário é essencial para a seleção de plantas sem néctaris que possam reduzir os danos causados por insetos vegetais, bem como as perdas de produtividade.

Portanto, a seleção dessa característica é importante para aplicações posteriores, como marcadores de DNA associados à característica sem nectário, que são ferramentas valiosas para seleção assistida por marcadores.