Name: Um Protocolo para Colheita de Suspensão de Célula Única de Córneas de Camundongos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-03T12:33:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Aprenda a preparar suspensões de células únicas de alta qualidade a partir de córneas intactas de camundongos. Este protocolo utiliza digestão enzimática sequencial com colagenase A e tripsina-EDTA, garantindo alta viabilidade celular e integridade do RNA para aplicações como scRNA-seq.

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<ol><li>Eghrari, A. O., Riazuddin, S. A., Gottsch, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+cornea%3Astructure%2C+function%2C+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Mol+Biol+Transl+Sci%22%5BJournal%5D)">Overview of the cornea:structure, function, and development.</a> Prog Mol Biol Transl Sci. 134, 7-23 (2015).</li>
<li>Delmonte, D. W., Kim, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+physiology+of+the+cornea%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cataract+Refract+Surg%22%5BJournal%5D)">Anatomy and physiology of the cornea.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (3), 588-598 (2011).</li>
<li>Zhang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+management%3Atargeting+the+ocular+surface+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Dry eye management:targeting the ocular surface microenvironment.</a> Int J Mol Sci. 18 (7), 1398(2017).</li>
<li>Dou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+identity+of+human+limbal+heterogeneity+involved+in+corneal+homeostasis+and+privilege%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Molecular identity of human limbal heterogeneity involved in corneal homeostasis and privilege.</a> Ocul Surf. 21, 206-220 (2021).</li>
<li>Adan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry%3Abasic+principles+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry:basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. 37 (2), 163-176 (2017).</li>
<li>Hwang, B., Lee, J. H., Bang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+sequencing+technologies+and+bioinformatics+pipelines%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA sequencing technologies and bioinformatics pipelines.</a> Exp Mol Med. 50 (8), 1-14 (2018).</li>
<li>Altshuler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discrete+limbal+epithelial+stem+cell+populations+mediate+corneal+homeostasis+and+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Discrete limbal epithelial stem cell populations mediate corneal homeostasis and wound healing.</a> Cell Stem Cell. 28 (7), 1248-1261.e8 (2021).</li>
<li>Kaplan, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+RNA+transcriptome+helps+define+the+limbal%2Fcorneal+epithelial+stem%2Fearly+transit+amplifying+cells+and+how+autophagy+affects+this+population%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Single-cell RNA transcriptome helps define the limbal/corneal epithelial stem/early transit amplifying cells and how autophagy affects this population.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 60 (10), 3570-3583 (2019).</li>
<li>Collin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+cell+atlas+of+human+cornea+that+defines+its+development%2C+limbal+progenitor+cells+and+their+interactions+with+the+immune+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A single cell atlas of human cornea that defines its development, limbal progenitor cells and their interactions with the immune cells.</a> Ocul Surf. 21, 279-298 (2021).</li>
<li>Liu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+method+for+achieving+a+single-cell+suspension+from+mouse+corneas%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Optimization of method for achieving a single-cell suspension from mouse corneas.</a> Exp Eye Res. 233, 109544(2023).</li>
<li>Espana, E. M., Birk, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition%2C+structure+and+function+of+the+corneal+stroma%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Composition, structure and function of the corneal stroma.</a> Exp Eye Res. 198, 108137(2020).</li>
<li>Topouzi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+isolation+and+3D+culture+of+dermal+papilla+cells+from+human+hair+follicles%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Methods for the isolation and 3D culture of dermal papilla cells from human hair follicles.</a> Exp Dermatol. 26 (6), 491-496 (2017).</li>
<li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+amniotic+membrane+de-epithelialization+method+on+its+biological+properties+and+ability+to+promote+limbal+epithelial+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">The effect of amniotic membrane de-epithelialization method on its biological properties and ability to promote limbal epithelial cell culture.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 54 (4), 3072-3081 (2013).</li>
<li>Hewett, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+human+endothelial+cells+from+micro-+and+macro-vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of human endothelial cells from micro- and macro-vessels.</a> Methods Mol Biol. 1430, 61-76 (2016).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Existence+of+small+slow-cycling+Langerhans+cells+in+the+limbal+basal+epithelium+that+express+ABCG2%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Existence of small slow-cycling Langerhans cells in the limbal basal epithelium that express ABCG2.</a> Exp Eye Res. 84 (4), 626-634 (2007).</li>
<li>Song, Z., Tsai, C. H., Mei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+different+methods+to+isolate+mouse+limbal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Comparison of different methods to isolate mouse limbal epithelial cells.</a> Exp Eye Res. 212, 108767(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Alexa Fluor 594 anti-coelho burro</td><td>Abcam</td><td>ab150064</td><td></td></tr><tr><td>Antiqueratina</td><td>Abcam</td><td>ab230175</td><td></td></tr><tr><td>Anti-pancitoqueratina</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AE1/AE3, Alexa FluorTM 488</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador de autoclave</td><td>An Shen</td><td>LDZH-100KBS</td><td></td></tr><tr><td>Albumina Sérica Bovina V</td><td>Solarbio</td><td>A8020</td><td></td></tr><tr><td>Filtro celular</td><td>NEST</td><td>258369</td><td>40 & mu; m</td></tr><tr><td>Máquina centrífuga</td><td>Eppendorf AG</td><td>22331 Hamburgo</td><td></td></tr><tr><td>Colagênase A</td><td>Roche</td><td>10103578001</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal</td><td>&nbsp; Oberkochen</td><td>Zeiss LSM 880</td><td></td></tr><tr><td>Placa de contagem</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>Tubo centrífugo</td><td>NEST</td><td>620611</td><td>2 mL, 50 mL</td></tr><tr><td>Cobertura</td><td>MARIENFELD</td><td>M407859</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Solarbio</td><td>C0065</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio dissecador</td><td>Carl ZEISS</td><td>VISU150</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12&nbsp; Mídia</td><td>Gibco</td><td>11320033</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Solarbio</td><td>D8371</td><td></td></tr><tr><td>Fetal&nbsp; bovino&nbsp; Soro</td><td>Gibco</td><td>16140071</td><td></td></tr><tr><td>Hidrocortisona</td><td>Solarbio</td><td>IH0100</td><td></td></tr><tr><td>IS</td><td>Gibco</td><td>23337619</td><td></td></tr><tr><td>Fator de crescimento epidérmico do camundongo</td><td>Invitrogen</td><td>PMG8041</td><td></td></tr><tr><td>cirurgia oftálmica&nbsp; Pinças</td><td>Dumot</td><td>0208-5-PO</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura cirúrgica oftálmica</td><td>FST</td><td>15021-15</td><td></td></tr><tr><td>Forno</td><td>AISITE</td><td>DH6000 II</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina & Estreptomicina</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>100mL</td></tr><tr><td>Placa de Petri</td><td>NEST</td><td>705201</td><td>60mm</td></tr><tr><td>Soro salino tamponado com fosfato</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora termostática</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3111</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td></td></tr><tr><td>Trippan Blue&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8070</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina/EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>R001100</td><td></td></tr><tr><td>Mesa ultra-limpadora</td><td>You Qi</td><td>VS-840-2</td><td></td></tr><tr><td>4% de paraformaldeído</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr></tbody></table>

um protocolo para colheita de suspensão de célula Única de córneas de camundongos

A Protocol for Harvesting Single-cell Suspension from Mouse Corneas

Um Protocolo para Colheita de Suspensão de Célula Única de Córneas de Camundongos

As the outermost layer of the eyeball, the cornea plays a critical role in maintaining ocular surface homeostasis and vision. Recent advances in ...

a-protocol-for-harvesting-single-cell-suspension-from-mouse-corneas

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este vídeo descreve uma técnica simples e que economiza tempo para a dissociação de tecidos automatizado utilizando o Dissociator gentleMACS para preparar uma única célula suspensões de esplenócitos mouse.

Preparação de uma única célula Suspensões de Spleen rato com o Dissociator gentleMACS

Dissociar as células de tipos de tecido específico requer parâmetros específicos para aggitation tecido para obter um volume elevado de viáveis, as células cultiváveis. A Miltenyi gentleMACS Dissociator otimiza essa tarefa com um protocolo simples e prática. Nesta publicação o uso deste aparelho no tecido nerual é explicado.

Geração de Single-Cell Tissue Suspensões de rato Neural

Neste vídeo, vamos demonstrar como isolar células-tronco na retina do epitélio ciliar do olho do rato e cultivá-las em cultura para dar forma clonal esferas da retina. As esferas que estão isolados possuem as propriedades cardeal de células-tronco: a auto-renovação e multipotencialidade.

Isolamento de Células-Tronco da retina do olho do rato

Este vídeo demonstra a cultura de células gliais de Müller (MG) isoladas de retinas de camundongos. As retinas são dissociadas em uma suspensão unicelular usando enzimas digestivas. As células são então cultivadas em um meio com um fator de crescimento que promove a proliferação de células MG e a mortalidade celular neuronal. As células neuronais mortas são removidas durante a passagem e as células MG são cultivadas para análise posterior.

Estabelecendo uma cultura de células gliais de Müller obtida de retinas de camundongos

Este vídeo demonstra o procedimento para isolar células ganglionares primárias da retina (RGCs) murinas usando citometria de fluxo. Este método permite o estudo futuro dos RGCs, com o objetivo de entender melhor o grande declínio na acuidade visual que resulta da perda de RGCs funcionais em doenças neurodegenerativas.

Isolando células ganglionares da retina murina usando classificação de células ativadas por fluorescência

A pele abriga uma complexa rede de células imunológicas. Descrevemos uma metodologia eficiente para a digestão da pele de camundongos, de diferentes partes do corpo do animal, a fim de obter uma suspensão unicelular e analisar as diferentes populações de leucócitos residentes na pele por citometria de fluxo.

Preparação de uma única célula suspensões para Análise de citometria de fluxo de diferentes regiões da pele do rato

Milhões de pessoas sofrem de doenças degenerativas da retina que resultam em cegueira irreversível. Um elemento comum de muitas dessas doenças é a perda de células ganglionares da retina (RGCs). Este protocolo detalhado descreve o isolamento de RGC murinos primários por seleção positiva e negativa com citometria de fluxo.

Isolamento de células de gânglio retiniano murino primário (RGCs) por citometria de fluxo

O epithelium retinal do pigment (RPE) é um epitélio multi-funcional do olho. Aqui nós apresentamos um protocolo para estabelecer culturas de célula primária derivadas o RPE murino.

Culturas de células primárias do Mouse epithelium Retinal do Pigment

O objetivo deste protocolo é isolar os queratinócitos epidérmicos da pele dorsal de camundongos adultos para uma variedade de aplicações a jusante, como biologia molecular, bioquímica, triagem de células ativadas por fluorescência e usos primários in vitro (por exemplo, clonogênicos queratinócitos).

Isolamento dos keratinócitos epidérmicos do camundongo e sua cultura Clonogênica in vitro

Este protocolo descreve um método para o isolamento de células endoteliais da retina pós-natais murinas otimizado para o rendimento, pureza e viabilidade celular. Essas células são adequadas para abordagens de sequenciamento de próxima geração.

Isolamento de células endoteliais da retina murinas para sequenciamento de próxima geração

O epitélio pigmentar da retina (EPR) atua como uma barreira crucial entre a coróide e a retina, promovendo a saúde e a função dos tipos de células da retina, como os fotorreceptores. Aqui, descrevemos um protocolo simples e eficaz para isolar e cultivar EPR murino adulto.

Um método simplificado para isolamento e cultura de células epiteliais pigmentares da retina de camundongos adultos

Aprenda a preparar suspensões de células únicas de alta qualidade a partir de córneas intactas de camundongos. Este protocolo utiliza digestão enzimática sequencial com colagenase A e tripsina-EDTA, garantindo alta viabilidade celular e integridade do RNA para aplicações como scRNA-seq.

Um Protocolo para Colheita de Suspensão de Célula Única de Córneas de Camundongos

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