Name: Teste de Neutralização de Redução de Fluorescência do Vírus Hepatite E para Medição de Títulos de Anticorpos Neutralizantes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-22T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 58 s
Description: Aprenda o teste de neutralização por redução de fluorescência para medir títulos de anticorpos neutralizantes contra o vírus da hepatite E. Este método utiliza células Huh7 e análise por ImageJ para avaliar candidatos a vacinas.

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<li>Kaushik, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zinc+salts+block+hepatitis+E+virus+replication+by+inhibiting+the+activity+of+viral+RNA-dependent+RNA+polymerase%5BTitle%5D)+AND+%22J+Virol%22%5BJournal%5D)">Zinc salts block hepatitis E virus replication by inhibiting the activity of viral RNA-dependent RNA polymerase.</a> J Virol. 91 (21), 10-1128 (2017).</li>
<li>Gupta, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiviral+activity+of+zinc+oxide+nanoparticles+and+tetrapods+against+the+Hepatitis+E+and+Hepatitis+C+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antiviral activity of zinc oxide nanoparticles and tetrapods against the Hepatitis E and Hepatitis C viruses.</a> Front Microbiol. 13, 881595(2022).</li>
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<li>Gremmel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+E+virus+neutralization+by+porcine+serum+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Hepatitis E virus neutralization by porcine serum antibodies.</a> J Clin Microbiol. 61 (11), e00373-23(2023).</li>
<li>Cai, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+high-throughput+neutralizing+assay+for+antibodies+and+sera+against+hepatitis+E+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A high-throughput neutralizing assay for antibodies and sera against hepatitis E virus.</a> Sci Rep. 6 (1), 25141(2016).</li>
<li>Liu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+high-throughput+neutralization+assay+for+hepatitis+E+virus+%28HEV%29+involving+detection+of+secreted+Porf2%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">An optimized high-throughput neutralization assay for hepatitis E virus (HEV) involving detection of secreted Porf2.</a> Viruses. 11 (1), 64(2019).</li>
<li>Meng, J., Dubreuil, P., Pillot, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+PCR-based+seroneutralization+assay+in+cell+culture+for+diagnosis+of+hepatitis+E%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">A new PCR-based seroneutralization assay in cell culture for diagnosis of hepatitis E.</a> J Clin Microbiol. 35 (6), 1373-1377 (1997).</li>
<li>Emerson, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Putative+neutralization+epitopes+and+broad+cross-genotype+neutralization+of+Hepatitis+E+virus+confirmed+by+a+quantitative+cell-culture+assay%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gen+Virol%22%5BJournal%5D)">Putative neutralization epitopes and broad cross-genotype neutralization of Hepatitis E virus confirmed by a quantitative cell-culture assay.</a> J Gen Virol. 87 (3), 697-704 (2006).</li>
<li>Deshmukh, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+candidate+hepatitis+E+virus+DNA+vaccine+expressing+complete+and+truncated+ORF2+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of candidate hepatitis E virus DNA vaccine expressing complete and truncated ORF2 in mice.</a> Vaccine. 25 (22), 4350-4360 (2007).</li>
<li>Gupta, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression%2C+purification+and+characterization+of+the+hepatitis+E+virus+like-particles+in+the+Pichia+pastoris%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Expression, purification and characterization of the hepatitis E virus like-particles in the Pichia pastoris.</a> Front Microbiol. 11, 141(2020).</li>
<li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+Reduction+Neutralization+Test%3A+A+novel%2C+rapid%2C+and+efficient+method+for+characterizing+the+neutralizing+activity+of+antibodies+against+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Issues+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Fluorescence Reduction Neutralization Test: A novel, rapid, and efficient method for characterizing the neutralizing activity of antibodies against dengue virus.</a> Curr Issues Mol Biol. 47 (3), 140(2025).</li>
<li>Bewley, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+SARS-CoV-2+neutralizing+antibody+by+wild-type+plaque+reduction+neutralization%2C+microneutralization+and+pseudotyped+virus+neutralization+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by wild-type plaque reduction neutralization, microneutralization and pseudotyped virus neutralization assays.</a> Nat Protoc. 16 (6), 3114-3140 (2021).</li>
<li>Islam, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutralizing+antibodies+against+the+Japanese+encephalitis+virus+are+produced+by+a+12%C3%A1kDa+E+coli+expressed+envelope+protein+domain+III+%28EDIII%29+tagged+with+a+solubility-controlling+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Neutralizing antibodies against the Japanese encephalitis virus are produced by a 12ákDa E coli expressed envelope protein domain III (EDIII) tagged with a solubility-controlling peptide.</a> Vaccine. 56, 127143(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1.5 mL microfuge tubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>12-well cell culture dish</td><td>Corning</td><td>3512</td><td></td></tr><tr><td>37 degree incubator shaker</td><td>Thermo Scientific</td><td>50163013</td><td></td></tr><tr><td>4&prime;,6-diamidino-2-phenylindole</td><td>Abcam</td><td>AB104139</td><td>DAPI</td></tr><tr><td>50mL centrifuge tube</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>6-well cell culture dish</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>Alexa flour 594 secondary IgG Antibody</td><td>Thermo Scientific</td><td>A-11012</td><td></td></tr><tr><td>Anti-ORF2 antibody</td><td>Genscript</td><td>NA</td><td>Custom synthesized by Genscript and characterized in our laboratory14</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG antibody</td><td>Genscript</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>HIMEDIA</td><td>MB083</td><td>BSA</td></tr><tr><td>Confocal microscope</td><td>Olympus</td><td>FV3000</td><td></td></tr><tr><td>DMEM, high glucose</td><td>HIMEDIA</td><td>AL007A</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>GIBCO</td><td>16000-044</td><td>FBS</td></tr><tr><td>ImageJ 1.54g</td><td>ImageJ.org (Wayne Rasband and contributors, NIH, USA)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Normal Goat Serum</td><td>HIMEDIA</td><td>RM-10701</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>HIMEDIA</td><td>GRN3660</td><td>PFA</td></tr><tr><td>Phosphate Buffer Saline pH 7.4</td><td>HIMEDIA</td><td>TL1006</td><td>PBS</td></tr><tr><td>Polyethyleneglycol 6000</td><td>SIGMA</td><td>81255</td><td>PEG6000</td></tr><tr><td>SOLIScript 1-step Probe Kit</td><td>SOLIS BIODYNE</td><td>08-57-00250</td><td></td></tr><tr><td>TRI reagent</td><td>Molecular Research Centre</td><td>TR118</td><td></td></tr><tr><td>Triton X100</td><td>SIGMA</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>GIBCO</td><td>25300-54</td><td></td></tr></tbody></table>

teste de neutralização de redução de fluorescência do vírus hepatite e para medição de títulos de anticorpos neutralizantes

Hepatitis E Virus Fluorescence Reduction Neutralization Test for Measuring Neutralizing Antibody Titers

Teste de Neutralização de Redução de Fluorescência do Vírus Hepatite E para Medição de Títulos de Anticorpos Neutralizantes

Virus neutralization assay measures the neutralization potential of an antibody or a mixture of antibodies against the corresponding virus. It is a ...

hepatitis-e-virus-fluorescence-reduction-neutralization-test-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra ensaios de microneutralização para medir anticorpos neutralizantes usando células renais caninas Madin-Darby que superexpressam ácido siálico ligado a α2,6 em soros humanos. Este ensaio é frequentemente usado para sorologia humana para...

Um ensaio de microneutralização para medir títulos de anticorpos neutralizantes em soro humano

Este vídeo demonstra um ensaio que mede os títulos de anticorpos inibidores da neuraminidase (NA) da influenza em uma amostra de soro. Uma amostra de soro contendo anticorpos contra NA é adicionada a uma placa de micropoços revestida com fetuína. Ao adicionar o vírus, os anticorpos impedem que o NA viral clive a fetuína e exponha sua porção galactose. Uma lectina conjugada com peroxidase é então adicionada, que se liga à galactose exposta. O título de anticorpos inibidores de NA é determinado...

Um ensaio para medir os títulos de anticorpos de inibição da neuraminidase da influenza

Este vídeo demonstra um ensaio de imunofluorescência projetado para medir a neutralização do citomegalovírus humano (HCMV). Anticorpos específicos do vírus são misturados com o vírus e incubados com células de fibroblastos humanos. Os anticorpos neutralizam o vírus, tornando-o incapaz de infectar as células hospedeiras, enquanto os vírus não neutralizados infectam as células. Após a incubação, a extensão da neutralização é determinada quantificando as células infectadas pelo vírus usando...

Um método de imunofluorescência para medir a neutralização do citomegalovírus humano

Este vídeo mostra um ensaio de neutralização que mede a eficácia do soro na neutralização do vírus SARS-CoV-2. Envolve vírus pseudotipados, diluição do soro e quantificação baseada em luminescência, revelando o título de neutralização.

Avaliação de anticorpos neutralizantes funcionais contra SARS-CoV-2

Descrevemos o ensaio de lectina enzimática (ELLA) para medir os títulos de anticorpos de inibição da neuraminidase (NA) da influenza em soros. O ensaio usa aglutinina de amendoim para quantificar os resíduos de galactose que se tornam acessíveis quando a NA remove o ácido siálico de placas de 96 poços revestidas com fetuína.

Medição de Inibição da Neuraminidase Influenza títulos de anticorpos por Enzyme-linked Lectina Ensaio

Este estudo descreve uma   -Imagem baseada ensaio de micro-neutralização para analisar as relações antigênicas entre vírus. O protocolo emprega um digitalizador de mesa e tem quatro passos, incluindo titulação, a quantificação de titulação, neutralização, e quantificação de neutralização. O ensaio funciona bem com pdm09 corrente circulante vírus influenza A (H1N1), A (H3N2), e B vírus.

Optimização de um Micro-quantitativa Ensaio de neutralização

Nós descrevemos um método pelo qual podemos identificar resíduos críticos necessários para a ligação de anticorpos monoclonais humanos ou murino que se destinam a hemaglutinina viral do vírus da influenza A. O protocolo pode ser adaptado para outras glicoproteínas de superfície do vírus e suas correspondentes anticorpos neutralizantes.

Geração de variantes de fuga de neutralizar os anticorpos monoclonais de vírus da gripe

Anticorpos neutralizantes gripe correlacionam com proteção de infecções de gripe. Microneutralization ensaios medem anticorpos neutralizantes em soros humanos e são frequentemente utilizados para sorologia humana da gripe. Descrevemos um ensaio de microneutralization usando células MDCK-SIAT1 para medir os anticorpos neutralizantes para contemporâneas 3C.2a e 3C.3a A(H3N2) vírus após vacinação gripe ou infecção.

Medição da gripe neutralizando Antibody Responses to A(H3N2) vírus em soros humanos por Microneutralization ensaios usando as células MDCK-SIAT1

Aqui nós apresentamos um método de citometria de fluxo baseados em células para detectar anticorpos neutralizantes ou outros fatores que interferem com a absorção celular de terapias de substituição enzimática em uma matriz humana, tais como fluido espinal cerebral (CSF) ou soro humano.

Anticorpos que neutralizam a absorção celular de terapias de substituição enzimática com um ensaio de baseada em célula de

Descrito aqui é um método eficaz sobre como produzir altos estoques virais de vírus de hepatite E (HEV) para infectar eficientemente as células hepatomas. Com o método apresentado, tanto não envolta, quanto partículas virais envoltas podem ser colhidas e utilizadas para inocular várias linhas celulares.

Um modelo de cultura celular para produzir estoques de vírus de hepatite E de alta titer

Aqui descrevemos um protocolo para empacotamento de pseudovírus e a medição da atividade neutralizante de anticorpos.

Preparação de Vírus da Influenza Aviária H5 Pseudotipados com Método de Transfecção de Fosfato de Cálcio e Mensuração da Atividade Neutralizante de Anticorpos

Aprenda o teste de neutralização por redução de fluorescência para medir títulos de anticorpos neutralizantes contra o vírus da hepatite E. Este método utiliza células Huh7 e análise por ImageJ para avaliar candidatos a vacinas.

Teste de Neutralização de Redução de Fluorescência do Vírus Hepatite E para Medição de Títulos de Anticorpos Neutralizantes

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