Name: Testando a barreiras fisiológicas para a transmissão viral em Aphids Usando microinjeção (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:16:00.000+00:00
Duration: 6 min 1 s
Description: Aprenda a técnica de microinjeção de vírus na hemolinfa de afídeos, contornando a barreira intestinal para estudar transmissão viral em plantas. Este método permite investigar mecanismos de patogenicidade e desenvolver estratégias de manejo de doenças em culturas.

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<ol><li> Para testar se um pulgão é capaz de vetor um vírus, nós alimentamos os pulgões em tecido infectado por 2 dias. </li><li> Então, nós permitimos que a alimentação de uma planta saudável durante 5 dias. A planta é, então, fumigado e depois de 3 semanas, iniciar a procura de sintomas. </li><li> Quando encontramos um pulgão que não podem vetor um vírus, podemos avaliar qual das duas barreiras é impedir que o vírus através de um procedimento de microinjeção. </li><li> O vírus é injetado diretamente na hemocele, ultrapassando assim a barreira de transmissão intestino. </li></ol> Visite <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825">Comentários Anual de Biologia Vegetal</a> para obter mais informações sobre esta imunidade protocolo e planta à herbivoria de insetos.

Os autores não têm nada a declarar.

testando a barreiras fisiológicas para a transmissão viral em aphids usando microinjeção

Testing the Physiological Barriers to Viral Transmission in Aphids Using Microinjection

Batata loafroll vírus (PLRV), a partir da família Luteoviridae infecta solanáceas. É transmitida por pulgões, principalmente, o pulgão-verde. Quando um pulgão infectado se alimenta de uma planta infectada se contrai o vírus através do floema da planta. Uma vez ingerido, o vírus tem de passar pelo intestino do inseto à hemolinfa (o sangue do inseto), e depois devem passar pela glândula salivar, a fim de ser transmitido de volta para uma nova planta. Um afídeo pode levar até vírus diferente quando mastigando uma planta, no entanto, apenas uma pequena fração passará a glândula salivar e intestino, as duas principais barreiras para a transmissão de infectar mais plantas. No laboratório, usamos plantas physalis para estudar a transmissão PLRV. Nesta série, os sintomas são caracterizados por clorose e nanismo intervenal (amarelecimento das folhas entre as veias com as veias restantes verde). O vídeo que apresentamos demonstra um método para a realização de microinjeção pulgão-se de insetos que não vírus vector PLVR e testa se o intestino é prevenir a transmissão viral. O vídeo que apresentamos demonstra um método para a realização de microinjeção Aphid sobre insetos que não vírus vector PLVR e testa se o intestino ou glândula salivar é a prevenção da transmissão viral.

Pulgões são transmissores eficazes de vírus de plantas. Microinjeção pulgão do vírus, o procedimento que irá mostrar-lhe hoje, é uma técnica permitindo que os pesquisadores injetam vírus diretamente no hemocele do pulgão, contornando o intestino, uma das duas principais barreiras para a transmissão do vírus de uma maneira circulativo. A mesma técnica também é usada para injetar dsRNA para RNAi.

Testando a barreiras fisiológicas para a transmissão viral em Aphids Usando microinjeção

O vírus do enrolamento da folha da batata (PLRV), da família Luteoviridae, infecta plantas solanáceas. É transmitido por afídeos, principalmente pelo afídeo-verde-do-pêssego. Quando ...

Se são transmissores eficazes de vírus de plantas, se é por microinjeção do vírus, o procedimento que vamos mostrar hoje é uma técnica que permite aos pesquisadores injetar o vírus diretamente na célula hemocítica do AFib, contornando o intestino, uma das duas barreiras principais para a transmissão do vírus de forma circulativa. Olá, sou Cecilia Tamrin Dehi, pós-doutoranda no departamento de patologia vegetal da Universidade Cornell. Hoje vou mostrar a vocês como injetar vírus nas células hemocíticas do AFI, vírus esse que pode então ser transmitido a diferentes espécies de plantas.Por exemplo, esta planta de FE está infectada com o vírus do murchamento da batata (PLRV). É possível observar a diferença entre uma planta sadia e uma infectada. O sintoma mais notável é a esclerose taven.O VPLR é um vírus luteiro que é transportado pelo APHIS em seu hemolinfa, o equivalente inseto ao sangue de mamíferos. Quando um AFI não infectado se alimenta de uma planta infectada, contrai o vírus através do suco da planta, que você pode ver aqui. Após a ingestão, o vírus deve passar do intestino do inseto para a hemolinfa e, em seguida, atravessar a glândula salivar para ser transmitido de volta à planta ESE.E se for necessário muitos vírus durante a alimentação em uma planta ESE, no entanto, apenas uma fração maior passará pelo intestino e pela glândula salivar. As duas principais barreiras para a transmissão que infectam mais plantas a serem testadas. Se um AFI for inativado para vetar um vírus, alimentamos os AFIs com tecido infectado por dois dias, depois permitimos que se alimentem em uma planta sadia por cinco dias.A planta é então fumigada e, após três semanas, começamos a buscar sintomas. Quando encontramos um AFib que não consegue transmitir um vírus, podemos avaliar qual das duas barreiras está impedindo a transmissão viral utilizando o procedimento de microinjeção, que vou mostrar a vocês hoje. Neste procedimento, o vírus é injetado diretamente na hemocele, contornando diretamente a barreira de transmissão intestinal.Então, vamos começar e eu vou mostrar como microinjetar alguns ápices. Este é o vidro, as agulhas de vidro que utilizamos. Nós puxamos as agulhas de vidro a partir dessas hastes de vidro usando o APU apu.Então, este é o microinjetor. Para realizar a microinjeção de um vírus. Vou começar a inserir a agulha no suporte da agulha.Então, estou apenas colocando a agulha e posicionando-a. Agora vou carregar o vírus na agulha até o topo deste reservatório. Agora precisamos posicionar o AFI para microinjeção.Então, vou pegar um AFI com a pressão da dor e vou colocá-lo no suporte do AFI. Idealmente, tentarei posicionar a parte traseira do afídeo contra o suporte para ter acesso à parte abdominal do AFib. Ok, ótimo.Agora podemos prosseguir com a microinjeção. Ok, agora vou posicionar a agulha e aproximá-la do AFib. Então, agora vou trazer a agulha em contato com o AFib e perfurar o exoesqueleto; o ideal é tentar perfurar entre os segmentos na base das pernas.Então, vou fazer a injeção. Agora estou retirando o AFI com o pincel e colocando no papel de recuperação, onde vou deixá-lo repousar por um momento. Portanto, também precisamos microinjetar o AFI controle.Esta microinjeção de controle é realizada apenas com o tampão, sem o vírus. O tampão que utilizamos é tampão fosfato 0,1 M, pH 7. Assim, vou aplicar o afi em uma planta sadia, onde vou mantê-lo por cinco dias; após esse período, vou infectar a planta e aguardar o desenvolvimento de sintomas após a microinjeção do ácido nucleico de fita simples durante uma semana. A cada dia, o nível de expressão do gene alvo é medido no afi.Então, acabamos de microinjetar um AFI que era incapaz de transmitir o vírus. Se, após a microinjeção, o AFI for capaz de transmitir o vírus, isso significará que esse AFI possui uma barreira intestinal que estava bloqueando o vírus. Se, por outro lado, não houver desenvolvimento de sintomas, significará que esse AFI possui uma barreira forte nas glândulas salivares.Portanto, acabamos de mostrar como microinjetar vírus nos afídeos. Esse mesmo procedimento é utilizado para microinjetar RNA de fita simples nos afídeos e realizar interferência por RNAi, uma técnica interessante para auxiliar no estudo da função gênica em afídeos. Assim, conclui-se a microinjeção.Espero que goste e que seja útil para os seus experimentos. Obrigado.

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Biologia

Neste vídeo e ensaio é demonstrar que testa a tolerância de nicotina para dois tipos de pulgões que infestam plantas de tabaco no campo e uma que não.

Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial

Neste vídeo, demonstramos duas técnicas microaplicador usados ​​para infectar de larvas de lepidópteros com baculovírus, a fim de determinar a eficiência inseticida.

Protocolos para microaplicador assistida infecção de lagartas de Lepidoptera com Baculovirus

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Identificação de condições críticas para Immunostaining no Pea Aphid Embriões: Aumento Tissue permeabilidade e diminuir a coloração de fundo

O pulgão Aphis nerii coloniza altamente defendido das plantas pertencente à família (Apocyanaceae) e oferece inúmeras oportunidades para estudar interações inseto-planta. Aqui, apresentamos uma série de protocolos para a manutenção da planta e pulgão, culturas e a geração e análise molecular e - omic dados pela . nerii.

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Este protocolo descreve uma metodologia de microinjeção que temos padronizado e utilizado por vários anos para entregar quantidades específicas de ácidos nucleicos diretamente a hemolinfa de mosquitos e moscas domésticas. Este protocolo resulta em mortalidade de injeção mínima e permite medições de dose correlacionado de fecundidade.

Reprodutível dsRNA Microinjection e Bioassay de oviposição em mosquitos e moscas domésticas

Este protocolo descreve como estabelecer infecção viral na vivo em Drosophila melanogaster , usando o método de nano-injeção e técnicas básicas para analisar a interação vírus-hospedeiro.

Estabelecimento de infecção Viral e análise da interação vírus-hospedeiro em Drosophila Melanogaster.

Aqui descrevemos dois protocolos: primeiro para propagar, extrair, purificar e quantificar grandes quantidades de partículas de vírus não envoltas em abelhas, incluindo um método para remover pupas de abelha mel e segundo para testar os efeitos da infecção viral usando um bioensaão de gaiola altamente repetigível e de alto rendimento.

Preparação do Inóculo Enriquecido por Vírus para Infecção Oral de Abelhas (Apis mellifera)

Essa metodologia, que incluiu alimentação por via oral e infecção por injeção intratorácica, foi capaz de avaliar efetivamente a influência das barreiras do intestino médio e/ou glândulas salivares na infecção por arbovírus.

Infecção viral experimental em mosquitos adultos por alimentação oral e microinjeção

Descrevemos um método para coletar hemolinfa quantificável eficientemente de pequenos artrópodes para posterior análise.

Um Método Preciso e Quantificável para Coleta de Hemolinfa de Pequenos Artrópodes

Este protocolo apresenta um sistema otimizado de bioensaio foliar destacado para avaliar a eficácia de fungos entomopatogênicos (FPE) contra o pulgão mostarda (Lipaphis erysimi (Kalt.)), um inseto partenogenético. O método descreve o processo de coleta de dados durante os experimentos com placas de Petri, permitindo que os pesquisadores meçam consistentemente a virulência do PFE contra pulgões da mostarda e outros insetos partenogenéticos.

Avaliação do Efeito Afidicida de Fungos Entomopatogênicos Contra Insetos Partenogenéticos, Pulgão Mostarda, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Aprenda a técnica de microinjeção de vírus na hemolinfa de afídeos, contornando a barreira intestinal para estudar transmissão viral em plantas. Este método permite investigar mecanismos de patogenicidade e desenvolver estratégias de manejo de doenças em culturas.

Testando a barreiras fisiológicas para a transmissão viral em Aphids Usando microinjeção

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