Name: Avaliação funcional da barreira epitelial gengival de camundongos usando traçadores fluorescentes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-27T13:35:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a avaliar a integridade da barreira epitelial gengival em camundongos usando dextranos fluorescentes e microscopia de fóton único. Este método permite quantificar a permeabilidade paracelular em modelos de doenças orais.

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<ol><li>Zhang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+the+protection+of+gingival+epithelial+barrier+by+interleukin-22+through+regulating+microbiota+and+E-cadherin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Zhonghua+Kou+Qiang+Yi+Xue+Za+Zhi%22%5BJournal%5D)">Study on the protection of gingival epithelial barrier by interleukin-22 through regulating microbiota and E-cadherin expression.</a> Zhonghua Kou Qiang Yi Xue Za Zhi. 59 (7), 653-662 (2024).</li>
<li>Presland, R. B., Jurevic, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Making+sense+of+the+epithelial+barrier%3A+what+molecular+biology+and+genetics+tell+us+about+the+functions+of+oral+mucosal+and+epidermal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Educ%22%5BJournal%5D)">Making sense of the epithelial barrier: what molecular biology and genetics tell us about the functions of oral mucosal and epidermal tissues.</a> J Dent Educ. 66 (4), 564-574 (2002).</li>
<li>Costello, E. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+community+variation+in+human+body+habitats+across+space+and+time%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Bacterial community variation in human body habitats across space and time.</a> Science. 326 (5960), 1694-1697 (2009).</li>
<li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+normal+bacterial+flora+of+the+oral+cavity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Defining the normal bacterial flora of the oral cavity.</a> J Clin Microbiol. 43 (11), 5721-5732 (2005).</li>
<li>Meyle, J., Chapple, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+aspects+of+the+pathogenesis+of+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontol+2000%22%5BJournal%5D)">Molecular aspects of the pathogenesis of periodontitis.</a> Periodontol 2000. 69 (1), 7-17 (2015).</li>
<li>Oriuchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+lipopolysaccharide+damages+mucosal+barrier+to+promote+gastritis-associated+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Dis+Sci%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide damages mucosal barrier to promote gastritis-associated carcinogenesis.</a> Dig Dis Sci. 69 (1), 95-111 (2024).</li>
<li>Takeuchi, H., Nakamura, E., Yamaga, S., Amano, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+infection+induces+lipopolysaccharide+and+peptidoglycan+penetration+through+gingival+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oral+Health%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis infection induces lipopolysaccharide and peptidoglycan penetration through gingival epithelium.</a> Front Oral Health. 3, 845002(2022).</li>
<li>Abe, T., Hajishengallis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+ligature-induced+periodontitis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice.</a> J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).</li>
<li>Chatterjee, A., Bhattacharya, H., Kandwal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+in+periodontal+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Indian+Soc+Periodontol%22%5BJournal%5D)">Probiotics in periodontal health and disease.</a> J Indian Soc Periodontol. 15 (1), 23-28 (2011).</li>
<li>Shin, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photon-efficient+imaging+with+a+single-photon+camera%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Photon-efficient imaging with a single-photon camera.</a> Nat Commun. 7, 12046(2016).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+endothelial+tight+junctions+to+predict+and+protect+thoracic+aortic+aneurysm+and+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Targeting endothelial tight junctions to predict and protect thoracic aortic aneurysm and dissection.</a> Eur Heart J. 44 (14), 1248-1261 (2023).</li>
<li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foxf1+maintains+endothelial+barrier+function+and+prevents+edema+after+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Signal%22%5BJournal%5D)">Foxf1 maintains endothelial barrier function and prevents edema after lung injury.</a> Sci Signal. 9 (424), ra40(2016).</li>
<li>Hou, A., Mohamed Ali, S., Png, E., Hunziker, W., Tong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transglutaminase-2+is+critical+for+corneal+epithelial+barrier+function+via+positive+regulation+of+claudin-1%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">Transglutaminase-2 is critical for corneal epithelial barrier function via positive regulation of claudin-1.</a> Ocul Surf. 28, 155-164 (2023).</li>
<li>Kitsuki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+junctional+epithelial+permeability+in+trpv4-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Periodontal+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced junctional epithelial permeability in trpv4-deficient mice.</a> J Periodontal Res. 55 (1), 51-60 (2020).</li>
<li>Chen, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porphyromonas+gingivalis+impairs+oral+epithelial+barrier+through+targeting+grhl2%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">Porphyromonas gingivalis impairs oral epithelial barrier through targeting grhl2.</a> J Dent Res. 98 (10), 1150-1158 (2019).</li>
<li>Lemaitre, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Periodontal+tissue+regeneration+using+syngeneic+adipose-derived+stromal+cells+in+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Periodontal tissue regeneration using syngeneic adipose-derived stromal cells in a mouse model.</a> Stem Cells Transl Med. 6 (2), 656-665 (2017).</li>
<li>Takahashi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gingival+epithelial+barrier%3A+regulation+by+beneficial+and+harmful+microbes%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Barriers%22%5BJournal%5D)">Gingival epithelial barrier: regulation by beneficial and harmful microbes.</a> Tissue Barriers. 7 (3), e1651158(2019).</li>
<li>Ye, P., Chapple, C. C., Kumar, R. K., Hunter, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+patterns+of+E-cadherin%2C+involucrin%2C+and+connexin+gap+junction+proteins+in+the+lining+epithelia+of+inflamed+gingiva%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Expression patterns of E-cadherin, involucrin, and connexin gap junction proteins in the lining epithelia of inflamed gingiva.</a> J Pathol. 192 (1), 58-66 (2000).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>40 kDa FITC-labeled dextran</td><td>Sigma Aldrich</td><td>78331</td><td></td></tr><tr><td>70 kDa rhodamine B-labeled dextran</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R9379</td><td></td></tr><tr><td>Blunt tissue separation nickel</td><td>Bejinghuabo Company</td><td>NZW28</td><td></td></tr><tr><td>carboxymethylcellulose</td><td>MREDA</td><td>M049898</td><td></td></tr><tr><td>Disposable sterile syringe</td><td>Zhiyu Company</td><td></td><td>1 mL</td></tr><tr><td>ImageJ software</td><td>National Institutes of Health</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microtubes</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td>1,5 mL</td></tr><tr><td>NIS-Elements AR Image Software</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline 1x</td><td>Servicebio</td><td>G4207-500</td><td></td></tr><tr><td>Single photon microscope Nikon A1 MP+</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tissue scissors</td><td>Bejinghuabo Company</td><td>M286-05</td><td></td></tr></tbody></table>

avaliação funcional da barreira epitelial gengival de camundongos usando traçadores fluorescentes

Functional Assessment of Mouse Gingival Epithelial Barrier Using Fluorescent Tracers

Avaliação funcional da barreira epitelial gengival de camundongos usando traçadores fluorescentes

The gingival epithelial barrier serves as a critical frontline defense in oral immunity and homeostasis. An intact epithelial barrier effectively prevents ...

functional-assessment-mouse-gingival-epithelial-barrier-using

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

A camada de superfície endotelial glicocálice / endotelial está idealmente estudada por microscopia intravital. Microscopia intravital é tecnicamente desafiante em um órgão em movimento, tais como o pulmão. Demonstramos como brightfield simultânea e microscopia de fluorescência pode ser utilizado para estimar a espessura da camada endotelial da superfície em um movimento...

Na medição in vivo da camada superficial do rato pulmonar endotelial

Aqui nós apresentamos um ensaio de permeabilidade vascular do cérebro de rato usando injeção intraperitoneal de traçadores fluorescentes, seguido de perfusão que é aplicável aos modelos animais de disfunção da barreira hemato - encefálica. Um hemi-cérebro é usado para avaliar quantitativamente a permeabilidade e o outro para visualização/imunocoloração de traçador. O procedimento leva 5-6 h por 10 ratos.

Na Vivo barreira hemato - encefálica permeabilidade ensaio nos ratos usando fluorescente etiquetado traçadores

Aproveitando a microscopia intravital, o método aqui apresentado permite a visualização em tempo real do derramamento de células epiteliais intestinais em animais vivos. Portanto, a mucosa intestinal topicamente manchada (acriflavina e rhodamineB-dextran) de camundongos anesthetizados é imageda até a resolução unicelular usando microscopia confocal.

Uma abordagem baseada em microscopia intravital para avaliar a permeabilidade intestinal e o desempenho do derramamento de células epiteliais

Aqui, descrevemos a preparação de monocamadas epiteliais intestinais derivadas de organoides humanos para estudar a função da barreira intestinal, a permeabilidade e o transporte. Como os organoides representam a resposta original do tecido epitelial a estímulos externos, esses modelos combinam as vantagens da expansão das linhas celulares e a relevância e complexidade do tecido primário.

Monocameira epitelial derivada organoide: um modelo in vitro clinicamente relevante para a função da barreira intestinal

Função de barreira epitelial intestinal disregulada e respostas imunológicas são marcas de doença inflamatória intestinal que permanecem mal investigadas devido à falta de modelos fisiológicos. Aqui, descrevemos um modelo de alça intestinal de camundongos que emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado para estudar a permeabilidade mucosa e o recrutamento de leucócitos in vivo.

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

No presente protocolo, a função de barreira endotelial da glândula submandibular (SMG) foi avaliada por meio da injeção de diferentes marcadores fluorescentes de peso molecular nas veias angulares de modelos animais de teste in vivo sob um microscópio de varredura a laser de dois fótons.

In vivo Detecção de Permeabilidade Vascular em Glândula Submandibular de Camundongo

No presente estudo, o dextrano marcado com fluoresceína-isotiocianato (FITC) é administrado a camundongos via gavagem oral para avaliar a permeabilidade intestinal tanto in vivo quanto em amostras plasmáticas e fecais. Como a função de barreira intestinal é afetada em muitos processos de doenças, este ensaio direto e quantitativo pode ser usado em diversas áreas de pesquisa.

Avaliação da integridade da barreira intestinal em camundongos usando Dextrano marcado com fluoresceína-isotiocianato

A imagem ao vivo ex vivo é uma técnica poderosa para estudar os processos dinâmicos de movimentos celulares e interações em tecidos vivos. Aqui, apresentamos um protocolo que implementa microscopia de dois fótons para rastrear células epiteliais dentárias vivas em incisivos adultos inteiros cultivados.

Usando imagens ao vivo ex vivo para investigar divisões celulares e movimentos durante a renovação dentária de camundongos

Nós descrevemos um método confiável para imunolocalização dentro da epiderme modificados, tanto para cortes congelados e parafina que usamos muito rotineiramente em nosso laboratório.

Imuno-histoquímica em parafina da epiderme do rato utilizando anticorpos fluorescentes

Este vídeo mostra as técnicas para a rotulagem de células-tronco embrionárias e células-tronco mesenquimais com corantes fluorescentes. Esta técnica pode ser usada para um monitoramento in vivo de células-tronco transplantadas com imagens ópticas e para as correlações histopatológico com microscopia de fluorescência.

Rotulagem células-tronco com corantes fluorescentes para detecção não invasiva com imagens ópticas

Aprenda a avaliar a integridade da barreira epitelial gengival em camundongos usando dextranos fluorescentes e microscopia de fóton único. Este método permite quantificar a permeabilidade paracelular em modelos de doenças orais.

Avaliação funcional da barreira epitelial gengival de camundongos usando traçadores fluorescentes

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