Name: Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-14T16:17:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Aprenda a testar a tolerância à nicotina em afídeos usando dieta artificial. Este método compara linhagens adaptadas e não adaptadas ao tabaco para investigar mecanismos de resistência em interações planta-inseto.

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Neste experimento, quatro pulgões adultos são colocados em um copo de plástico pequeno. Eles se alimentam de dieta líquida pipetado entre 2 camadas de parafilme esticada por cima do copo. Após 3 dias de alimentação, a toxicidade de dietas contendo diferentes concentrações de nicotina é comparada a dietas de controle através da contagem de adultos e pulgões larval em cada copo. <ol><li> Faça soluções contendo sacarose e 20 aminoácidos. Pulgões podem subsistir com esta dieta, reproduzindo em níveis normais, por pelo menos uma semana. Por favor, veja arquivo anexo para a dieta artificial. </li><li> Alíquota de 1 mL desta dieta em 6 diferentes tubos eppendorf contendo nicotina. Classificá-los com respeito a várias concentrações de nicotina utilizado, variando de 0 a 500μM. </li><li> Selecione 4 pulgões, vermelho ou verde, e colocadas em copos esses experimental. </li><li> Ao selecionar pulgões, é importante que eles sejam de idade consistente. Tipicamente, procure pulgões de tamanho similar e de cor (vermelho os pulgões ficam mais escuras quando são mais velhos). </li><li> Cubra o copo com um pedaço de parafilme. Coloque a dieta entre 2 pedaços de parafilme. Parcialmente esticar o nível de segundo parafilme em torno das bordas do copo. Alíquota dieta do líquido entre as camadas, e selar a camada de cima para baixo. </li><li> Manter esses copos na sala de insetos sob as luzes em um fotoperíodo longo dia, durante 3 dias, após o que os dados para o experimento pode ser coletado. </li></ol> Visite <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.032607.092825" target="_blank">Comentários Anual de Biologia Vegetal</a> para obter mais informações sobre esta imunidade protocolo e planta à herbivoria de insetos.

Os autores não têm nada a declarar.

teste de tolerância à nicotina em aphids usando uma experiência dieta artificial

Testing Nicotine Tolerance in Aphids Using an Artificial Diet Experiment

Plantas podem upregulate a produção de muitos metabólitos seconday diferentes em resposta à alimentação de insetos. Um desses metabólitos, a nicotina, é conhecida por ter propriedades inseticidas. Uma resposta de plantas de tabaco a herbivoria, ou sendo roídas por insetos em cima, é aumentar a produção deste alcalóide neurotóxico. Aqui, vamos demonstrar como configurar um experimento para abordar esta questão de saber se um tabaco adaptado cepa do pulgão, Myzus persicae, pode tolerar níveis mais altos de nicotina do que a uma tensão desse inseto, que não do tabaco em infestam o campo.

Neste vídeo e ensaio é demonstrar que testa a tolerância de nicotina para dois tipos de pulgões que infestam plantas de tabaco no campo e uma que não.

Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial

As plantas podem upregular a produção de muitos metabólitos secundários diferentes em resposta à alimentação de insetos. Um desses metabólitos, a nicotina, é bem...

As plantas podem regular positivamente a produção de muitos metabólitos secundários diferentes em resposta à alimentação de insetos. Uma resposta das plantas de tabaco à herbivoria não está sendo aplicada pelos insetos é aumentar a produção do alcalóide neurotóxico nicotina, usando nicotina. Como exemplo, demonstrarei como montar um experimento para avaliar a toxicidade de metabólitos secundários de plantas contra pulgões.Certas linhagens de MiSiS persky, o pulgão verde do pêssego, adaptaram-se para se especializar no tabaco cultivado. Aqui, levantamos a hipótese de que essas linhagens adaptadas ao tabaco aumentaram a resistência à nicotina em relação às linhagens não adaptativas. Olá, meu nome é John Ramsey.Sou estudante de pós-graduação no laboratório de George Jander no Instituto Bo Thompson de Pesquisa de Plantas. Hoje vou mostrar um procedimento para medir a toxicidade dos metabólitos das plantas contra pulgões. Este procedimento envolve a preparação de uma dieta artificial para a qual o metabólito da planta de interesse.Nesse caso, a nicotina é adicionada em concentrações variadas, enjaulando pulgões, de modo que eles se alimentam dessa dieta e contando pulgões após alguns dias para medir a sobrevivência e fecundidade em diferentes concentrações de nicotina. Então vamos começar. Com o experimento.Podemos criar pulgões em dietas artificiais, aproveitando seu estilo de alimentação, no qual eles inserem um estilo S especializado na vasculatura da planta e consomem uma dieta de seiva de fluxo. Preparamos uma dieta líquida semelhante à que os A encontram alimentando-se de uma planta composta por sacarose e aminoácidos para esta solução. Em seguida, adicionamos concentrações variadas do metabólito da planta.Estamos interessados em testar a toxicidade da, neste caso, nicotina. Neste experimento, quatro pulgões adultos são colocados em um pequeno copo de plástico. Eles se alimentam de dieta líquida pipetada entre duas camadas de biofilmes esticados sobre o topo do copo após três dias.A toxicidade alimentar de dietas contendo diferentes concentrações de nicotina é comparada às dietas de controle pela contagem de pulgões adultos e larvais em cada xícara. Agora é hora de preparar a dieta experimental. Tenho aqui uma solução de sacarose e 20 aminoácidos.Os pulgões podem sobreviver e se reproduzir normalmente com esta dieta por pelo menos uma semana. Agora eu aliquota esta dieta em um mililitro, Alec Watts contendo concentrações variantes de nicotina de zero a 500 micromolares nesses tubos fendor, então quatro pulgões são selecionados vermelhos ou verdes e colocados nesses copos experimentais. Um pincel é usado para levantar delicadamente os pulgões da folha e colocá-los no copo experimental.Ao selecionar pulgões, é importante escolher insetos do mesmo tamanho geral e cor de pulgão mais escuro, como este pode ser mais velho e não apropriado para este experimento. Em seguida, esticarei a primeira camada de phim por cima do copo para conter os pulgões. Em seguida, vou aliquotar 100 microlitros da dieta líquida entre as duas camadas de paraformas e, em seguida, esticar a segunda camada de paraformas prendendo-a ao redor das bordas do copo.Eu cutuquei esses orifícios de ar para ter certeza de que há um bom fluxo de ar durante o experimento, e vou colocar este copo neste suporte de tubo e colocá-lo em um rack na sala de insetos sob um longo período de fotos sob as luzes. Então, aqui podemos ver os resultados de um experimento, que eu montei há três dias da mesma forma que o experimento que acabei de demonstrar. Eu tenho uma xícara, cada um de pulgões verdes e vermelhos em dieta de nicotina zero micromolar, 10 micromolar, 100 micromolar e 1000 micromolar ou um milimolar.E você pode ver que para a dieta de controle zero nicotina micromolar, tanto os pulgões vermelhos quanto os verdes estão sobrevivendo e se reproduzindo. Da mesma forma, na dieta de 10 micromolares, temos um grande número de descendentes de pulgões vermelhos. Ainda temos adultos verdes, mas eles não têm muitos descendentes.Portanto, eles podem estar sentindo os efeitos da nicotina, mesmo em uma concentração tão baixa quanto 10 micromolares. Aqui não há pulgões verdes adultos sobreviventes na dieta de cem micromolares de nicotina, mas os pulgões vermelhos estão sobrevivendo e se reproduzindo no mesmo nível que o controle. Você pode ver na dieta contendo 1000 micromolares de nicotina.Nem os pulgões verdes nem os vermelhos são capazes de sobreviver. Então, com base nisso, podemos considerar a possibilidade de que uma das adaptações que permitiu que a linhagem MiSiS vermelha infestasse o tabaco no campo seja uma capacidade aprimorada de desintoxicar a nicotina. Acabamos de mostrar como montar um experimento para usar dietas artificiais para medir a toxicidade dos metabólitos secundários das plantas contra o pulgão.Ao configurar esses experimentos, é importante lembrar de escolher insetos que não apenas tenham o mesmo tamanho e cor, mas também venham de plantas em estágios de desenvolvimento semelhantes. Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Resistência de plantas a insetos herbívoros de mascar pode ser testado de várias maneiras. Aqui, demonstramos como set-up uma escolha e um experimento sem chance de escolha com a planta modelo Arabidopsis thaliana para identificar a resistência contra a praga Pieris rapae espécies.

Escolha e No-Choice ensaios para testar a resistência de A. thaliana para Insetos Chewing

Pulgões são transmissores eficazes de vírus de plantas. Microinjeção pulgão do vírus, o procedimento que irá mostrar-lhe hoje, é uma técnica permitindo que os pesquisadores injetam vírus diretamente no hemocele do pulgão, contornando o intestino, uma das duas principais barreiras para a transmissão do vírus de uma maneira circulativo. A mesma técnica também é usada para injetar dsRNA para RNAi.

Testando a barreiras fisiológicas para a transmissão viral em Aphids Usando microinjeção

Este vídeo descreve o ensaio de preferência de sabor, um método comportamental usado para medir a atração ou evitação por soluções coloridas com sabor diferente, avaliando a coloração abdominal da mosca após a ingestão da substância preferida. O protocolo apresentado demonstra o procedimento usado para medir a preferência das moscas por soluções de concentrações variadas de sacarose.

Ensaio de Preferência de Sabor: Um Método para Medir o Comportamento Alimentar em Drosophila

Um novo ensaio comportamental é descrito para investigar as respostas gustativas de curto prazo das peças bucais de abelhas que se movem livremente (Bombus terrestris) em relação a nutrientes e toxinas em solução.

A Novel Behavioral Ensaio investigar as gustativas de um indivíduo, livre-se deslocam Bumble abelhas (<em&gt; Terrestris do Bombus</em&gt;)

O paladar é um processo sensorial importante que facilita a atração por substâncias benéficas e evita substâncias tóxicas.  Este protocolo descreve um ensaio de ingestão simples para determinar a preferência gustativa de Drosophila por um determinado composto químico.

Ensaio de Preferência gosto para Adulto<em&gt; Drosophila</em

O pulgão Aphis nerii coloniza altamente defendido das plantas pertencente à família (Apocyanaceae) e oferece inúmeras oportunidades para estudar interações inseto-planta. Aqui, apresentamos uma série de protocolos para a manutenção da planta e pulgão, culturas e a geração e análise molecular e - omic dados pela . nerii.

Manutenção de culturas biológicas e medição de expressão gênica em Aphis nerii: um sistema Non-modelo de interações inseto-planta

Aqui, descrevemos a construção e a utilização de um túnel de vento para odor mediada ensaios comportamentais com insetos. O projeto de túnel de vento facilita a liberação das fontes de odor por vários métodos, com e sem estímulos visuais. Experiências de túnel de vento são métodos importantes para identificar produtos químicos voláteis comportamentalmente ativos.

Um túnel de vento para Odor mediada insetos ensaios comportamentais

O presente protocolo fornece informações instrucionais para o uso do tromfo de tabaco Manduca sexta na pesquisa canabinoide.  O método descrito aqui inclui todos os suprimentos e protocolos necessários para monitorar alterações fisiológicas e comportamentais do modelo de insetos em resposta ao tratamento do canabidiol (CBD).

Minhoca de Tabaco como um sistema modelo de insetos para estudos pré-clínicos canabinoides

Este protocolo descreve o ensaio alimentar obrigatório para avaliar o efeito potencialmente tóxico de um fitoquímico sobre as larvas de insetos lepidópteros. Este é um bioensaio de insetos altamente escalável, fácil de otimizar a dose subletal e letal, atividade dissuasora e efeito fisiológico. Isso poderia ser usado para a triagem de inseticidas ecológicos.

Desenvolvimento de um Sistema de Ensaio Alimentar para Avaliação do Efeito Inseticida de Fitoquímicos sobre Helicoverpa armigera

Este protocolo apresenta um sistema otimizado de bioensaio foliar destacado para avaliar a eficácia de fungos entomopatogênicos (FPE) contra o pulgão mostarda (Lipaphis erysimi (Kalt.)), um inseto partenogenético. O método descreve o processo de coleta de dados durante os experimentos com placas de Petri, permitindo que os pesquisadores meçam consistentemente a virulência do PFE contra pulgões da mostarda e outros insetos partenogenéticos.

Avaliação do Efeito Afidicida de Fungos Entomopatogênicos Contra Insetos Partenogenéticos, Pulgão Mostarda, Lipaphis erysimi (Kalt.)

Este trabalho apresenta um protocolo detalhado para a criação da borboleta branca repolho em condições controladas de laboratório com uma dieta artificial, que permite manipulações precisas da nutrição precoce e exposição a toxinas. Os resultados representativos mostram como a toxicidade por metais pesados pode ser avaliada com este protocolo.

Criação da Borboleta Branca de Repolho (Pieris rapae) em Condições Controladas: Um Estudo de Caso com Tolerância a Metais Pesados

Aprenda a testar a tolerância à nicotina em afídeos usando dieta artificial. Este método compara linhagens adaptadas e não adaptadas ao tabaco para investigar mecanismos de resistência em interações planta-inseto.

Teste de tolerância à nicotina em Aphids Usando uma experiência Dieta Artificial

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