Name: Avaliação colorimétrica da atividade da deiodinase 1 em microssomos do fígado humano usando a reação de Sandell-Kolthoff (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:05:00.000+00:00
Duration: 8 min
Description: Aprenda a avaliar a atividade da deiodinase 1 em microssomos hepáticos humanos usando o ensaio colorimétrico de Sandell-Kolthoff. Este método não radioativo permite triagem de alta vazão em toxicologia mecanicista.

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<ol><li>Kabir, E. R., Rahman, M. S., Rahman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+endocrine+disruptors+and+their+possible+impacts+on+human+health%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">A review on endocrine disruptors and their possible impacts on human health.</a> Environ Toxicol Pharmacol. 40 (1), 241-258 (2015).</li>
<li>Yue, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+exposure+to+a+mixture+of+endocrine+disruptors+and+serum+levels+of+thyroid+hormones%3A+a+cross-sectional+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Environ+Sci%22%5BJournal%5D)">Human exposure to a mixture of endocrine disruptors and serum levels of thyroid hormones: a cross-sectional study.</a> J Environ Sci. 125, 641-649 (2023).</li>
<li>Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+deiodinase+family%3A+selenoenzymes+regulating+thyroid+hormone+availability+and+action%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">The deiodinase family: selenoenzymes regulating thyroid hormone availability and action.</a> Cell Mol Life Sci. 57 (13), 1853-1863 (2000).</li>
<li>Zhang, J., Lazar, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+action+of+thyroid+hormones%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">The mechanism of action of thyroid hormones.</a> Annu Rev Physiol. 62 (1), 439-466 (2000).</li>
<li>França, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+type+1+iodothyronine+deiodinase+%28DIO1%29+mutations+cause+abnormal+thyroid+hormone+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Human type 1 iodothyronine deiodinase (DIO1) mutations cause abnormal thyroid hormone metabolism.</a> Thyroid. 31 (2), 202-207 (2020).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+predictivity+of+the+DIO1-SK+assay+to+investigate+DIO1+inhibition+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the predictivity of the DIO1-SK assay to investigate DIO1 inhibition in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 9 (2), 44-59 (2023).</li>
<li>Weber, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+method+to+study+thyroid+hormone+disruption%3A+optimization+and+standardization+of+an+assay+to+assess+the+inhibition+of+DIO1+enzyme+in+human+liver+microsomes%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A new approach method to study thyroid hormone disruption: optimization and standardization of an assay to assess the inhibition of DIO1 enzyme in human liver microsomes.</a> Appl Vitro Toxicol. 8 (3), 67-82 (2022).</li>
<li>Renko, K., Hoefig, C. S., Hiller, F., Schomburg, L., Köhrle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+iopanoic+acid+as+substrate+of+type+1+deiodinase+by+a+novel+nonradioactive+iodide-release+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Identification of iopanoic acid as substrate of type 1 deiodinase by a novel nonradioactive iodide-release assay.</a> Endocrinology. 153 (5), 2506-2513 (2012).</li>
<li>Renko, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+nonradioactive+screening+method+identifies+genistein+and+xanthohumol+as+potent+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">An improved nonradioactive screening method identifies genistein and xanthohumol as potent inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Thyroid. 25 (8), 962-968 (2015).</li>
<li>Olker, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+the+ToxCast+phase+1%2C+phase+2%2C+and+e1k+chemical+libraries+for+inhibitors+of+iodothyronine+deiodinases%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Screening the ToxCast phase 1, phase 2, and e1k chemical libraries for inhibitors of iodothyronine deiodinases.</a> Toxicol Sci. 168 (2), 430-442 (2019).</li>
<li>Sane, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+highly+potent+and+isoenzyme-selective+inhibitors+of+deiodinase+type+I+via+a+nonradioactive+high-throughput+screening+method%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of highly potent and isoenzyme-selective inhibitors of deiodinase type I via a nonradioactive high-throughput screening method.</a> Thyroid. 35 (5), 576-589 (2025).</li>
<li>Visser, T. J., Van Overmeeren, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Binding+of+radioiodinated+propylthiouracil+to+rat+liver+microsomal+fractions%3A+stimulation+by+substrates+for+iodothyronine+5%E2%80%B2-deiodinase%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Binding of radioiodinated propylthiouracil to rat liver microsomal fractions: stimulation by substrates for iodothyronine 5′-deiodinase.</a> Biochem J. 183 (1), 167-169 (1979).</li>
<li>Hindrichs, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+and+fast+online+SPE-LC-MS%2FMS+method+to+quantify+thyroid+hormone+metabolites+in+rat+plasma%5BTitle%5D)+AND+%22Chem+Res+Toxicol%22%5BJournal%5D)">A novel and fast online SPE-LC-MS/MS method to quantify thyroid hormone metabolites in rat plasma.</a> Chem Res Toxicol. 37 (1), 33-41 (2024).</li>
<li>Kolthoff, I. M., Sandell, E. B., Lingane, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+persulfate-arsenite+method+for+manganese%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">A modified persulfate-arsenite method for manganese.</a> Anal Chem. 8 (1), 73-73 (1936).</li>
<li>Stefanidis, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+robustness+and+accuracy+of+the+deiodinase+1+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay%3A+a+comparative+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Vitro+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the robustness and accuracy of the deiodinase 1 Sandell–Kolthoff assay: a comparative analysis.</a> Appl Vitro Toxicol. 10 (4), 80-90 (2024).</li>
<li>Satya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidance+document+on+standardised+test+guidelines+for+evaluating+chemicals+for+endocrine+disruption%5BTitle%5D)+AND+%22OECD+Environ+Health+Saf+Publ%22%5BJournal%5D)">Guidance document on standardised test guidelines for evaluating chemicals for endocrine disruption.</a> OECD Environ Health Saf Publ. 150, (2012).</li>
<li>Joseph, O., Eberle, M., Lieberman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolites+in+urine+that+interfere+with+the+Sandell%E2%80%93Kolthoff+assay+for+urinary+iodine%5BTitle%5D)+AND+%22Biol+Trace+Elem+Res%22%5BJournal%5D)">Metabolites in urine that interfere with the Sandell–Kolthoff assay for urinary iodine.</a> Biol Trace Elem Res. 202 (2), 466-472 (2024).</li>
<li>May, W., Wu, D., Eastman, C., Bourdoux, P., Maberly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+automated+urinary+iodine+methods%3A+problems+of+interfering+substances+identified%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem%22%5BJournal%5D)">Evaluation of automated urinary iodine methods: problems of interfering substances identified.</a> Clin Chem. 36 (6), 865-869 (1990).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1-Tio-&beta;-D-glicose sal de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T6375-1G</td><td>CAS 10593-29-0</td></tr><tr><td>3,3',5'-triiodotironina (rT3)&nbsp;</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-209692</td><td>CAS 5817-39-0</td></tr><tr><td>6-Propoli-2-tiouracila (6PTU)</td><td>Supelco</td><td>P3755-10G</td><td>CAS 51-52-5</td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Thermo Fisher</td><td>9526-33</td><td>CAS 64-19-7</td></tr><tr><td>Balanço analítico</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Capaz de pesar com precisão até 30 g com legibilidade de 0,1 mg</td></tr><tr><td>Óxido de sódio de arsênico (NaAsO2)</td><td>Thermo Fisher</td><td>041533.AP</td><td>CAS 7784-46-5</td></tr><tr><td>Placas de ensaio (formato de 96 poços)</td><td>Merck</td><td>Z707902-108EA</td><td>por exemplo, placas de cultura de tecidos, placa de 96 poços, fundo plano, poliestireno, 0,34 cm², estéril, 108/cs, TPP</td></tr><tr><td>Aurothioglicose (ATG)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0606-5MG</td><td>CAS 12192-57-3</td></tr><tr><td>Tubos de Centrífuga 15 e 50&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>Z707724-800EA, Z707716-320EA</td><td>por exemplo, tubos centrífugos TPP, volumes 15 e 50 mL, polipropileno e nbsp;</td></tr><tr><td>Centrífuga com rotor oscilante para placas microtituladas</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Deve ser alto o suficiente para caber uma placa de poço de 96 de profundidade com uma placa de filtro de 96 poços no topo (pelo menos cerca de 6 cm de altura).</td></tr><tr><td>Sulfato de amônio de cério (IV) (Ce(NH4)4(SO4)4)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>22269-100G-F</td><td>CAS 10378-47-9</td></tr><tr><td>Incubadora de CO2</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capaz de manter temperaturas de 37°C; C, 5% de CO2 e &ge; 90% de umidade</td></tr><tr><td>Placas de poço profundo (formato de 96 poços)</td><td>Supelco</td><td>575653-U</td><td>por exemplo, SPE 96-Deep Square Square Collection Collection Plate, volume de poço 2 mL, polipropileno</td></tr><tr><td>Dimetil sulfóxido (DMSO)</td><td>AppliChem</td><td>A3672.0250</td><td>CAS 67-68-5</td></tr><tr><td>Ditiotreitol (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779-1G</td><td>CAS 3483-12-3</td></tr><tr><td>Ácido etilendiaminetetraacético (EDTA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>APO456787707-500G</td><td>CAS 6381-92-6</td></tr><tr><td>Placas de filtro (formato de 96 poços)</td><td>Merck</td><td>WHA77002810</td><td>por exemplo, Micro-Plates, 96-poços, poliestireno transparente, 800 & micro; L, Ligação de DNA, Whatman</td></tr><tr><td>Selantes de placas estanques a gases</td><td>Thermo Fisher</td><td>232698</td><td>por exemplo: fita de vedação, poliéster, estéril, fita de vedação, poliéster, estéril, Nunc</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Pan Biotech</td><td>P05-01100</td><td>CAS 7365-45-9</td></tr><tr><td>Microssomos do fígado humano</td><td>Biovit</td><td>X008070</td><td>por exemplo, INVITROCYP 150 - Microssomos do fígado humano combinados com doadores</td></tr><tr><td>Iodeto (padrão de CI)</td><td>Supelco</td><td>41271-100ML</td><td>por exemplo, padrão de iodeto para CI, 1000 mg/L em água, Sigma-Aldrich</td></tr><tr><td>Resina de troca iônica como a Dowex 50WX2</td><td>Roth</td><td>334.4</td><td>CAS 12612-37-2; Mesh 100-200</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga 1,5&nbsp; mL</td><td>Merck</td><td>EP0030120086-1PAK</td><td>por exemplo, Eppendorf & reg; Tubos microcentrífugas Safe-Lock, volume 1,5 mL, naturais</td></tr><tr><td>Dispensador multicanal capaz de entregar de 50 a 300 & nbsp; & micro; L por passo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipeta multicanal capaz de entregar de 10 a 100&nbsp; & micro; L por passo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Medidor de pH com eletrodo e buffers de calibração</td><td>NA</td><td>NA</td><td>capaz de ler +/- 0,1 unidades de pH</td></tr><tr><td>Fotômetro para medição de absorvância</td><td>Tecan Trading AG</td><td>NA</td><td>por exemplo, Sunrise Absorbance Reader, INSTSUN-3</td></tr><tr><td>Pipetas capazes de entregar de 1 a 10&nbsp; & micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas capazes de entregar de 10 a 100&nbsp; & micro; L</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas capazes de entregar de 100 a 1000 nbsp; & micro; L&nbsp;</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Pipetas para volumes maiores</td><td>NA</td><td>NA</td><td>pipetas serológicas, por exemplo, 10, 25, 50 mL</td></tr><tr><td>Agitador de placas</td><td>Thermo Fisher</td><td>NA</td><td>por exemplo, placa de microtitulação Thermo Scientific H+P MONOSHAKE VORTEXER, controlada diretamente</td></tr><tr><td>Pipeta repetidora</td><td>NA</td><td>NA</td><td>NA</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-25G</td><td>CAS: 7647-14-5, por exemplo, cloreto de sódio, reagente ACS, etc; 99.0 %</td></tr><tr><td>Software de estatística</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Capaz de realizar análises de regressão que refletem características do ensaio e capaz de calcular concentrações inibitórias, por exemplo, GraphPad Prims 8, GraphPad</td></tr><tr><td>Ácido sulfúrico (H2SO4)&nbsp;</td><td>Supelco</td><td>1007311000</td><td>CAS 7664-93-9</td></tr><tr><td>Frasco volumétrico</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Certificado com volume definido</td></tr></tbody></table>

avaliação colorimétrica da atividade da deiodinase 1 em microssomos do fígado humano usando a reação de sandell-kolthoff

Colorimetric Assessment of Deiodinase 1 Activity in Human Liver Microsomes Using the Sandell-Kolthoff Reaction

Avaliação colorimétrica da atividade da deiodinase 1 em microssomos do fígado humano usando a reação de Sandell-Kolthoff

This method enables the identification of test substances that inhibit DIO1 activity and may thus interfere with thyroid hormone homeostasis. The protocol ...

colorimetric-assessment-deiodinase-1-activity-human-liver-microsomes

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

A atividade da descarboxilase induzível lisina é monitorado pela reação do substrato L-lisina e cadaverina o produto com 2,4,6 trinitrobenzensulfonic-ácido para formar adutos que têm solubilidade diferencial em tolueno.

Um ensaio para medir a atividade do Escherichia coli Induzível Lisina Decarboxyase

Neste vídeo, descrevemos um método baseado em colorimetria para determinar o teor de ferro não-heme no tecido hepático de camundongos. O sulfonato de batofenantrolina é usado como substrato cromogênico na presença de um agente redutor, que converte o ferro férrico em ferro ferroso quelatável.

Ensaio Colorimétrico à Base de Sulfonato de Batofenantrolina: Um Método Simples e Rápido para Quantificação de Ferro Não-Heme em Tecido Hepático de Camundongo

Este trabalho apresenta um fluxo de trabalho de microscopia de alto conteúdo para a quantificação simultânea dos níveis intracelulares de ROS, bem como o potencial e morfologia da membrana mitocondrial, denominados conjuntamente como morfofunção mitocondrial, em células vivas aderentes, 6) -clorometil-2 ', 7'-diclorodihidrofluoresceína, éster acetilico (CM-H 2 DCFDA) e éster metílico de tetrametilrodamina (TMRM).

Redox Cellular Profiling Usando Microscopia de Alto Conteúdo

Competência metabólica de sistemas in vitro é um requisito chave para a biotransformação e disposição de drogas e substâncias tóxicas. Neste protocolo, descrevemos a aplicação de sondas metabólicas referência para avaliar metabolismo de fase I em culturas de células.

Espectrometria de Massa e abordagens baseadas no Luminogenic Caracterizar Fase I Metabolic Competência de<em&gt; In Vitro</em&gt; culturas de células

Aqui, apresentamos um protocolo que pode ser usado para microscopicamente Visualizar e quantificar a atividade de desidrogenases em células e tecidos e sua cinética, função e Localização subcellular.

Mapeamento metabólico: Citoquímica quantitativa enzimática e histoquímica para determinar a atividade de desidrogenases em células e tecidos

Descreveremos um protocolo para mapear a distribuição espacial da atividade enzimática por enzimas que geram nicotinatmide adenina dinucleótido fosfato (NAD(P)H) + H + diretamente em amostras de tecido.

Metabolismo de mapeamento: Monitorar a atividade de lactato desidrogenase diretamente no tecido

Aqui, é descrito um protocolo simples e bem validado para medir a atividade de autophagic de sequestro em massa em células de mamíferos. O método baseia-se em quantificar a proporção de lactato desidrogenase (LDH) em frações de célula sedimentáveis em comparação com os níveis LDH totais do celulares.

O ensaio de sequestro de lactato desidrogenase — Um método simples e confiável para determinar a atividade de Autophagic de sequestro em massa em células de mamíferos

Aqui, é fornecido um protocolo para a medição do teor de ferro não heme em tecidos animais, utilizando um simples e bem estabelecido ensaio colorimétrico que pode ser facilmente implementado na maioria dos laboratórios.

Medição do teor de ferro não-heme do tecido usando um ensaio colorimétrico baseado em banhontrolina

Esferoides tumorais 3D multicelulares foram preparados com células de adenocarcinoma pulmonar, fibroblastos e monócitos, seguidos pelo isolamento de fibroblastos associados ao câncer (CAFs) desses esferoides. CAFs isolados foram comparados com fibroblastos normais para avaliar a saúde mitocondrial estudando o potencial transmembranar mitocondrial, espécies reativas de oxigênio e atividades enzimáticas.

Avaliação da Saúde Mitocondrial em Fibroblastos Associados ao Câncer Isolados de Esferoides de Tumores Pulmonares Multicelulares 3D

Aqui, apresentamos uma compilação de ensaios para medir diretamente a função mitocondrial em células de mamíferos, independentemente de sua capacidade de consumir oxigênio molecular.

Ensaios Independentes de Oxigênio para Medir a Função Mitocondrial em Mamíferos

Este protocolo descreve um novo método para quantificar espécies reativas de oxigênio (ROS) intracelulares usando diidroetídio (DHE) como sonda de fluorescência usando uma abordagem de triagem de alto rendimento. O protocolo descreve os métodos para avaliação quantitativa das espécies reativas de oxigênio (EROs) intracelulares nas três diferentes linhagens celulares de carcinoma hepatocelular.

Avaliação de triagem de alto rendimento da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) usando corante de fluorescência Dihidroetídio (DHE)

Aprenda a avaliar a atividade da deiodinase 1 em microssomos hepáticos humanos usando o ensaio colorimétrico de Sandell-Kolthoff. Este método não radioativo permite triagem de alta vazão em toxicologia mecanicista.

Avaliação colorimétrica da atividade da deiodinase 1 em microssomos do fígado humano usando a reação de Sandell-Kolthoff

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