Name: Produção e Testes de Peptídeos Antimicrobianos e Seus Mimics (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:08:00.000+00:00
Duration: 10 min 35 s
Description: Aprenda a produzir e testar peptídeos antimicrobianos e seus mimics, avaliando atividade contra Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli e citotoxicidade em células L-929. Este protocolo padronizado integra síntese, ensaios de CIM e MTT para descoberta de novos agentes anti-infecciosos.

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<ol><li>Naghavi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+bacterial+antimicrobial+resistance+1990%E2%80%932021%3A+a+systematic+analysis+with+forecasts+to+2050%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of bacterial antimicrobial resistance 1990–2021: a systematic analysis with forecasts to 2050.</a> Lancet. 404 (10459), 1199-1226 (2024).</li>
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<li>Pasupuleti, M., Schmidtchen, A., Malmsten, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+key+components+of+the+innate+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Crit.+Rev.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: key components of the innate immune system.</a> Crit. Rev. Biotechnol. 32 (2), 143-171 (2012).</li>
<li>Oliveira Júnior, N. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+structure%2C+functions+and+translational+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: structure, functions and translational applications.</a> Nat. Rev. Microbiol. , (2025).</li>
<li>Keshri, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LL-37%2C+the+master+antimicrobial+peptide%2C+its+multifaceted+role+from+combating+infections+to+cancer+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Antimicrob.+Agents%22%5BJournal%5D)">LL-37, the master antimicrobial peptide, its multifaceted role from combating infections to cancer immunity.</a> Int. J. Antimicrob. Agents. 65 (1), 107398(2025).</li>
<li>Alzain, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+peptides%3A+mechanisms%2C+applications%2C+and+therapeutic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Drug+Resist%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial peptides: mechanisms, applications, and therapeutic potential.</a> Infect. Drug Resist. , 4385-4426 (2025).</li>
<li>Kuppusamy, R., Willcox, M., Black, D. S., Kumar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Short+cationic+peptidomimetic+antimicrobials%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Short cationic peptidomimetic antimicrobials.</a> Antibiotics. 8 (2), (2019).</li>
<li>Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptides+chemistry%2C+manufacturing%2C+and+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Peptide+Science%3A+Chemical+Ligation%2C+Lead+Generation%2C+and+Therapeutic+Advances%22%5BJournal%5D)">Peptides chemistry, manufacturing, and controls.</a> Peptide Science: Chemical Ligation, Lead Generation, and Therapeutic Advances. , 471-508 (2025).</li>
<li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+and+purification+of+antimicrobial+peptide+buforin+IIb+in+Escherichia+coli%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Expression and purification of antimicrobial peptide buforin IIb in Escherichia coli.</a> Biotechnol. Lett. 33 (11), 2121-2126 (2011).</li>
<li>Cai, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peptide+synthesis%3A+a+review+of+classical+and+emerging+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Biofabrication%22%5BJournal%5D)">Peptide synthesis: a review of classical and emerging methods.</a> Biofabrication. 18 (1), 012001(2026).</li>
<li>Gentilucci, L., De Marco, R., Cerisoli, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+modifications+designed+to+improve+peptide+stability%3A+incorporation+of+non-natural+amino+acids%2C+pseudo-peptide+bonds%2C+and+cyclization.%C2%A0Curr.+Pharm+pseudo-peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Des%22%5BJournal%5D)">Chemical modifications designed to improve peptide stability: incorporation of non-natural amino acids, pseudo-peptide bonds, and cyclization. Curr. Pharm pseudo-peptide.</a> Des. 16 (28), 3185-3203 (2010).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+anthranilamide+peptidomimetic+design+to+selectively+target+planktonic+bacteria+and+biofilm%5BTitle%5D)+AND+%22Antibiotics%22%5BJournal%5D)">Tuning the anthranilamide peptidomimetic design to selectively target planktonic bacteria and biofilm.</a> Antibiotics. 12 (3), 585(2023).</li>
<li>Kuppusamy, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guanidine+functionalized+anthranilamides+as+effective+antibacterials+with+biofilm+disruption+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Biomol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Guanidine functionalized anthranilamides as effective antibacterials with biofilm disruption activity.</a> Org. Biomol. Chem. 16 (32), 5871-5888 (2018).</li>
<li>Wiegand, I., Hilpert, K., Hancock, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Agar+and+broth+dilution+methods+to+determine+the+minimal+inhibitory+concentration+%28MIC%29+of+antimicrobial+substances%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances.</a> Nat. Protoc. 3 (2), 163-175 (2008).</li>
<li>Ji, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adsorption+and+morphology+analysis+of+bovine+serum+albumin+on+a+micropillar-enhanced+quartz+crystal+microbalance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Phys.+Chem.+B%22%5BJournal%5D)">Adsorption and morphology analysis of bovine serum albumin on a micropillar-enhanced quartz crystal microbalance.</a> J. Phys. Chem. B. 128 (41), 10247-10257 (2024).</li>
<li>Yasir, M., Dutta, D., Willcox, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+antimicrobial+peptides+and+ciprofloxacin+against+Pseudomonas+aeruginosa+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Activity of antimicrobial peptides and ciprofloxacin against Pseudomonas aeruginosa biofilms.</a> Molecules. 25 (17), (2020).</li>
<li><a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+determination+of+susceptibility+of+bacteria+to+antimicrobial+agents.+terminology%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Infect%22%5BJournal%5D)">Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. terminology.</a> Clin. Microbiol. Infect. 4 (5), 291-296 (1998).</li>
<li>Saetan, T., Sukwattanasinitt, M., Wacharasindhu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mild+photocatalytic+synthesis+of+guanidine+from+thiourea+under+visible+light%5BTitle%5D)+AND+%22Org.+Lett%22%5BJournal%5D)">A mild photocatalytic synthesis of guanidine from thiourea under visible light.</a> Org. Lett. 22 (20), 7864-7869 (2020).</li>
<li>Woodring, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disrupting+the+conserved+salt+bridge+in+the+trimerization+of+influenza+A+nucleoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Disrupting the conserved salt bridge in the trimerization of influenza A nucleoprotein.</a> J. Med. Chem. 63 (1), 205-215 (2019).</li>
<li>Terpe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+bacterial+expression+systems+for+heterologous+protein+production%3A+from+molecular+and+biochemical+fundamentals+to+commercial+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Overview of bacterial expression systems for heterologous protein production: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 72 (2), 211-222 (2006).</li>
<li>Berridge, M. V., Herst, P. M., Tan, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetrazolium+dyes+as+tools+in+cell+biology%3A+new+insights+into+their+cellular+reduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Annu.+Rev%22%5BJournal%5D)">Tetrazolium dyes as tools in cell biology: new insights into their cellular reduction.</a> Biotechnol. Annu. Rev. 11, 127-152 (2005).</li>
<li>Deni, W. H., Gao, T., Wu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+reconstituting+peptides%2Fpeptidomimetics+from+DMSO+to+aqueous+buffers+for+circular+dichroism+analyses%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protoc%22%5BJournal%5D)">Protocol for reconstituting peptides/peptidomimetics from DMSO to aqueous buffers for circular dichroism analyses.</a> STAR Protoc. 5 (1), 102850(2024).</li>
<li>Lou, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbial+production+systems+and+optimization+strategies+of+antimicrobial+peptides%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Microbial production systems and optimization strategies of antimicrobial peptides: a review.</a> World J. Microbiol. Biotechnol. 41 (2), 66(2025).</li>
<li>Hancock, R. E., Sahl, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antimicrobial+and+host-defense+peptides+as+new+anti-infective+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Antimicrobial and host-defense peptides as new anti-infective therapeutic strategies.</a> Nat. Biotechnol. 24 (12), 1551-1557 (2006).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1,2-ethanedithiol</td><td>Oakwood&nbsp;</td><td>M03555</td><td></td></tr><tr><td>100X Antibióticos</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5955-20ML</td><td></td></tr><tr><td>1-Etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida Cloridrato</td><td>Blocos Combi</td><td>SS-7536</td><td>A seguir será designada como EDC</td></tr><tr><td>2-Naftoil cloreto</td><td>Blocos Combi</td><td>OR-0173</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético &nbsp;</td><td>Ajax Finechem</td><td>R18401O</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrila</td><td>VWR&nbsp;</td><td>20060.35</td><td></td></tr><tr><td>Fosfatase alcalina</td><td>Biolaboratórios da Nova Inglaterra</td><td>M0525S</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A1933</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Mueller-Hinton ajustado por cations (CAMHB)</td><td>Becton, Dickinson e Companhia</td><td>212322</td><td></td></tr><tr><td>Cbz-L-Trp</td><td>Blocos Combi</td><td>QB-6691</td><td></td></tr><tr><td>Colistina&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C4461</td><td></td></tr><tr><td>Dey-Engley (D/E) Caldo Neutralizador</td><td>Oxoide</td><td>R453042</td><td></td></tr><tr><td>Terra de diatomáceas (Celite 545)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>102693</td><td>Tamanho de partícula de 0,02-0,1 mm</td></tr><tr><td>Diclorometano (DCM)</td><td>VWR&nbsp;</td><td>23366.327</td><td></td></tr><tr><td>Éter dietílico</td><td>Chem-Supply</td><td>EA036</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil Sulfóxido (DMSO)</td><td>Chem-Supply Pty Ltd&nbsp;</td><td>LCS-CHEM-0098</td><td></td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Termo Científica</td><td>J15397.03</td><td></td></tr><tr><td>Meio de cultura DMEM</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>UCS-BIO-0058</td><td></td></tr><tr><td>Hospedeiro de E. coli BL21(DE3)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70235-M</td><td></td></tr><tr><td>Eletroporador</td><td>Termo Científica</td><td>NEON1SK</td><td></td></tr><tr><td>Acetato de etila</td><td>Chem-Supply</td><td>EA011-2.5L-P</td><td></td></tr><tr><td>Ácido etilenediaminotetraacético (EDTA)</td><td>Termo Científica</td><td>118432500</td><td></td></tr><tr><td>Soro Bovino Fetal (FBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>12003C-500ML</td><td></td></tr><tr><td>TEV Protease&nbsp marcado com His;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4455</td><td></td></tr><tr><td>Hidroxibenzotriazol hidrato</td><td>Chem-Implex</td><td>24755</td><td></td></tr><tr><td>Imidazol</td><td>Termo Científica</td><td>288-32-4</td><td></td></tr><tr><td>Isopropil &beta;-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>I6758</td><td></td></tr><tr><td>Caldo Luria-Bertani (LB), &nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>12795027</td><td></td></tr><tr><td>Buffer de Lise &nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>89822</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de Mercúrio (II)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>215465</td><td></td></tr><tr><td>Metanol (Gragem HPLC)</td><td>VWR</td><td>A452-4K</td><td></td></tr><tr><td>Reagente MTT</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M2128-100MG</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Diisopropiletilamina (DIPEA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3440</td><td></td></tr><tr><td>N,N-Dimetil formamida (DMF)</td><td>Chem-Supply</td><td>RP1051</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop</td><td>Termo Científica</td><td>ND-ONE</td><td></td></tr><tr><td>N-Boc-etilendiamina</td><td>Bloqueios combi</td><td>AM-1613</td><td></td></tr><tr><td>Coluna de Resina de Afinidade NTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>70666</td><td></td></tr><tr><td>Palládio no carbono</td><td>Sigma Aldrich</td><td>205699</td><td>10% com Pd por semana</td></tr><tr><td>Kit de purificação de plasmídeos</td><td>QIAGEN</td><td>27104</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de microtitulação de polipropileno &nbsp;</td><td>SARSTEDT&nbsp;</td><td>72.690.008</td><td></td></tr><tr><td>Gel de sílica para cromatografia em coluna de flash</td><td>Siliciclo</td><td>R12030B</td><td>Silica Gel 60, 230-400 malha &nbsp;</td></tr><tr><td>Gel de sílica Placa de cromatografia de camada fina</td><td>Merk</td><td>1055540001</td><td>Camada de 0,2 mm de espessura sobre suporte de alumínio com indicador fluorescente de 254 nm</td></tr><tr><td>Fosfato de sódio, 0,2M tampão soln</td><td>Termo Científica</td><td>J63816. AP</td><td></td></tr><tr><td>Placa de microtítulo de polipropileno de fundo plano estéril de 96 poços com tampa</td><td>Corning</td><td>3599</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA Ligase</td><td>Biolaboratórios da Nova Inglaterra</td><td>M0202S</td><td></td></tr><tr><td>Trietilamina (Et3N)</td><td>Chem-Supply</td><td>TR02151000</td><td></td></tr><tr><td>Ácido trifluoroacético (TFA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T6508</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCL</td><td>Termo Científica</td><td>J62848. AK</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Termo Científica</td><td>A16046.AE</td><td></td></tr><tr><td>Azul de tripan</td><td>MP BIOMEDICALS AUSTRÁLIA PTY LTD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4049-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Tripticase soja agar&nbsp;</td><td>Becton, Dickinson e Companhia</td><td>211043</td><td></td></tr><tr><td>Ureia & nbsp;</td><td>Termo Científica</td><td>29700</td><td></td></tr><tr><td>Vector (promotor T7)</td><td>-</td><td></td><td>plasmídeo de número de cópias altas escolhido</td></tr></tbody></table>

produção e testes de peptídeos antimicrobianos e seus mimics

Production and Testing of Antimicrobial Peptides and Their Mimics

Produção e Testes de Peptídeos Antimicrobianos e Seus Mimics

Antimicrobial peptides (AMPs) and their synthetic mimics are emerging as promising alternatives to conventional antibiotics, particularly in response to ...

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Peptídeo amidas terciárias (PTA) são uma super família de peptidomiméticos que incluem mas não estão limitados a péptidos, peptóides e peptídeos N-metilados. Aqui nós descrevemos um método sintético que combina split-and-piscina e estratégias sub-monômero para sintetizar um talão biblioteca de um composto de PTAs.

Split-and-piscina Síntese e Caracterização de Peptídeos Terciário Amide Biblioteca

Um método simples e geral para a síntese de peptídeos cíclicos usando irradiação de microondas é descrito. Este procedimento permite a síntese de peptídeos cíclicos de backbone com uma coleção de diferentes conformações, mantendo as cadeias laterais e as porções farmacofóricas., e, portanto, permite rastrear a conformação bioativa.

Desenvolvimento de um Backbone cíclica Biblioteca de Peptídeos como potencial antiparasitário Therapeutics Usando Microondas Irradiação

Aqui, apresentamos protocolos para rastrear e caracterizar rapidamente enzimas quanto à atividade antimicrobiana. O ensaio de difusão em microlâminas e o ensaio de liberação de corante utilizam substratos bacterianos alvo para avaliação qualitativa e quantitativa da atividade enzimática.

Qualitativos e quantitativos Os ensaios para a detecção e caracterização de antimicrobianos Proteína

Um protocolo para sintetizar peptóides com funcionalidade catiônica mista na mesma sequência é apresentado (monômeros do tipo lisina e arginina). Testes subsequentes desses compostos contra Leishmania mexicana, os protozoários parasitas causadores da leishmaniose cutânea, também são descritos.

Um método eficiente para a Síntese de Peptóides com Monómeros Mixed tipo de lisina / arginina-tipo e avaliação da sua actividade anti-leishmaniose

Um fácil e adaptável como caldo para a seleção de extratos e compostos antifúngicos.

Como caldo em Vitro rastreio: um método fácil e rápido para detectar novos compostos antifúngicos

O protocolo apresenta o Escherichia coli-baseado pressão seletiva incorporação de aminoácidos não-canônicos (ncAAs) a lactococcal peptídeo antimicrobiano nisina. Suas propriedades podem ser alteradas durante a expressão recombinantes através de substituição com ncAAs desejado em meios de crescimento definido. As alterações resultantes na Bioatividade são mapeadas por ensaios de inibição de crescimento e de microscopia de fluorescência.

Peptídeos antimicrobianos produzidos pela incorporação de pressão seletiva de aminoácidos não-canônicos

Aqui nós apresentamos um protocolo para produzir Gram-negativas Escherichia coli (e. coli) spheroplasts e Gram-positiva Bacillus megaterium (b. megaterium) protoplastas claramente Visualizar e caracterizar rapidamente interações de peptídeo-bactérias. Isso fornece um método sistemático para definir membrana localizando e se peptídeos.

Produção e visualização de Spheroplasts bacterianas e protoplastas para caracterizar a localização de peptídeo antimicrobiano

A proteína de anticorpos recombinantes expressa em células pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO e anticorpos monoclonais produzidos usando a tecnologia tradicional de hibridoma pode reconhecer e ligar-se à proteína N aminopeptidase suína (APN).

Produção de anticorpos monoclonais contra aminopeptidase N no epitélio da mucosa intestinal suína

Este protocolo descreve um método para a obtenção de dados quantitativos sobre a atividade antifúngica de peptídeos e outros compostos, como agentes antifúngicos de moléculas pequenas, contra Candida albicans. Seu uso de densidade óptica em vez de contar unidades formadoras de colônias para quantificar a inibição do crescimento economiza tempo e recursos.

Quantificando a atividade antifúngica de peptídeos contra Candida albicans

Apresentamos os procedimentos para demonstrar que ligantes se ligam à superfície da membrana de celulose de digestão destes protozoários no intestino de cupins subterrâneos Formosan por microscopia de fluorescência e que juntamente com peptídeos ligantes líticas matar...

Atividade de testes Protozoacidal Ligand-lítica Peptídeos Contra Gut Termite Protozoa In vitro (Cultura Protozoa) e In vivo (Microinjeção em Termite intestino grosso)

Aprenda a produzir e testar peptídeos antimicrobianos e seus mimics, avaliando atividade contra Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli e citotoxicidade em células L-929. Este protocolo padronizado integra síntese, ensaios de CIM e MTT para descoberta de novos agentes anti-infecciosos.

Produção e Testes de Peptídeos Antimicrobianos e Seus Mimics

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