Name: Isolamento de Células Satélites do Músculo Esquelético para Estudos de Miogênese In Vitro (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-24T14:20:00.000+00:00
Duration: 7 min 56 s
Description: Aprenda a isolar células satélite de músculo esquelético de camundongos adultos e neonatais usando digestão enzimática, filtração sequencial e MACS. Este protocolo otimizado garante alta viabilidade e pureza superior a 97% para estudos de miogênese in vitro.

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<ol><li>Yeh, C. -J., Sattler, K. M., Lepper, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+regulation+of+satellite+cells+via+intercellular+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Gene%22%5BJournal%5D)">Molecular regulation of satellite cells via intercellular signaling.</a> Gene. 858, 147172(2023).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,25% tripsina-EDTA&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>100 & micro; Filtro de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2759</td><td></td></tr><tr><td>30 & micro; penador m &nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>40 & micro; Filtro de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td></td></tr><tr><td>70 & micro; Filtro de células M&nbsp;</td><td>VWR</td><td>130-095-823</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético &nbsp;</td><td>POCH</td><td>568760114</td><td>Dissolvido em dH2O até uma concentração final de 20 mM e esterilizado por um 0,2 & micro; Filtro M</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-Rabbit de burro</td><td>Invitrogen&nbsp;</td><td>A21206</td><td>Dissolvido em solução bloqueante (ver Seção 8.7) em diluição 1:250</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488, anti-camundongos & nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab150113</td><td>Dissolvido em solução bloqueante (ver Seção 8.7) em diluição 1:250</td></tr><tr><td>Cloreto de amônio (NH4Cl)&nbsp;</td><td>BioShop</td><td>AMC303.500</td><td>Dissolva em água até uma concentração final de 50 mM</td></tr><tr><td>Mídia de Montagem Antifade</td><td>Vectashield</td><td>H-2000-10</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-PAX7</td><td>Abcam</td><td>ab187339</td><td>Dissolvido em solução bloqueante (ver Seção 8.7) em diluição 1:100</td></tr><tr><td>Fator básico de crescimento de fibroblastos &nbsp;</td><td>Corning</td><td>354060</td><td>Dissolvido em dH2O estéril até uma concentração de estoque de 10 e micro; g/mL&nbsp;</td></tr><tr><td>Betadine, 100 mg/mL</td><td>EGIS Pharmaceuticals</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placa de cultura celular, 6 poços, Cell+</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902.300</td><td></td></tr><tr><td>Extrato de embrião de galinha & nbsp;</td><td>MP Biomédicos</td><td>2850145</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno I, rabo de rato</td><td>Gibco</td><td>A10483-01</td><td>Dissolvido em 20 mM de ácido acético &nbsp;</td></tr><tr><td>Colagenase, tipo I</td><td>Sigma</td><td>C0130-500MG</td><td>Dissolvido em DMEM e esterilizado por um 0.2 & micro; Filtro M</td></tr><tr><td>Tubo de dissociação (GentleMACS C Tubes)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-237</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle Medium, glicose alta</td><td>Gibco</td><td>31966-021</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>AM9260G</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Centrífugas Cônicas Falcon, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>Tubos Centrífugos Cônicos Falcon, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino</td><td>Gibco</td><td>10082147</td><td></td></tr><tr><td>Soro de cavalo&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>26050088</td><td></td></tr><tr><td>Reagente de marcação magnética (Kit de isolamento de células satélite)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-268</td><td></td></tr><tr><td>Separador magnético (Separador MidiMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS356234</td><td>Dissolvido em DMEM até 10% de concentração&nbsp;</td></tr><tr><td>Paraformaldeído, 4% em PBS</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899. AK</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato & nbsp;</td><td>VWR</td><td>392-0334</td><td></td></tr><tr><td>Coluna de separação (Colunas LS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo de Miosina do Músculo Esquelético, MHC</td><td>Santa Cruz</td><td>SC-32732</td><td>Dissolvido em solução bloqueante (ver Seção 8.7) em diluição de 1:50</td></tr><tr><td>Prato TC, 100 x 20 mm</td><td>SARSTEDT</td><td>83.3902</td><td></td></tr><tr><td>Dissociador de tecidos (Dissociador GentleMACS)</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-235</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-1L</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento de células satélites do músculo esquelético para estudos de miogênese in vitro

Isolation of Skeletal Muscle Satellite Cells for In Vitro Myogenesis Studies

Isolamento de Células Satélites do Músculo Esquelético para Estudos de Miogênese In Vitro

Skeletal muscle regeneration and growth depend on satellite cells, the muscle tissue&#39;s resident stem cells. Currently, these cells serve as ...

isolation-skeletal-muscle-satellite-cells-for-vitro-myogenesis

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O micro-dissecados técnica de explantes é um método robusto e confiável para isolar proliferativa das células do músculo esquelético juvenil, adulto ou músculos embrionárias como fonte de células-tronco do músculo esquelético. Excepcionalmente, estas células têm sido clonal para produzir derivados do músculo esquelético linhas de células-tronco usado para in vivo o transplante.

Adultas e embrionárias Cultura Microexplant Músculo Esquelético e isolamento de células-tronco musculares

Este vídeo demonstra o isolamento de células satélites dos tecidos musculares branquioéricos da cabeça de rato por meio de dissecção tecidual, digestão enzimática e subsequente purificação mecânica e centrífuga. As células são então semeadas em poços revestidos com matriz extracelular para diferenciação em mioblastos e, eventualmente, em miotubos e fibras musculares maduras.

Uma técnica para isolar células satélites do tecido muscular da cabeça de rato

Isolamento e cultivo de fibras musculares é o padrão...

Isolamento e Cultura de miofibras individuais e suas células satélites do músculo esquelético

O isolamento e cultura de uma população pura de células satélites quiescentes, uma população de células estaminais musculares, é essencial para a compreensão da haste músculo biologia celular e regeneração, bem como o transplante de células estaminais para terapias em distrofia muscular e outras doenças degenerativas.

Isolamento, cultura e transplante de células musculares satélite

A cultura in vitro sistemas provaram indispensável para a nossa compreensão de myogenesis vertebrados. No entanto, ainda há muito a ser aprendido sobre o desenvolvimento do músculo esquelético não Mamífero e crescimento, particularmente na taxa basal. De uma forma eficiente e robusta para isolar as células estaminais de adultos deste tecido, as células precursoras miogénicos (PPM), e manter a sua auto-renovação, a proliferação e diferenciação de uma configuração de cultura primária permite a...

Preparação de Primário Miogênica de Células Precursoras / Culturas de mioblastos de Vertebrados basais Linhagens

Os principais tipos de células aderentes derivadas do músculo humano são células miogênicas e fibroblastos. Aqui, as populações de células são enriquecidas usando classificação de células ativadas por magnetismo com base no antígeno CD56. A imunomarcação subsequente com anticorpos específicos e o uso de técnicas de análise de imagem permitem a quantificação das características citoplasmáticas e nucleares em células individuais.

Isolamento e Quantitative Immunocytochemical caracterização de células Miogênica primários e fibroblastos de músculo-esquelético humano

Este protocolo descreve o isolamento de células de satélite a partir de músculos da cabeça branquiométrico de um rato 9 semanas de idade. Os músculos são originários de diferentes arco branquial. Subsequentemente, as células satélites são cultivadas em um revestimento local de tamanho milímetros para estudar a sua diferenciação. Esta abordagem evita a expansão e passagem em células de satélite.

Isolamento e caracterização de células-satélite de músculo de rato Cabeça branquiométrico

A identificação precisa de células satélites é essencial para estudar as suas funções sob diferentes condições fisiológicas e patológicas. Este artigo apresenta um protocolo para identificar células satélites em seções de músculo esquelético adulto baseado em imunofluorescência manchando.

Identificação de células satélite de músculo esquelético por imunofluorescência com anticorpos de laminina e Pax7

Este protocolo ilustra 1) o isolamento e cultura de fibroblastos primários do músculo gastrocnêmio de camundongos adultos, bem como 2) purificação e caracterização de exossomos usando um método de ultracentrifugação diferencial combinado com gradientes de densidade de sacarose seguidos por análises de western blot.

Isolamento e Caracterização de Exossomos de Fibroblastos de Músculo Esquelético

Aqui, propomos um método para obter eficientemente fibras musculares únicas nos estágios iniciais pós-natal do modelo de camundongo Lamin Δ8-11, um modelo muito severo para distrofia muscular Emery-Dreifuss (EDMD).

Isolamento e Cultura de Miofibra único de um modelo murino de distrofia muscular em emery-dreifuss no desenvolvimento pós-natal antecipado

O músculo esquelético compreende vários tipos celulares, incluindo células-tronco residentes, cada uma com uma contribuição especial para a homeostase e regeneração muscular. Aqui, a cultura 2D de células-tronco musculares e o nicho de células musculares em um ambiente ex vivo que preserva muitas das características fisiológicas, in vivo e ambientais são descritas.

Cultura não fracionada em massa de músculo esquelético de camundongo para recapitular nicho e quiescência de células-tronco

Aprenda a isolar células satélite de músculo esquelético de camundongos adultos e neonatais usando digestão enzimática, filtração sequencial e MACS. Este protocolo otimizado garante alta viabilidade e pureza superior a 97% para estudos de miogênese in vitro.

Isolamento de Células Satélites do Músculo Esquelético para Estudos de Miogênese In Vitro

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