Name: Protocolo para Dissociação de Célula Única, Sequenciamento de RNA e Isolamento de Células Mioepiteliais e Fibroblastos das Glândulas Lagrimais e Salivares Envelhecidas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-24T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 37 s
Description: Aprenda a dissociar células únicas de glândulas lacrimais envelhecidas de camundongos para sequenciamento de RNA e citometria de fluxo. Este protocolo otimizado preserva a viabilidade celular e permite o isolamento de mioepitélios e fibroblastos.

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<ol><li>Guo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+aging-related+diseases%3A+from+molecular+mechanisms+to+interventions+and+treatments%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Aging and aging-related diseases: from molecular mechanisms to interventions and treatments.</a> Signal Transduct Target Ther. 7 (1), 391(2022).</li>
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<li>Molla Desta, G., Birhanu, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advancements+in+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%3A+transforming+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biochim+Pol%22%5BJournal%5D)">Advancements in single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics: transforming biomedical research.</a> Acta Biochim Pol. 72, 13922(2025).</li>
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<li>Mauduit, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+closer+look+into+the+cellular+and+molecular+biology+of+myoepithelial+cells+across+various+exocrine+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Ocul+Surf%22%5BJournal%5D)">A closer look into the cellular and molecular biology of myoepithelial cells across various exocrine glands.</a> Ocul Surf. 31, 63-80 (2024).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td><forte>Material</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4919</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 (1&nbsp; Solução M)</td><td>BioVision</td><td>B1010-100</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase IV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5138</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Remoção de Células Mortas</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Remoção de Células Mortas</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>C756V28</td><td></td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25-100MG</td><td></td></tr><tr><td>DPBS&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal, IgG ultra-baixo</td><td>Gibco</td><td># 16250078</td><td></td></tr><tr><td>Solução Equilibrada de Sal de Hank (HBSS)</td><td>Corning (Thermo Fisher Scientific)</td><td>21-022-CV</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (1&nbsp; Solução M)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Solução de isoflurano</td><td>Covertus</td><td># 11695067772</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (30 & micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-098-458</td><td></td></tr><tr><td>MACS&reg; SmartStrainers (70 & micro; m)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-110-916</td><td></td></tr><tr><td>Médio/F12 (DMEM/F12)</td><td>Millipore</td><td>DF-042-B</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2 1M</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Colunas MS</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NaCl (estoque 5M)</td><td>Invitrogen & troca;</td><td>AM9759</td><td></td></tr><tr><td>Comprimidos de Soro Salino Tamponado de Fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P8920-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Solução de Lisis de Hemácios (10 vezes)</td><td>Miltenyi biotec</td><td>130-094-183</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase&nbsp;</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Solução Trippan Blue, 0,4%</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>EDTA ultra-puro (0,5M, pH 8,0)</td><td>Invitrogen</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td><forte>Anticorpos</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD140a (PDGFRA) Anticorpo Monoclonal (APA5), APC-eFluor & trade; 780, Rato / IgG2a, kappa</td><td>eBiociência</td><td>47-1401-82; RRID:AB_2784706</td><td></td></tr><tr><td>FcBlock (bloqueador de Fc CD16/CD32)</td><td>BD em Biociências&nbsp;</td><td>553141; RRID:AB_394656</td><td></td></tr><tr><td>FxCycle & trade; Mancha de Violeta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>F10347</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonal de rato CD326 (EpCAM)-APC (G8.8), IgG2a de rato, kappa</td><td>eBiociência</td><td>17-579182; RRID:AB_2716944</td><td></td></tr><tr><td><forte>ratos</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Acta2GFP&nbsp; </td><td>Presente gentil do Dr. Ivo Kalajzic</td><td>PMID: 18571490</td><td></td></tr><tr><td>PdgfraEGFP&nbsp; - B6.129S4-Pdgfratm11(EGFP)Sor/J</td><td>O laboratório Jackson</td><td>RRID:IMSR_JAX:007669</td><td></td></tr><tr><td><forte>Equipamento</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Invitrogen & troca; &nbsp; Condessa e comércio; 3 Contador Automático de Células</td><td>Fisher Scientific</td><td>A49862; RRID:SCR_026963</td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo para dissociação de célula Única, sequenciamento de rna e isolamento de células mioepiteliais e fibroblastos das glândulas lagrimais e salivares envelhecidas

Protocol for Single-Cell Dissociation, RNA Sequencing, and Isolation of Myoepithelial Cells and Fibroblasts from the Aged Lacrimal and Salivary Glands

Protocolo para Dissociação de Célula Única, Sequenciamento de RNA e Isolamento de Células Mioepiteliais e Fibroblastos das Glândulas Lagrimais e Salivares Envelhecidas

Aging of the lacrimal gland (LG) is associated with reduced tear secretion and chronic inflammation, contributing to dry eye disease. Age-related LG ...

protocol-for-single-cell-dissociation-rna-sequencing-isolation

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Neurônios sensoriais específicos de órgãos são difíceis de identificar. O rastreamento Fast Blue é usado para identificar neurônios nodose que inervam as vias aéreas para classificação celular. Os neurônios nodose classificados são usados para extrair ácido ribonucleico (RNA) de alta qualidade para sequenciamento. Usando este protocolo, a expressão gênica de neurônios específicos das vias aéreas é determinada.

Um método para alvejar e Isolar Airway-inervação neurônios sensoriais em Ratos

O objetivo do presente protocolo é obter amostras de alta integridade do RNA dos gânglios entéricos isolados de não fixado, recém-ressecados tecido intestinal humano usando laser captura microdissection (LCM). Este protocolo envolve congelado amostras de tecido intestinal humano, cryosectioning, coloração etanólica e desidratação, LCM, a preparar e a extração do RNA.

Otimização de captura Laser Microdissection para o isolamento dos gânglios entéricos de tecido humano fresco congelado

A glândula lacrimal (LG) tem dois tipos de células expressando α-actínio do músculo liso (αSMA): células mioepiteliais (MECs) e pericytes. Os MECS são de origem ectodérmica, encontrados em muitos tecidos glandulares, enquanto os pericitos são células musculares lisas vasculares de origem endodérmica. Este protocolo isola MECS e pericitos de LGS murino.

Isolamento de células mioepiteliais das glândulas lacrimal e submandibular de Murina adulta

Nós apresentamos um método para isolar e cultivar pilhas epithelial glândula-derivadas humanas preliminares do salivar. Estas pilhas exibem testes padrões da expressão de gene consistentes com eles que são da origem epithelial salivar e podem ser crescidos como salispheres em matrizes da membrana do porão derivadas das pilhas do tumor de engelbreth-Holm-enxame ou como monocamadas em pratos tratados da cultura.

Isolação de pilhas epithelial salivares das glândulas salivares humanas para o crescimento in vitro como Salispheres ou monolayers

Este protocolo descreve a microdissecção da captação do laser para a isolação da cartilagem e do osso das seções congeladas frescas do embrião do rato. Cartilagem e osso podem ser rapidamente visualizados por manchas violetas cresyl e coletados precisamente para produzir RNA de alta qualidade para análise transcriptômica.

Microdissecção de captura a laser da cartilagem embrionária do rato e osso para análise de expressão gênica

A obtenção de uma população pura de fibroblastos é crucial para estudar seu papel na reparação de feridas e fibrose. Descrito aqui é um método detalhado para isolar fibroblastos e miofibroblastos de corações de camundongos ilesos e feridos seguido susceptência de sua pureza e funcionalidade por imunofluorescência, RTPCR, triagem celular assistida por fluorescência, e contração de gel de colágeno.

Isolamento e Caracterização de Fibroblastos Cardíacos Adultos e Miofibroblastos

O protocolo atual apresenta um método rápido, eficiente e suave para isolar células únicas adequadas para análise de RNA-seq unicelular a partir de um incisivo de rato em crescimento contínuo, molar de rato e dentes humanos.

Isolamento rápido de células únicas de dentes humanos e de camundongos

Um método de microdisseção do oviduto do camundongo que permite a coleta dos segmentos individuais, mantendo a integridade do RNA, é apresentado. Além disso, é descrito o procedimento de dissociação de células oviducais não enzimáticas. Os métodos são apropriados para análise genética e proteica subsequente dos segmentos oviductais funcionalmente diferentes e células oviductais dissociadas.

Microdisseção e Dissociação do Ovídeo Murine: Identificação do Segmento Individual e Isolamento de Célula Única

Este artigo fornece um protocolo simplificado para a dissecção e dissociação do epitélio olfatório murino para fins de sequenciamento de RNA de núcleo único.

Dissecção rápida e dissociação do epitélio olfatório de camundongo para suspensões de núcleo único

Este protocolo detalha a separação do epitélio da lente ocular do camundongo e da massa em massa da célula da fibra, seguida pelo isolamento de RNA e análise de qPCR. Este método permite separar os compartimentos das células do cristalino para uma análise mais detalhada do transcriptoma e dos processos biológicos em células epiteliais versus células de fibra diferenciadas.

Isolamento de RNA do epitélio da lente ocular de camundongo e massas em massa de células de fibra

Aprenda a dissociar células únicas de glândulas lacrimais envelhecidas de camundongos para sequenciamento de RNA e citometria de fluxo. Este protocolo otimizado preserva a viabilidade celular e permite o isolamento de mioepitélios e fibroblastos.

Protocolo para Dissociação de Célula Única, Sequenciamento de RNA e Isolamento de Células Mioepiteliais e Fibroblastos das Glândulas Lagrimais e Salivares Envelhecidas (Vídeo) | JoVE Journal

Protocolo para Dissociação de Célula Única, Sequenciamento de RNA e Isolamento de Células Mioepiteliais e Fibroblastos das Glândulas Lagrimais e Salivares Envelhecidas

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