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	<li>Vogelstein, B., Gillespie, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparative+and+analytical+purification+of+DNA+from+agarose.">Preparative and analytical purification of DNA from agarose.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 76 (2), 615-619 (1979).</li><li>Boom, W. R., Adriaanse, H. M. A., Kievits, T., Lens, P. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+for+isolating+nucleic+acid.">Process for isolating nucleic acid.</a> US patent. , (1993).</li><li>Guerry, P., LeBlanc, D. J., Falkow, S. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+method+for+the+isolation+of+plasmid+deoxyribonucleic+acid.">General method for the isolation of plasmid deoxyribonucleic acid.</a> J Bacteriol. 116 (2), 1064-1066 (1973).</li><li>Borodina, T. A., Lehrach, H., Soldatov, A. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+purification+on+homemade+silica+spin-columns.">DNA purification on homemade silica spin-columns.</a> Anal Biochem. 321 (1), 135-137 (2003).</li><li>Liao, P. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+mitochondria+from+cells+and+tissues.">Isolation of mitochondria from cells and tissues.</a> Methods Cell Biol. 155, 3-31 (2020).</li><li>Terp, S. K., Pedersen, I. S., Stoico, M. P. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+of+cell-free+DNA:+evaluation+of+efficiency,+quantity,+and+quality.">Extraction of cell-free DNA: evaluation of efficiency, quantity, and quality.</a> J Mol Diagn. 26 (4), 310-319 (2024).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+and+application+of+an+efficient+plant+DNA+extraction+protocol+for+laboratory+and+field+testing.">Evaluation and application of an efficient plant DNA extraction protocol for laboratory and field testing.</a> J Zhejiang Univ Sci B. 22 (2), 99-111 (2021).</li><li>Espy, M. J., Patel, R., Paya, C. V., Smith, T. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+three+methods+for+extraction+of+viral+nucleic+acids+from+blood+cultures.">Comparison of three methods for extraction of viral nucleic acids from blood cultures.</a> J Clin Microbiol. 33 (1), 41-44 (1995).</li><li>Pueschel, L., Li, H., Hymes, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Streamlined+purification+of+plasmid+DNA+from+prokaryotic+cultures.">Streamlined purification of plasmid DNA from prokaryotic cultures.</a> J Vis Exp. (47), e2407 (2011).</li><li>. QIAvac accessories Available from: <a target="_blank" href="https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/vacuum-manifolds-and-accessories/qiavac-accessories">https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/vacuum-manifolds-and-accessories/qiavac-accessories</a> (2025)</li><li>Clark, P., Greenizen, K. E., Doyle, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multifunctional+vacuum+manifold.">Multifunctional vacuum manifold.</a> US patent. , (2009).</li><li>. QIAcube Connect DNA and RNA extraction instrument Available from: <a target="_blank" href="https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/dna-rna-purification/instruments-equipment/qiacube-connect">https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/dna-rna-purification/instruments-equipment/qiacube-connect</a> (2025)</li><li>. NucleoVac 24 vacuum manifold&#8212;vacuum processing of nucleic acid purification columns Available from: <a target="_blank" href="https://www.takarabio.com/products/nucleic-acid-purification/accessories-and-components/htp-accessories/nucleovac-24-vacuum-manifold">https://www.takarabio.com/products/nucleic-acid-purification/accessories-and-components/htp-accessories/nucleovac-24-vacuum-manifold</a> (2025)</li><li>. QIAquick 96 PCR purification kits Available from: <a target="_blank" href="https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/dna-rna-purification/dna-purification/dna-clean-up/qiaquick-96-pcr-purification-kits">https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/dna-rna-purification/dna-purification/dna-clean-up/qiaquick-96-pcr-purification-kits</a> (2025)</li></ol>

<table><tbody><tr><td>3D Printer Filament</td><td>NIT, Russia</td><td>-</td><td>PETG ou PLA recomendado</td></tr><tr><td>Buffer N3</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19064</td><td></td></tr><tr><td>Buffer P1</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19051</td><td></td></tr><tr><td>Buffer P2</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19052</td><td></td></tr><tr><td>Creality Ender-3 S1 Pro</td><td>Creality, China</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Elution Buffer&nbsp;</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19086</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5702</td><td>Eppendorf, Germany</td><td>22626001</td><td>Rotor de ângulo fixo</td></tr><tr><td>Eppendorf Centrifuge 5804 R</td><td>Eppendorf, Germany</td><td>22625080</td><td>Rotor de placa de cesta oscilante</td></tr><tr><td>Ethidium Bromide&nbsp;</td><td>Biolabmix, Russia</td><td>EtBr-10</td><td></td></tr><tr><td>Frit of 1000 &mu;L Filter Pipette Tip</td><td>GenFollower, China</td><td>E-FTB1000</td><td>Parte das Colunas de Filtro&nbsp;</td></tr><tr><td>Miniprep Without Filter Barrier Spin Column</td><td>JVLAB, China</td><td>-</td><td>Parte das Colunas de Filtro&nbsp;</td></tr><tr><td>Phenol Red</td><td>Lenreactiv, Russia</td><td>200125</td><td></td></tr><tr><td>PrusaSlicer</td><td>Prusa Research, Czech Republic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>QIAprep 2.0 Spin Miniprep Columns</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>27115</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19101</td><td></td></tr><tr><td>Wash Buffer</td><td>Qiagen, Netherlands</td><td>19065</td><td></td></tr></tbody></table>

extração de dna em coluna de média capacidade usando racks de 24 poços

Medium-Throughput Column DNA Extraction Using 24-Well Racks

Extração de DNA em Coluna de Média Capacidade Usando Racks de 24 Poços

Silica-membrane spin column extraction is the standard for high-quality DNA purification but is labor-intensive and difficult to scale manually beyond ...

Nossa pesquisa concentra-se em trilhos impressos em 3D para extração paralela de DNA e RNA em colunas de centrifugação, integrando métodos manuais e automatizados. Este artigo aborda as limitações dos métodos manuais em colunas de centrifugação, que exigem muito trabalho, ao permitir o processamento simultâneo de até 116 amostras de DNA ou RNA. Para começar, utilize uma impressora 3D por filamento fundido com bico de 0,4 milímetro para imprimir o suporte.Utilize polilactídeo genérico, ou PLA, politereftalato de etileno glicol, ou PETG, ou filamento de acrilonitrila butadieno estireno, ou ABS, com preenchimento de 100%. Defina a altura da camada em 0,1 milímetro e ative o alisamento da superfície. Ajuste as configurações de impressão para garantir estanqueidade e estabilidade mecânica.Teste os suportes quanto à impermeabilidade antes de usá-los pela primeira vez. Encha o reservatório impresso com etanol 70% para testá-lo antes do uso. Realize centrifugação por durações progressivamente crescentes para confirmar a ausência de vazamentos ou danos estruturais.Após o teste bem-sucedido com cola, una os componentes do reservatório base para formar uma unidade selada. Inocule escherichia coli, ou transformantes E.Coli, em três a cinco mililitros de caldo lisogênico, ou meio LB, contendo antibióticos apropriados. Incube a cultura por 12 a 16 horas a 37 graus Celsius com agitação.Centrifugue a 2000 G durante 10 minutos para recolher as células. Descarte o sobrenadante. Adicione 250 microlitros de tampão de re-suspensão ao precipitado.E ressuspenda completamente o pellet por vortex ou pipetagem. Adicione 250 microlitros de tampão de lise. E misture suavemente invertendo o tubo quatro a seis vezes ou agitando a placa de 24 poços.Adicione 350 microlitros de tampão de neutralização e misture. Observe a formação de um precipitado branco para confirmar a neutralização bem-sucedida. Adicione tampão de lise em um tubo contendo pó de dióxido de titânio.Adicione uma proporção de volume para massa de dois para um. Adicione 250 microlitros da suspensão de dióxido de titânio ao lisado e misture agitando o tubo.Adicione 350 microlitros de tampão de neutralização e misture completamente. Centrifugue a 2000 G durante 10 minutos. Observe o pellet celular completamente precipitado na presença de dióxido de titânio e o sobrenadante aparecendo totalmente transparente.Na ausência de dióxido de titânio, observe a presença de sedimento residual no sobrenadante. Colete o sobrenadante sem perturbar o precipitado e transfira-o para a coluna de ligação. Coloque as colunas de ligação de DNA na camada do suporte de colunas do suporte.Posicione as tampas das colunas nas ranhuras designadas para fixá-las durante a centrifugação. Coloque as colunas de clarificação ou filtração na camada de coluna de filtro diretamente acima das colunas de ligação. Transfira o lisado neutralizado preparado para as colunas de filtração.Coloque o suporte montado em um rotor de rotor de placa com cubas oscilantes. Centrifugue a 2000 G por um minuto à temperatura ambiente. Após remover o suporte da centrífuga, remova e descarte a camada da coluna de filtro.Descarte o fluxo proveniente do reservatório em um recipiente de resíduos. Monte novamente o suporte com as colunas de ligação. Adicione de 500 a 700 microlitros de tampão de lavagem a cada coluna de ligação.Centrifugue a 2000 G durante um minuto. Descarte o fluxo do reservatório e repita a etapa de lavagem conforme demonstrado anteriormente. Remova as colunas de ligação do suporte e transfira-as para tubos de coleta de dois mililitros.Centrifugue a 10.000 G ou mais por um minuto para secar a membrana. Transfira as colunas para tubos limpos de 1,5 mililitro. Adicione 50 microlitros de tampão de eluição ou água diretamente à membrana e incube as colunas por um minuto à temperatura ambiente.Centrifugue a 10.000 G ou mais por um minuto para eluir o DNA. O rendimento total de plasmídeo não apresentou diferença significativa entre o método convencional e a extração utilizando as configurações do suporte. A confirmação do plasmídeo foi preservada com distribuições semelhantes das formas relaxadas, linearizadas e superenroladas.A distribuição do corante foi restrita à área de descarte diretamente abaixo das colunas carregadas, sem sinal visível detectado em poços adjacentes ou nas pontas das colunas vizinhas, indicando que o design do suporte reduz a probabilidade de salpicos e transferência entre colunas. A amplificação foi detectada apenas nos eluatos das colunas às quais o amplicon havia sido adicionado. Esta partícula permite aos pesquisadores obter DNA plasmidial de alta qualidade para aplicações posteriores, incluindo clonagem, sequenciamento e análise por PCR.A consideração mais importante ao realizar este protocolo é evitar a contaminação cruzada mediante a utilização de um reservatório estanque, sem sobreposições, fabricado por impressão 3D. Além disso, após seguir este procedimento, essas grades podem ser usadas para qualquer análise de extração de ácidos nucleicos baseada em coluna.

medium-throughput-column-dna-extraction-using-24-well-racks

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nós descrevemos um método para extração de DNA genômico de alto peso molecular a partir da biomassa planctônica concentrou-se em 0,22 mM filtros Sterivex, seguido por centrifugação em gradiente de cloreto de césio densidade para purificação.

Extração de DNA de 0,22 mM Sterivex Filtros e Césio cloreto de centrifugação em gradiente de densidade

Nós fornecemos um protocolo melhorado para a extração de DNA de alto peso molecular de tapetes microbianos hipersalinos. Células microbianas são separados da matriz mat antes da extração e purificação DNA. Isso aumenta a concentração, qualidade e tamanho do DNA. O protocolo pode ser usado para outras amostras refratário.

Extração de DNA de alto peso molecular de Esteiras Microbianas

TruTip é uma tecnologia de extracção de ácido nucleico simples, onde uma matriz de ligação poroso monolítico é inserida uma ponta de pipeta. Por conseguinte, a preparação da amostra é de formato compatível com os instrumentos de manipulação mais líquidos, e pode ser usado para muitos médio para aplicações clínicas de alto rendimento e tipos de amostras.

Alto rendimento, extração automatizada de DNA e RNA de amostras clínicas utilizando a Tecnologia TruTip em Robots Liquid Handling comuns

Este manuscrito descreve uma abordagem automatizada de seleção de tamanho de gel para purificar fragmentos de DNA para sequenciamento de próxima geração. A tecnologia Ranger fornece automação completa de todo o processo de carregamento de gel de agarose, análise eletroforética e recuperação de fragmentos de DNA direcionados, permitindo bibliotecas de sequenciamento de última geração de alto rendimento e alta qualidade.

Automated Gel seleção de tamanho para melhorar a qualidade das bibliotecas de sequenciação de próxima geração Preparado a partir de amostras de água do ambiente

Este protocolo de extracção modificado melhora RNA e DNA rendimentos provenientes de regiões mais precisamente alvo de interesse nos blocos de tecido histopatológicos.

Preparação de Núcleos de tecido parafina-encaixados formalina-fixados para RNA e DNA Extraction

A comparação e otimização de dois métodos de enriquecimento de DNA orgânico de plantas são apresentadas: centrifugação diferencial tradicional e fracionamento do gDNA total com base no estado de metilação. Nós avaliamos a quantidade e a qualidade de DNA resultantes, demonstram desempenho em seqüenciamento de próxima geração de leitura curta e discutimos o potencial para uso em sequenciação de moléculas únicas de leitura longa.

Otimização e Análise Comparativa de Métodos de Enriquecimento de DNA de Plantas Organizadas Adequado para Seqüenciamento de Próxima Geração

Long-leitura sequências facilitam grandemente a montagem de genomas complexas e caracterização da variação estrutural. Nós descrevemos um método para gerar as sequências ultra-longa pelas plataformas de sequenciamento baseado em nanopore. A abordagem adota uma extração de DNA otimizada seguida de preparações de biblioteca modificada para gerar centenas de mil leituras com cobertura moderada de células humanas.

Sequenciamento de leitura ultralonga para análise de DNA genômico completo

Este protocolo descreve o transfection do plasmídeo da elevado-produção de pilhas de mamíferos em uma placa 384-well usando a tecnologia acústica da ejeção da gota. O tempo-demorado, erro-propenso a dispensar e Multiplexing do ADN, mas igualmente a dispensação do reagente do transfection, são software-driven e executado por um dispositivo do nanodispenser. As células são então semeadas nestes poços pré-preenchidos.

Multiplexação e transfecção de plasmídeo de DNA de alta produtividade usando tecnologia de Nanodosagem acústica

Um protocolo detalhado para a geração de Microarrays humanos Self-assembled da proteína para a seleção de inibidores da quinase é apresentado.

Triagem de inibidores da quinase em Microarrays de proteínas humanas Automontados

Os métodos atuais de carregamento de placas de 96 poços para extrações de DNA podem ser propensos à contaminação. Detalhamos um novo método para carregar placas de 96 poços que reduz o risco de contaminação cruzada entre os poços. Nosso método ajudará outros pesquisadores a capitalizar a eficiência das técnicas de extração de DNA de alto rendimento e minimizar o risco de contaminação.

Métodos modificados para carregamento de placas de extração de DNA de alto rendimento reduzem o potencial de contaminação

Este protocolo descreve um método experimental e um fluxo de trabalho de análise de dados para decote sob metas e liberação usando nuclease (CUT&amp;RUN) no patógeno fúngico humano Candida albicans.

Perfil em todo o genoma das interações de vinculação fator de transcrição-DNA em albicanos candida: um método abrangente CUT&amp;RUN e fluxo de trabalho de análise de dados

99 visualizações.  Research Institute of Systems Biology and Medicine of Rospotrebnadzor. Nossa pesquisa se concentra em pistas impressas em 3D para coluna de rotação paralela, extração de DNA e RNA, conectando métodos manuais e automatizados. Esta partícula aborda a limitação dos métodos manuais de coluna de rotação trabalhosos, permitindo o processamento simultâneo de até 116 amostras de DNA ou RNA. Para começar, use uma impressora 3D de filamento fundido com um bico de 0,4 milímetros para imprimir o rack.Use polilactídeo genérico, ou PLA, polietileno ter...

Extração de DNA em Coluna de Média Capacidade Usando Racks de 24 Poços

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