Name: Manipulação Física para Gerar Embriões Mini de Xenopus (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-04-10T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 9 s
Description: Aprenda a gerar embriões mini de Xenopus laevis usando nós de cabelo para reduzir o volume citoplasmático e aumentar a razão N:C. Este método permite estudar mecanismos de ativação genômica zigótica mediados por tamanho celular.

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<ol><li>Newport, J., Kirschner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+major+developmental+transition+in+early+Xenopus+embryos%3A+I.+Characterization+and+timing+of+cellular+changes+at+the+midblastula+stage%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A major developmental transition in early Xenopus embryos: I. Characterization and timing of cellular changes at the midblastula stage.</a> Cell. 30 (3), 675-686 (1982).</li>
<li>Newport, J., Kirschner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+major+developmental+transition+in+early+Xenopus+embryos%3A+II.+Control+of+the+onset+of+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A major developmental transition in early Xenopus embryos: II. Control of the onset of transcription.</a> Cell. 30 (3), 687-696 (1982).</li>
<li>Kane, D. A., Kimmel, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+midblastula+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The zebrafish midblastula transition.</a> Development. 119 (2), 447-456 (1993).</li>
<li>Lu, X., Li, J. M., Elemento, O., Tavazoie, S., Wieschaus, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coupling+of+zygotic+transcription+to+mitotic+control+at+the+Drosophila+mid-blastula+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Coupling of zygotic transcription to mitotic control at the Drosophila mid-blastula transition.</a> Development. 136 (12), 2101-2110 (2009).</li>
<li>Jevtic, P., Levy, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+nuclear+size+and+DNA+amount+contribute+to+midblastula+transition+timing+in+Xenopus+laevis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Both nuclear size and DNA amount contribute to midblastula transition timing in Xenopus laevis.</a> Sci Rep. 7 (1), 7908(2017).</li>
<li>Edgar, B. A., Kiehle, C. P., Schubiger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+cycle+control+by+the+nucleo-cytoplasmic+ratio+in+early+Drosophila+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cell cycle control by the nucleo-cytoplasmic ratio in early Drosophila development.</a> Cell. 44 (2), 365-372 (1986).</li>
<li>Chen, H., Qian, W., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrating+cellular+dimensions+with+cell+differentiation+during+early+development%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Integrating cellular dimensions with cell differentiation during early development.</a> Curr Opin Cell Biol. 67, 109-117 (2020).</li>
<li>Lee, D. R., Lee, J. E., Yoon, H. S., Roh, S. I., Kim, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compaction+in+preimplantation+mouse+embryos+is+regulated+by+a+cytoplasmic+regulatory+factor+that+alters+between+1-+and+2-cell+stages+in+a+concentration-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Zool%22%5BJournal%5D)">Compaction in preimplantation mouse embryos is regulated by a cytoplasmic regulatory factor that alters between 1- and 2-cell stages in a concentration-dependent manner.</a> J Exp Zool. 290 (1), 61-71 (2001).</li>
<li>Ishimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size-reduced+embryos+reveal+a+gradient+scaling-based+mechanism+for+zebrafish+somite+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Size-reduced embryos reveal a gradient scaling-based mechanism for zebrafish somite formation.</a> Development. 145 (11), dev161257(2018).</li>
<li>Clute, P., Masui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+the+appearance+of+division+asynchrony+and+microtubule-dependent+chromosome+cycles+in+Xenopus+laevis+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of the appearance of division asynchrony and microtubule-dependent chromosome cycles in Xenopus laevis embryos.</a> Dev Biol. 171 (2), 273-285 (1995).</li>
<li>Chen, H., Einstein, L. C., Little, S. C., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+patterning+of+zygotic+genome+activation+in+a+model+vertebrate+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal patterning of zygotic genome activation in a model vertebrate embryo.</a> Dev Cell. 49 (6), 852-866.e7 (2019).</li>
<li>Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenopus+laevis+in+vitro+fertilization+and+natural+mating+methods%5BTitle%5D)+AND+%22CSH+Protoc%22%5BJournal%5D)">Xenopus laevis in vitro fertilization and natural mating methods.</a> CSH Protoc. 2007, pdb prot4737(2007).</li>
<li>Chen, H., Good, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+nascent+transcription+in+wholemount+vertebrate+embryos+to+characterize+zygotic+genome+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Imaging nascent transcription in wholemount vertebrate embryos to characterize zygotic genome activation.</a> Methods Enzymol. 638, 139-165 (2020).</li>
<li>Meaders, J. L., Burgess, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microtubule-based+mechanisms+of+pronuclear+positioning%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Microtubule-based mechanisms of pronuclear positioning.</a> Cells. 9 (2), 505(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Agulha 30-G</td><td>BD Medicina</td><td>305128</td><td>Para perfurar embriões</td></tr><tr><td>Placas de Petri Descartáveis de 60 mm</td><td>VWR</td><td>25384-092</td><td>Para incubar embriões</td></tr><tr><td>Estereoscópios Zoom ACCU-SCOPE 3075</td><td>VWR</td><td>470351-130</td><td>Para visualizar embriões</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-9414</td><td>Para revestir placas de Petri</td></tr><tr><td>Pinça Dumont, Estilo 5</td><td>Ciências da Microscopia Eletrônica</td><td>72701-D</td><td>Para ajustar e manter embriões</td></tr><tr><td>Ficoll 400</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GE17-0300-10</td><td>Para incubar embriões</td></tr><tr><td>TipOne Pipette Tip, 10 & micro; L</td><td>USA Scientific</td><td>1111-3700</td><td>Para montar os nós de cabelo</td></tr><tr><td>Bloco de cera, preto</td><td>Carolina Biological Supply Co.</td><td>974228</td><td>Para montar os nós de cabelo</td></tr></tbody></table>

manipulação física para gerar embriões mini de xenopus

Physical Manipulation to Generate Xenopus Mini Embryos

Manipulação Física para Gerar Embriões Mini de Xenopus

A defining characteristic of early embryogenesis is the rapid, exponential decrease in individual cell size while the overall embryo volume remains ...

physical-manipulation-to-generate-xenopus-mini-embryos

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Xenopus ectoderma embrionário tornou-se um modelo atraente para os estudos da polaridade celular. Um ensaio é descrito, em que a distribuição subcelular de proteínas fluorescentes é avaliada em células ectoderma. Este protocolo vai ajudar abordar as questões relacionadas ao controle espacial de sinalização.

Translocação polarizada de proteínas fluorescentes em Xenopus Ectodérmicas em resposta à sinalização Wnt

Este vídeo demonstra os procedimentos usados ​​para crescer culturas primárias de...

Simultânea de pré e pós-sináptica gravação eletrofisiológico de<em&gt; Xenopus</em&gt; Nervo músculo-Co-culturas

Uma técnica para o transplante "Extreme Anterior Domain" tecido facial entre embriões de Xenopus laevis foi desenvolvido. Tecidos podem ser movidos de um gene de expressão fundo em outra, permitindo o estudo das necessidades locais para o desenvolvimento craniofacial e sinalização para as interações entre as regiões faciais.

Transplantes faciais em<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Os embriões

Um método para quantificar o tamanho e forma orofacial de embriões de Xenopus laevis foi desenvolvido. Neste protocolo, as medições de tamanho tradicional são combinados com morfometria geométrica para permitir análises mais sofisticadas de desenvolvimento orofacial e defeitos.

Quantificação de Orofacial nos fenótipos Xenopus

Descrevemos métodos de manipulação de oócitos imaturos de Xenopus laevis, maturação in vitro de oócitos em óvulos e injeção intracitoplasmática de espermatozoides. Este protocolo permite a degradação de algumas proteínas maternas e a superexpressão de genes de interesse na fertilização e, portanto, é valioso para estudar papéis de fatores específicos no desenvolvimento embrionário inicial.

Manipulação e<em&gt; In Vitro</em&gt; Maturação<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Oócitos, seguido de injeção intracitoplasmática de espermatozóide, para estudar o desenvolvimento embrionário

O manuscrito aqui fornece um simples conjunto de métodos que permitam analisar a secreção e difusão de ligantes marcados fluorescentes em Xenopus. Isto proporciona um contexto para testar a capacidade de outras proteínas para modificar a distribuição de ligando e permitindo experiências que podem dar uma visão sobre os mecanismos que regulam a gradientes de morfogénio.

Utilizando Análise de confocal<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Para Investigar moduladores de Wnt e Shh morfogénio gradientes

Descrevemos um sistema de capas de oócitos e animais de Xenopus para a clonagem de expressão de genes capazes de induzir uma resposta em ectoderma competente, e discutimos técnicas para a análise subsequente de tais genes. Este sistema é útil na identificação funcional de uma ampla gama de produtos gênicos.

Clonagem Funcional Utilizando um<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocyte Sistema de Expressão

Aqui, apresentamos um protocolo para usar mapas de destino e traçadores de linhagem para direcionar injeções em blastômeros individuais que dão origem ao rim de embriões de Xenopus laevis.

Técnica ao Target microinjeção para o desenvolvimento<em&gt; Xenopus</em&gt; Kidney

Este protocolo demonstra um método baseado em fluorescência para visualizar a vasculatura e quantificar sua complexidade em Xenopus tropicalis . Os vasos sanguíneos podem ser visualizados minutos após a injecção de um corante fluorescente no coração batendo de um embrião após manipulações genéticas e / ou farmacológicas para estudar o desenvolvimento cardiovascular in vivo .

Visualização e Análise Quantitativa da Angiogênese Embrionária<em&gt; Xenopus tropicalis</em

Este protocolo descreve uma estratégia optogenética para modular a atividade da proteína quinase ativada por mitógenos (MAPK) durante a diferenciação celular e o desenvolvimento embrionário de Xenopus . Este método permite a ativação reversível da via de sinalização MAPK na cultura de células de mamíferos e em organismos vivos multicelulares, como embriões Xenopus , com alta resolução espacial e temporal.

Modulação Reversível Mediada por Luz do Caminho Protein Quinaso Ativado por Mitogênio durante a Diferenciação Celular e<em&gt; Xenopus</em&gt; Desenvolvimento embrionário

Este protocolo tem como objetivo demonstrar como microinjetar uma mistura de DNA/DOTAP em olhos de embriões de um dia de idade Xenopus laevis , e como a imagem e reconstruir a proteína fluorescente verde individual (GFP) expressando mandris axonal óptica em mesencefálicas tectal de intacto, vivendo Xenopus Tadpoles.

Microinjection do ADN em Eyebuds em embriões do laevis de Xenopus e imagem latente de GFP que expressa Arbors axonal óticos em girinos intact, vivendo de Xenopus

Aprenda a gerar embriões mini de Xenopus laevis usando nós de cabelo para reduzir o volume citoplasmático e aumentar a razão N:C. Este método permite estudar mecanismos de ativação genômica zigótica mediados por tamanho celular.

Manipulação Física para Gerar Embriões Mini de Xenopus

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