Name: Isolamento e Cultura de Células Microvasculares Endoteliais do Cérebro de Camundongo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Aprenda a isolar e cultivar células endoteliais microvasculares cerebrais de camundongos neonatos. Este protocolo reprodutível utiliza gradiente de BSA e imunosseleção por CD31 para gerar modelos in vitro da barreira hematoencefálica.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>Placas de cultura de 60 mm</td><td>Corning</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura de 96 poços</td><td>Corning</td><td>41122107</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6283</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico-antimótico (opcional)</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD31</td><td>Santa Cruz&nbsp;</td><td>sc-46694</td><td>1:100</td></tr><tr><td>Anti-GFAP</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-0300</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-GLUT1</td><td>Abcam</td><td>ab115730</td><td>1:200</td></tr><tr><td>Anti-Iba1</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-32725</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-mouse IgG Alexa Fluor (corante 594)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11005</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Anti-rabbit IgG Alexa Fluor&nbsp; (corante 488)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>1:500</td></tr><tr><td>Pipetas automáticas e serológicas</td><td>&nbsp;Oxford LP&nbsp;</td><td>&nbsp;OXL.OXL.OSP-5C</td><td></td></tr><tr><td>Meio basal (para solução de colágeno)</td><td>Gibco (DMEM)</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Álbumina sérica bovina (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9647</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo II</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C6885</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>62248</td><td>1 &micro;g/mL</td></tr><tr><td>DMEM (glicose alta)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>Meio Completo EndoGRO-MV</td><td>Merck Millipore</td><td>SCME004</td><td>Meio de crescimento de células endoteliais</td></tr><tr><td>Tubos Falcon (15 &amp; 50 mL)</td><td>Corning&reg;</td><td>352096 / 352070</td><td></td></tr><tr><td>Soro Fetal Bovino (FBS)</td><td>Gibco (Thermo Fisher)</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio de Fluorescência</td><td>Motic</td><td>BA410</td><td></td></tr><tr><td>Luvas, máscaras, materiais de laboratório</td><td>Vários fornecedores</td><td>&mdash;</td><td></td></tr><tr><td>Heparina (100 U/mL)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio Invertido</td><td>Olympus&nbsp;</td><td>CKX41</td><td></td></tr><tr><td>Ímã de separação magnética</td><td>EasySep&nbsp;</td><td>&nbsp;NC9284020</td><td></td></tr><tr><td>Agitador Orbital (37 &deg;C)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>SK-0180-S</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Bemis</td><td>PM996</td><td></td></tr><tr><td>PBS (1&times;)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga Refrigerada</td><td>HITACHI</td><td>CT5RE</td><td></td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>Fine Science Tools</td><td>Vários</td><td></td></tr><tr><td>Tesouras e pinças finas</td><td>Fine Science Tools</td><td>Vários</td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulose estéril</td><td>BIO-RAD</td><td>1620094</td><td></td></tr><tr><td>Colágeno Tipo I</td><td>Corning&nbsp;</td><td>30394</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento e cultura de células microvasculares endoteliais do cérebro de camundongo

Isolation and Culture of Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells

Isolamento e Cultura de Células Microvasculares Endoteliais do Cérebro de Camundongo

Brain microvascular endothelial cells (BMECs) are the main cellular component of the blood-brain barrier (BBB) and play a key role in regulating molecular ...

Este estudo examina como as células endoteliais cerebrais podem ser isoladas e cultivadas para investigar a função neurovascular na saúde e na doença. O protocolo pode ser utilizado para estudar o endotélio cerebral fetal em distúrbios neurodesenvolvimentais e relacionados à gravidez.Para começar, obtenha cinco filhotes de cinco dias pós-natais. Após a eutanásia dos filhotes, colete seus cérebros em uma cabine de segurança biológica com fluxo laminar e coloque-os em um tubo cônico de 50 mililitros contendo PBS estéril e frio. Role cuidadosamente cada cérebro em uma membrana de nitrocelulose esterilizada para separar as meninges. Transfira os cérebros para uma placa de 100 milímetros contendo PBS frio. Usando um bisturi estéril, remova o bulbo raquidiano, cerebelo, tálamo e bulbo olfativo. Após coletar os córtices cerebrais livres de meninges, transfira-os imediatamente para um tubo cônico de 50 mililitros contendo 5 mililitros de PBS sobre gelo. Usando tesoura estéril, dissocie o tecido mecanicamente. Com uma pipeta de 1 mililitro, aspire e expulse o tecido até obter uma suspensão homogênea sem fragmentos visíveis. Transfira a amostra para um tubo cônico estéril de 15 mililitros co

isolation-and-culture-of-mouse-brain-microvascular-endothelial-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Aqui, nós descrevemos um protocolo para isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos. Este método compreende mecânico e dissociação enzimática do tecido pulmonar, bem como um processo de purificação passo 2, utilizando anti-PECAM-1 e anti-ICAM-2 anticorpos conjugados com esferas magnéticas, que produz uma população de células endoteliais pura de origem principalmente microvascular.

Isolamento e cultura de células endoteliais pulmonares de camundongos Neonatal

Este método descreve como isolar e imortalizar células endoteliais microvasculares de cérebro de rato. Descreve-se um protocolo de passo-a-passo a partir da homogeneização do tecido cerebral, as etapas de digestão, a semeadura e imortalização das células. Normalmente, leva cerca de cinco semanas, para se obter uma homogeneidade, linha celular imortalizada microvascular endotelial.

Geração de uma Murine Cérebro Imortalizado linha celular endotelial microvascular como um<em&gt; In Vitro</em&gt; Sangue Cérebro Modelo Barreira

Este vídeo apresenta o isolamento de microvasos de um cérebro de rato usando uma combinação de centrifugação de gradiente de densidade e métodos de digestão enzimática. Os microvasos isolados podem ser cultivados em frasco de cultura pré-revestido com matriz de colágeno e fibronectina para obtenção de colônias de células endoteliais.

Cultura de células endoteliais de microvasos cerebrais de ratos: um procedimento para isolar e cultivar células endoteliais de microvasos de cérebro de ratos

Este vídeo demonstra um método para isolar pericitos cerebrais de um cérebro de camundongo. As células isoladas são cultivadas em meios específicos de pericitos para promover a proliferação de pericitos.

Isolando e cultivando pericitos cerebrais de camundongos

Este vídeo demonstra um método para isolar os tubos endoteliais do parênquima cerebral de camundongos. Por meio de uma combinação de digestão enzimática e dissociação mecânica, o processo produz um tubo intacto com células endoteliais.

Preparando tubos endoteliais cerebrais a partir de arteríolas parenquimatosas de camundongos

As células endoteliais microvasculares cerebrais (BMEC) são interconectadas por proteínas juncionais específicas formando uma barreira altamente regulada que separa o sangue e o sistema nervoso central (SNC), a chamada barreira hematoencefálica (BBB). O isolamento de células endoteliais microvasculares cerebrais murinas primárias, conforme discutido neste protocolo, permite estudos in vitro detalhados da BHE.

Isolamento da Primária Murino Cérebro microvascular células endoteliais

As células endoteliais vasculares desempenham um papel significativo em muitos distúrbios cardiovasculares importantes. Este artigo descreve um método simples para isolar e expandir as células endoteliais da aorta do camundongo sem o uso de nenhum equipamento especial. Nosso protocolo fornece um meio eficaz de identificar mecanismos na fisiopatologia das células endoteliais.

Isolamento e cultura primária de células de camundongo aórtica endoteliais

Descrevemos um protocolo que permite a purificação do compartimento vascular do cérebro do camundongo. Os vasos cerebrais isolados incluem células endoteliais ligadas por junções apertadas e cercadas por uma lâmina basal contínua, pericitos, células musculares lisas vasculares, bem como membranas astrogliais perivasculares.

Purificação de embarcações do cérebro do rato

A manutenção da cobertura da barreira hematoencefálica é fundamental para a homeostase do sistema nervoso central. Este protocolo descreve técnicas in vitro para delinear os processos fundamentais e patológicos que modulam a cobertura da barreira hematoencefálica.

Ensaios In Vitro para Avaliar Formação e Perturbação de Embarque de Barreira de Sangue-Cérebro

Células endoteliais microvasculares dos músculos esqueléticos (MMEC) forma a parede interna dos capilares musculares e regular a ambos, troca de fluidos/moléculas e migração de células (imunes) entre o tecido muscular e sangue. Isolamento de MMEC murino primário, conforme descrito aqui, permite investigações in vitro abrangentes da unidade"myovascular".

Isolamento de células endoteliais Microvascular do principal músculo esquelético murino

A preparação intensiva de "tubos" endoteliais cerebrais intactos de arteriolas parenchímicas cerebrais é ilustrada para o estudo da regulação do fluxo sanguíneo cerebral. Além disso, demonstramos os pontos fortes experimentais deste modelo de estudo endotelial para a medição de imagens de fluorescência e eletrofisiologia das principais vias de sinalização celular, incluindo alterações no potencial intracelular [Ca2+] e membrana.

Isolamento e Análise Funcional do Endotélio Arteriolar do Cérebro do Rato Parenchyma

Aprenda a isolar e cultivar células endoteliais microvasculares cerebrais de camundongos neonatos. Este protocolo reprodutível utiliza gradiente de BSA e imunosseleção por CD31 para gerar modelos in vitro da barreira hematoencefálica.

Isolamento e Cultura de Células Microvasculares Endoteliais do Cérebro de Camundongo

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