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<table><tbody><tr><td>0.45 micron filter</td><td>Sigma</td><td>S2HVU02RE</td><td></td></tr><tr><td>12k ou 92k oligo chip</td><td>Customarray Inc. (Genscript)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Placas de cultura celular de 15 cm</td><td>Corning</td><td>CLS353004</td><td></td></tr><tr><td>293FT</td><td>Invitrogen</td><td>R70007</td><td></td></tr><tr><td>293NT</td><td>Systems Biosciences</td><td>LV900A-1</td><td></td></tr><tr><td>Fosfatase alcalina</td><td>NEB</td><td>M0290L</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1760-25</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>9804S</td><td></td></tr><tr><td>ATP</td><td>NEB</td><td>P0756S</td><td></td></tr><tr><td>Cutsmart buffer</td><td>NEB</td><td>B6004S</td><td></td></tr><tr><td>Sequenciamento profundo (Next-Seq ou Hi-Seq)</td><td>Illumina</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kit de extração de DNA de sangue e tecido DNAesy</td><td>Qiagen</td><td>69506</td><td></td></tr><tr><td>Meio Eagle modificado de Dulbecco</td><td>Wisent</td><td>319-015-CL</td><td></td></tr><tr><td>Células eletrocompetentes Endura</td><td>Lucigen</td><td>60242-1</td><td></td></tr><tr><td>Kit de meio EpiCult-B para camundongos</td><td>Stemcell Technologies</td><td>05610</td><td></td></tr><tr><td>Esp3I</td><td>NEB</td><td>R0734L</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal</td><td>Wisent</td><td>090-150</td><td></td></tr><tr><td>Kit de limpeza de DNA em gel</td><td>Zymo Research</td><td>D4008</td><td></td></tr><tr><td>Gentle Collagenase/Hyaluronidase</td><td>Stemcell Technologies</td><td>7919</td><td></td></tr><tr><td>Cânulas de eletroporação Gene Pulser/MicroPulser</td><td>BioRad</td><td>1652089</td><td></td></tr><tr><td>Kim-wipe</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34155</td><td></td></tr><tr><td>Ágar LB</td><td>Wisent Technologies</td><td>800-011-LG</td><td></td></tr><tr><td>Extrusor de micropipetas</td><td>Sutter Instrument</td><td>P97</td><td></td></tr><tr><td>Kit de miniprep de plasmídeo</td><td>Frogga Bio</td><td>PDH300</td><td></td></tr><tr><td>NEBuffer 3.1 (Buffer para BsmBI)</td><td>NEB</td><td>R0580L</td><td></td></tr><tr><td>Oligo Clean and Concentrator</td><td>Zymo Research</td><td>D4061</td><td></td></tr><tr><td>Kit de limpeza de oligo</td><td>Zymo research</td><td>D4060</td><td></td></tr><tr><td>Primers de sequenciamento illumina PAGE purificados</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropipetas PCR</td><td>Drummond</td><td>5-000-1001-X10</td><td></td></tr><tr><td>PEI (polietilenimina)</td><td>Sigma</td><td>408727-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina e Estretomicina</td><td>Wisent</td><td>450-201-EL</td><td></td></tr><tr><td>pLKO-Cre</td><td>Addgene</td><td>158032</td><td></td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td></td></tr><tr><td>Poli-L-Lisina</td><td>Sigma</td><td>P2636-100MG</td><td></td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td></td></tr><tr><td>pXPR502-PPH-Cre</td><td>Addgene</td><td>256776</td><td></td></tr><tr><td>Q5 Polymerase 2x Master mix</td><td>NEB</td><td>M0494L</td><td></td></tr><tr><td>Qubit Fluorometric Quantification</td><td>Invitrogen</td><td>Q33327</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-Cas9-EGFP</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#024857</td><td></td></tr><tr><td>R26-LSL-TdTomato camundongos</td><td>Jackson Labratories</td><td>JAX#007909</td><td></td></tr><tr><td>SapI</td><td>NEB</td><td>R0569L</td><td></td></tr><tr><td>T4 DNA ligase</td><td>NEB</td><td>M0202L</td><td></td></tr><tr><td>Tubos de ultracentrífuga</td><td>Beckman Coulter</td><td>344058</td><td></td></tr><tr><td>Unidades de filtro a vácuo</td><td>Fisher Scientific</td><td>SCHVU02RE</td><td></td></tr></tbody></table>

triagem in vivo paralela da eliminação e ativação gênica na glândula mamária do camundongo

Parallel In Vivo Screening of Gene Knockout and Activation in the Mouse Mammary Gland

Triagem In Vivo Paralela da Eliminação e Ativação Gênica na Glândula Mamária do Camundongo

Forward genetics screens are routinely employed to perturb thousands of genetic elements in a pooled fashion with the goal of producing large-scale ...

parallel-vivo-screening-gene-knockout-activation-mouse-mammary

Research

JoVE Journal

Genetics

Genética

Este método descreve como dissecar e avaliar o desenvolvimento da glândula mamária e na função de camundongos. Excisadas glândulas mamárias são avaliados quanto ao grau de desenvolvimento usando montar todo, enquanto a ejeção do leite é avaliada através de um ensaio de oxitocina baseado contração mioepiteliais celular.

Avaliação do desenvolvimento da glândula mamária e Função em modelos de ratos

Lapso de tempo de imagem é utilizado para avaliar o comportamento dos principais pré-neoplásicas células epiteliais mamárias derivados de modelos de ratos geneticamente modificados de risco de câncer de mama para determinar se há correlação entre os parâmetros específicos de comportamento e distintas lesões genéticas.

Lapso de tempo de imagem de pré-neoplásicas primárias células epiteliais mamárias derivados de modelos de rato geneticamente modificado do cancro da mama

Um protocolo para a entrega intraductal não-invasivo de reagentes aquosas para a glândula mamaria do rato está descrito. O método aproveita injecção localizada nos mamilos das glândulas mamárias destinadas especificamente ductos mamários. Esta técnica é adaptável para uma variedade de compostos, incluindo o siRNA, agentes quimioterapêuticos e moléculas pequenas.

Injeção Intraductal para localizada Drug Delivery ao Rato glândula mamária

Ativação de mutações latentes com adenovírus-Cre no sistema ductal resultados mamárias em um câncer de mama metastático clinicamente relevante. Incorporação de um promotor YFP permite o rastreamento de células tumorais metastáticas distais. Este modelo é útil para estudar metástase latente, a imunidade anti-tumor, e para a concepção de novas imunoterapias para tratar o câncer de mama.

Início do Carcinoma de mama metastático por Segmentação do ductal Epithelium com Adenovírus-Cre: Um Modelo Novel de camundongo transgênico do Câncer de Mama

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Aqui descrevemos o protocolo padrão para a detecção de atividade de β-galactosidase em embriões adiantados do rato inteiro e o método de parafina seccionamento e counterstaining. Este é um procedimento fácil e rápido para monitorar a expressão gênica durante o desenvolvimento, o que também pode ser aplicado às secções de tecidos, órgãos ou células cultivadas.

Rastreamento de expressão gênica, através da detecção de atividade de β-galactosidase em embriões de rato inteiro

O objetivo deste protocolo é descrever uma nova abordagem de modelagem de câncer de mama baseada na injeção intraductal de adenovírus expressando CRE em glândulas mamárias de camundongo. Esta aproximação permite a manipulação Cell-Type-e órgão-específica de eventos oncogênico em uma maneira temporally controlada.

Modelagem de câncer de mama através de uma injeção intraductal de CRE-expressando Adenovirus na glândula mamária do mouse

Modelos de xenoenxerto derivados da paciente (PDX) e modelos transplantáveis de camundongos geneticamente modificados recapitulam fielmente a doença humana e são modelos preferidos para pesquisas básicas e translacionais sobre câncer de mama. Aqui, um método é descrito para transplantar ortotopicamente fragmentos de tumor de mama na almofada de gordura mamária para estudar biologia tumoral e avaliar a resposta medicamentosa.

Transplante Ortotópico de Tumores mamários como Modelos Pré-Clínicos para o Câncer de Mama

Este protocolo descreve uma nova janela de imagem mamária com uma tampa substituível (R.MIW). A microscopia intravital após a implantação do R.MIW permite imagens longitudinais e de vários dias da glândula mamária saudável e doente com resolução celular durante os diferentes estágios de desenvolvimento.

Microscopia intravital longitudinal usando uma janela de imagem mamária com tampa substituível

O presente protocolo descreve uma técnica fácil para a imagem intravital da glândula mamária de camundongos lactantes por microscopia confocal e multifotônica de varredura a laser.

Microscopia Subcelular Intravital da Glândula Mamária

O presente protocolo descreve a injeção intraductal de vetores virais via teto para entregar genes de interesse nas células epiteliais mamárias.

In vivo Entrega de Genes em Células Epiteliais Mamárias de Camundongos Através de Injeção Intraductal Mamária

Mount Sinai Hospital.  Este protocolo descreve uma abordagem escalável de triagem intraductal CRISPR, permitindo estudos paralelos in vivo de eliminação e ativação genética na glândula mamária do camundongo.

Triagem In Vivo Paralela da Eliminação e Ativação Gênica na Glândula Mamária do Camundongo

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