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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>90000-786</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Alcohol burner flame</td><td>Wards</td><td>470346-104</td><td>Para esterilização de alça de inoculação</td></tr><tr><td>Ammonium iron sulfate hexahydrate</td><td>Supelco</td><td>FX0245-1</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Ammonium nitrate (NH4NO3)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT134170-250G</td><td>Para Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>VWR International</td><td>76683-456</td><td>Para esterilização de vidraria e meio</td></tr><tr><td>Biological Safety Cabinet</td><td>ThermoFischer Scientific&nbsp;</td><td>1323TS</td><td>Para reduzir a contaminação das placas e do laboratório.</td></tr><tr><td>Biotin</td><td>VWR</td><td>97061-444</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Boric acid (H3BO3)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>100503-696</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Calcium chloride (CaCl2)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT1311-1</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2&middot;2H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>223506-25G</td><td>Para Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Citric acid monohydrate (C6H8O7&middot;H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1002440500</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Copper sulfate pentahydrate (CuSO4&middot;5H2O H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT121245-1KG</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Decon Labs</td><td>71001-754</td><td>Usado para remover conídios da superfície da placa e esterilizar alça de inoculação</td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ</td><td>National Institutes of Health (NIH)</td><td>N/A</td><td>Para análise de imagens/contagem</td></tr><tr><td>Gloves</td><td>SW Safety Solutions</td><td>76382-944</td><td>Para segurança</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad Software, LLC</td><td>N/A</td><td>Para realizar testes estatísticos e criar figuras</td></tr><tr><td>Growth Chamber</td><td>Caron Products &amp; Services</td><td>6320 &amp; 6340 Series</td><td>Programável para ciclos de fotoperíodo</td></tr><tr><td>HOBO Data Logger</td><td>Onset Computer Corporation</td><td>MX2202</td><td>Para registro de intensidade de luz e temperatura</td></tr><tr><td>Inoculation loop</td><td>VWR International</td><td>10806-354</td><td>Para transferência de material fúngico para placas de petri</td></tr><tr><td>Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4&middot;7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT145380-1KG</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Manganese sulfate monohydrate (MnSO4&middot;H2O H2O)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1059410250</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Microscope (Leica S6 D Greenough Stereo Microscope)</td><td>Leica Microsystems</td><td>10446297</td><td>Para imagens</td></tr><tr><td>Neurospora crassa FGSC 2489</td><td>Fungal Genetics Stock Center</td><td>74-OR23-1VA, JCM19069</td><td>Cepa fúngica</td></tr><tr><td>Paper Towels</td><td>Kimberly-Clark Professional, Scott and Kleenex</td><td>6666114</td><td>Para derramar meio</td></tr><tr><td>Permanent Marker</td><td>Sharpie</td><td>30072</td><td>Para rotulagem de placas</td></tr><tr><td>Petri Dishes</td><td>VWR International</td><td>25384-164</td><td>Para placas de Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Pipettes</td><td>VWR International</td><td>75816-090</td><td>Para derramar meio</td></tr><tr><td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT225070-500G</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Potassium nitrate (KNO3)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221295-100G</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Small Disposable Glass Test Tubes</td><td>VWR International</td><td>470211-698</td><td>Para crescimento inicial de cepas fúngicas</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>VWR International</td><td>BDH9286-500G</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Sodium citrate dihydrate (Na3C6H5O7&middot;2H2O)</td><td>VWR</td><td>97061-008</td><td>Para Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (NaOH)</td><td>AVANTOR PERFORMANCE MATERIAL LLC</td><td>JT5635-2</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético</td></tr><tr><td>Sodium molybdate dihydrate (Na2MoO4&middot;2H2O)</td><td>Supelco</td><td>1.06524.1000</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>VWR International</td><td>BDH9308-500G</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr><tr><td>Zinc sulfate heptahydrate (ZnSO4&middot;7H2O)</td><td>BeanTown Chemical</td><td>BT122545-500G</td><td>Para Meio de Cruzamento Sintético/Meio Mínimo</td></tr></tbody></table>

ensaio de imagem baseado em placas para quantificar respostas fotoperiódicas em neurospora crassa usando desenvolvimento de protoperitecias

Plate-Based Imaging Assay for Quantifying Photoperiodic Responses in Neurospora crassa Using Protoperithecia Development

Após a inoculação com a cepa selvagem, os conídios cobriram a superfície do SC em 36–48 horas. Após 7 dias de exposição ao fotoperíodo, uma camada densa de conídeos se formou e foi removida com um papel toalha umedecido saturado com 70% de etanol (Figura 1). Esse passo expôs os protoperitécios subjacentes sem perturbar sua estrutura. Na microscopia, os protoperitecios apareciam como estruturas circulares escuras distribuídas pela superfície da placa. Essas estruturas apresentavam uma morfolo...

Ensaio de Imagem Baseado em Placas para Quantificar Respostas Fotoperiódicas em Neurospora crassa Usando Desenvolvimento de Protoperitecias

Neurospora crassa is a well-established model organism for studying biological timing and light-regulated development. The Protoperithecia Assay (PPA) is ...

plate-based-imaging-assay-for-quantifying-photoperiodic-responses

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Aqui nós apresentamos um romance Ca 2+ -Imaging abordagem usando um repórter bioluminescente. Esta abordagem utiliza um GFP-aequorina constructo fundido que se liga a Ca 2+ e emite luz, eliminando a necessidade de excitação da luz. Significativamente este método permite imagem longa e contínua, o acesso a estruturas cerebrais profundas e alta resolução temporal.

In Vivo funcional do cérebro Imagiologia Abordagem Baseada em cálcio Bioluminescent Indicador GFP-aequorina

O relógio circadiano regula a cerca de um terço do transcriptoma de Arabidopsis, mas a percentagem de genes que se alimentam de volta para cronometragem permanece desconhecida. Aqui nós visualizamos um método para avaliar rapidamente os fenótipos circadianos em qualquer linha mutante de Arabidopsis utilizando imagens luminescentes de um repórter circadiano transitoriamente expressa em protoplastos.

Rápida análise de fenótipos circadianos em Arabidopsis Protoplastos transfectadas com um relógio Reporter luminescentes

O uso de um chip adaptado"olfativo" para a imagem de cálcio eficiente de machos de c. elegans é descrito aqui. Estudos de exposição masculino glicerol e um pheromone também são mostrados.

Usando um Chip olfativo Microfluidic adaptado para a imagem da atividade Neuronal em resposta aos Pheromones em neurônios de cabeça masculino C. Elegans

Aqui, nós apresentamos uma aproximação combinatória usando a microscopia de alta resolução, as ferramentas computacionais, e a rotulagem da único-pilha em embriões vivos de C. elegans para compreender a única dinâmica da pilha durante o neurodevelopment.

Microscopia de folha de luz isotrópica e análise de linhagem de células automatizadas para catalogar Caenorhabditis elegans Embryogenesis com resolução subcelular

Corantes fluorescentes vitais são ferramentas essenciais para análises de imagens de células vivas na biologia moderna das células fúngicas. Este artigo detalha a aplicação de corantes fluorescentes estabelecidos e menos conhecidos para rastrear a dinâmica da membrana plasmática, endo-/exocitose e mordogênese da parede celular em fungos filamentous.

Aplicação de corantes fluorescentes seletivos da membrana e da parede de pilha para a imagem latente da Viver-pilha de fungos de Filamentous

Aqui, introduzimos e descrevemos um método nãoradioativo e não invasivo para avaliar a síntese de proteína de novo in vivo, utilizando o nematode Caenorhabditis elegans e recuperação de fluorescência após fotobleaching (FRAP). Este método pode ser combinado com telas genéticas e/ou farmacológicas para identificar novos moduladores da síntese proteica.

Avaliação das taxas de síntese de proteínas de novo em Caenorhabditis elegans

Foi apresentado um protocolo para a imagem dos microtúbulos dinâmicos in vivo usando proteína de ligação final rotulada fluorescente. Descrevemos os métodos para rotular, imagem e analisar os microtúbulos dinâmicos no neurônio de microtúbulo lateral posterior (PLM) de C. elegans.

In vivo Avaliação da Dinâmica e Orientação em Caenorhabditis elegans Neurônios

Apresentamos um protocolo de imagem ao vivo sem rótulos usando técnicas de microscopia de luz transmitida para capturar imagens, analisar e quantificar a cinética de crescimento do fungo filamentoso A. nidulans em culturas submersas e mídia sólida. Este protocolo pode ser usado em conjunto com microscopia de fluorescência.

Análise quantitativa da taxa de crescimento de nidulans aspergillus usando microscopia ao vivo e software de código aberto

Apresentamos um protocolo para caracterizar eletrofisilogicamente fotopigmentações bie estáveis: (i) explorando os deslocamentos de carga dentro das moléculas de fotopigment após a absorção de fótons e sua enorme quantidade nos fotorreceptores, e (ii) explorando as diferenças de absorção-espectros dos estados de fotopigmento de rhodopsina e metarhodopsina. Esses protocolos são úteis para rastrear mutações que afetam sistemas de fotopigment biestabilidade.

Métodos Eletrofisiológicos para Medir Níveis de Fotopigment em Fotorreceptores de Drosophila

A maioria dos organismos fotoautotróficos da natação apresentam alterações comportamentais induzidas por foto (comportamento fotográfico). O presente protocolo observa o referido comportamento fotográfico no organismo modelo Chlamydomonas reinhardtii.

Observação do Comportamento Fotográfico em Clamídomonas reinhardtii

Aqui, descrevemos uma ferramenta avançada projetada para o monitoramento da biossíntese de clorofila durante os estágios iniciais da desetiolação de plântulas de Arabidopsis . A nova metodologia fornece imagens não invasivas de fluorescência da clorofila em tempo real com alta resolução espacial e temporal.

Ensaio Não Invasivo para Determinação da Cinética de Biossíntese de Clorofila durante os Estágios Iniciais da Desetiolação de Arabidopsis

The State University of New Jersey.  O Ensaio de Protoperitecias quantifica respostas fotoperiódicas em Neurospora crassa medindo a formação de protoperitécios sob ciclos claro-escuro definidos. Esse método baseado em placas oferece uma abordagem simples e escalável para comparar respostas de desenvolvimento dependentes do fotoperíodo entre condições experimentais.

Ensaio de Imagem Baseado em Placas para Quantificar Respostas Fotoperiódicas em Neurospora crassa Usando Desenvolvimento de Protoperitecias

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