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<ol><li>Chen, S., Zhu, H., Jounaidi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+snapshots+of+natural+killer+cells+functions%2C+signaling%2C+molecular+mechanisms+and+clinical+utilization%5BTitle%5D)+AND+%22Signal+Transduct+Target+Ther%22%5BJournal%5D)">Comprehensive snapshots of natural killer cells functions, signaling, molecular mechanisms and clinical utilization.</a> Signal Transduct Target Ther. , (2024).</li>
<li>Liesche, C., Sauer, P., Prager, I., Urlaub, D., Claus, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-fluorescent+protein+reporters+allow+parallel+quantification+of+natural+killer+cell-mediated+granzyme+and+caspase+activities+in+single+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Single-fluorescent protein reporters allow parallel quantification of natural killer cell-mediated granzyme and caspase activities in single target cells.</a> Front Immunol. , (2018).</li>
<li>Hartmann, J. A., Cardoso, M. R., Talarico, M. C. R., Kenney, D. J., Leone, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evasion+of+NKG2D-mediated+cytotoxic+immunity+by+sarbecoviruses%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Evasion of NKG2D-mediated cytotoxic immunity by sarbecoviruses.</a> Cell. , (2024).</li>
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<li>Rezvani, K., Rouce, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+application+of+natural+killer+cell+immunotherapy+for+the+treatment+of+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">The application of natural killer cell immunotherapy for the treatment of cancer.</a> Front Immunol. , (2015).</li>
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<li>Liu, E., Tong, Y., Dotti, G., Shaim, H., Savoldo, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cord+blood+NK+cells+engineered+to+express+IL-15+and+a+CD19-targeted+CAR+show+long-term+persistence+and+potent+antitumor+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Leukemia%22%5BJournal%5D)">Cord blood NK cells engineered to express IL-15 and a CD19-targeted CAR show long-term persistence and potent antitumor activity.</a> Leukemia. , (2018).</li>
<li>Mensali, N., Dillard, P., Hebeisen, M., Lorenz, S., Theodossiou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+specifically+TCR-dressed+to+kill+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">NK cells specifically TCR-dressed to kill cancer cells.</a> EBioMedicine. , (2019).</li>
<li>Nowak, J., Bentele, M., Kutle, I., Zimmermann, K., Lühmann, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CAR-NK+cells+targeting+HER1+%28EGFR%29+show+efficient+anti-tumor+activity+against+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma+%28HNSCC%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">CAR-NK cells targeting HER1 (EGFR) show efficient anti-tumor activity against head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC).</a> Cancers (Basel). , (2023).</li>
<li>Granger, J. E., Appledorn, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetic+measurement+of+apoptosis+and+immune+cell+killing+using+live-cell+imaging+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Kinetic measurement of apoptosis and immune cell killing using live-cell imaging and analysis.</a> Methods Mol Biol. , (2021).</li>
<li>Duffy, J., Rider, A., Loneman, D., Thakkar, D., Mullen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALK%2B+LBCL+and+PBL+share+a+similar+plasmablastic+transcriptional+identity+but+show+divergent+signaling+dependencies+and+therapeutic+vulnerabilities%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">ALK+ LBCL and PBL share a similar plasmablastic transcriptional identity but show divergent signaling dependencies and therapeutic vulnerabilities.</a> Blood. , (2025).</li>
<li>Kandarian, F., Sunga, G. M., Arango-Saenz, D., Rossetti, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+flow+cytometry-based+cytotoxicity+assay+for+the+assessment+of+human+NK+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A flow cytometry-based cytotoxicity assay for the assessment of human NK cell activity.</a> J Vis Exp. (126), e56191(2017).</li>
<li>Klingemann, H., Boissel, L., Toneguzzo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Natural+killer+cells+for+immunotherapy+-+advantages+of+the+NK-92+cell+line+over+blood+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Natural killer cells for immunotherapy - advantages of the NK-92 cell line over blood NK cells.</a> Front Immunol. , (2016).</li>
<li>Alter, G., Malenfant, J. M., Altfeld, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD107a+as+a+functional+marker+for+the+identification+of+natural+killer+cell+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">CD107a as a functional marker for the identification of natural killer cell activity.</a> J Immunol Methods. , (2004).</li>
<li>Valiante, N. M., Uhrberg, M., Shilling, H. G., Lienert-Weidenbach, K., Arnett, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functionally+and+structurally+distinct+NK+cell+receptor+repertoires+in+the+peripheral+blood+of+two+human+donors%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Functionally and structurally distinct NK cell receptor repertoires in the peripheral blood of two human donors.</a> Immunity. , (1997).</li>
<li>Wang, Y., Zhang, Y., Hughes, T., Zhang, J., Caligiuri, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fratricide+of+NK+cells+in+daratumumab+therapy+for+multiple+myeloma+overcome+by+ex+vivo-expanded+autologous+NK+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Fratricide of NK cells in daratumumab therapy for multiple myeloma overcome by ex vivo-expanded autologous NK cells.</a> Clin Cancer Res. , (2018).</li>
<li>Cichocki, F., Bjordahl, R., Gaidarova, S., Mahmood, S., Abujarour, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iPSC-derived+NK+cells+maintain+high+cytotoxicity+and+enhance+in+vivo+tumor+control+in+concert+with+T+cells+and+anti-PD-1+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">iPSC-derived NK cells maintain high cytotoxicity and enhance in vivo tumor control in concert with T cells and anti-PD-1 therapy.</a> Sci Transl Med. , (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Advanced RPMI-1640 medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12633020</td><td>Meio basal para cultura de células NK-92 e células NK humanas primárias (ver protocolo para formulação completa)</td></tr><tr><td>Anti-human CD107a antibody, PE-Cy7 conjugated (clone H4A3)</td><td>BioLegend</td><td>328618</td><td>Marcador de degranulação para citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Anti-human CD16 antibody, BV785 conjugated (clone 3G8)</td><td>BioLegend</td><td>302046</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Anti-human CD56 antibody, BV421 conjugated (clone HCD56)</td><td>BioLegend</td><td>318328</td><td>Citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Centrífuga de bancada com rotor de balde oscilante compatível com tubos de 15 mL e placas de 96 poços (Centrífuga Eppendorf 5810R)</td><td>Eppendorf</td><td>5811000015</td><td>Usado para peletagem de células e centrifugação de placas (100&ndash;300 &times; g)</td></tr><tr><td>Carboxiflurescein succinimidyl ester (CFSE)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>C34554</td><td>Corante de proliferação celular para marcação de células-alvo</td></tr><tr><td>Citômetro de fluxo espectral Cytek Aurora (ou equivalente)</td><td>Cytek Biosciences</td><td>N7-00003</td><td>Usado para aquisição e análise por citometria de fluxo</td></tr><tr><td>DAPI (4&prime;,6-diamidino-2-fenilindo)</td><td>BioLegend</td><td>422801</td><td>Corante nuclear para discriminação de células vivas/mortas</td></tr><tr><td>Placa de poço profundo de 96 poços</td><td>USA Scientific</td><td>1896-2110</td><td>Usado para preparação de anticorpos</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP231-100</td><td>Reagente de criopreservação</td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Avantor</td><td>76419-584</td><td>Suplemento de meio basal; usado no tampão FACS (2% FBS)</td></tr><tr><td>Water Bath de propósito geral, 10 L (37 &deg;C)</td><td>PolyScience</td><td>WBE10</td><td>Para descongelamento de células</td></tr><tr><td>GlutaMAX (suplemento de L-alanil-L-glutamina)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td>Fonte estável de glutamina</td></tr><tr><td>Soro humano AB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H4522-100ML</td><td>Suplemento para meio de cultura de células NK humanas primárias</td></tr><tr><td>Sistema de imagem de células vivas IncuCyte SX5</td><td>Sartorius</td><td>4816</td><td>Imagem de células vivas em tempo real e análise célula por célula</td></tr><tr><td>Contador de células de fluorescência dupla LUNA-FL (ou equivalente)</td><td>Logos Biosystems</td><td>L20001</td><td>Contagem automatizada de células</td></tr><tr><td>Parafilm M (rolo de 4 pol x 250 pés)</td><td>Genesee</td><td>16-101</td><td>Selagem e armazenamento de placas</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS), estéril (pH 7,2&ndash;7,4)</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td>Usado para lavagens e preparação de tampão FACS</td></tr><tr><td>Poly-D-lysine (0,1 mg/mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A3890401</td><td>Reagente de revestimento de placas</td></tr><tr><td>Primocin</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pm-2</td><td>Antibiótico</td></tr><tr><td>Interleucina-2 recombinante humana (IL-2)</td><td>R&amp;D Systems</td><td>202-IL-500</td><td>Citokine</td></tr><tr><td>Kit de enriquecimento de células NK humanas RosetteSep</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>15065</td><td>Cocktail de enriquecimento de células NK humanas</td></tr><tr><td>SYTOX Orange dead cell stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S34861</td><td>Corante de viabilidade para imagem de células vivas</td></tr><tr><td>Trypan Blue 0,4%</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td>Corante de viabilidade para contagem de células</td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme (1X), sem fenol vermelho</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12604039</td><td>Para dissociação de células aderentes</td></tr><tr><td>UltraPure EDTA (0,5 M, pH 8,0)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15575020</td><td>Usado para preparação de tampão FACS</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de fundo cônico de 15 mL</td><td>Corning</td><td>352097</td><td>Estéreis</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecido de 24 poços (tratada com cultura de tecido)</td><td>Corning</td><td>3524</td><td>Usada para recuperação de células NK</td></tr><tr><td>Placa de 96 poços de fundo redondo transparente (tratada com cultura de tecido)</td><td>Corning</td><td>3799</td><td>Usada para ensaios de co-cultura e citometria de fluxo</td></tr><tr><td>Placa de poliestireno preto de fundo plano transparente de 96 poços (tratada com cultura de tecido)</td><td>Corning</td><td>3603</td><td>Compatível com sistemas de imagem de células vivas</td></tr></tbody></table>

quantificação da citotoxicidade de células nk potenciada por receptores de antígeno quiméricos e anticorpos terapêuticos usando imagem de células vivas e citometria de fluxo

Quantifying NK-Cell Cytotoxicity Potentiated by Chimeric Antigen Receptors and Therapeutic Antibodies Using Live-Cell Imaging and Flow Cytometry

Quantificação da citotoxicidade de células NK potenciada por receptores de antígeno quiméricos e anticorpos terapêuticos usando imagem de células vivas e citometria de fluxo

Natural killer (NK) cells are innate lymphocytes that play a critical role in protective immunity against diverse intracellular pathogens and cancers. ...

Nosso laboratório estuda o papel das células natural killer na saúde e na doença, com o objetivo de aproveitar seu potencial para melhorar tratamentos contra cânceres sólidos e sanguíneos. Os ensaios existentes de citotoxicidade de células NK carecem de padronização entre plataformas e configurações. Este protocolo fornece métodos reprodutíveis de imagem de células vivas e citometria de fluxo para avaliação precisa da citotoxicidade.Para começar, prepare 10 mililitros de SYTOX Orange 2x diluindo a solução estoque de SYTOX Orange em meio de cultura NK-92 em um tubo cônico de centrífuga de 15 mililitros. Conte as células-alvo utilizando um contador Luna após a mistura com Azul de Tripano ou use qualquer método validado de contagem celular baseado na exclusão de corante. Transfira a quantidade necessária de células-alvo para um tubo cônico de centrífuga de 15 mililitros.Centrifugue o tubo a 300G durante cinco minutos à temperatura ambiente e descarte o sobrenadante. Em seguida, re-suspenda as células-alvo até uma concentração final de 250.000 células por mililitro em meio 2X SYTOX Orange. Para preparar a célula efetora, avalie a viabilidade e a concentração das células NK-92 e prossiga apenas se a viabilidade for superior a 80%, pois viabilidades mais baixas podem afetar o desempenho do ensaio.Conte e transfira o número necessário de células NK-92 para tubos cónicos individuais de 15 mililitros. Após a centrifugação, re-suspenda as células até uma concentração final de 500.000 células por mililitro. Prepare diluições das células efetoras adicionando 240 microlitros de células efetoras em poços de uma placa de fundo redondo de 96 poços para a proporção de duas para uma de efetoras para alvo, e adicione 120 microlitros de meio nos poços restantes.Realize diluições seriadas em duplicidade de dois para um até 0,25 para um nas proporções de efetores para alvos, misturando completamente por pipetagem pelo menos cinco vezes e trocando as ponteiras entre as transferências. Em seguida, para montar a co-cultura, obtenha a placa de 96 poços com fundo plano revestida com polilisina. Imediatamente antes da transferência, re-suspenda completamente as células alvo e efetoras sem criar bolhas, e então adicione 100 microlitros de cada suspensão celular nos poços apropriados.Em seguida, adicione 200 microlitros de PBS aos poços não utilizados ao redor. Centrifugue a placa a 100G durante dois minutos à temperatura ambiente. Coloque a placa no sistema de imagem de células vivas.Adquira imagens a cada uma hora durante 24 horas a 37 graus Celsius com 5% de dióxido de carbono. Verifique a qualidade das imagens após a primeira varredura e ajuste as configurações de aquisição, se necessário. Ajuste a separação espectral para corrigir a sobreposição do SYTOX Orange no canal verde.Verifique se as células mortas positivas de cor laranja não estão sendo identificadas incorretamente como células positivas verdes. Para configurar a análise individual de células não aderentes, defina o diâmetro esperado do objeto como 15 micrômetros, compatível com o diâmetro celular aproximado. Defina a sensibilidade de limiar e a sensibilidade de textura como cinco e a sensibilidade de borda como 10 para facilitar a separação de agregados celulares.Defina o intervalo do filtro de área do objeto aceito entre 50 e 2.000 micrômetros quadrados para excluir detritos e objetos grandes. Defina o valor máximo de excentricidade como 0,95 para excluir objetos não celulares. Obtenha células NK humanas primárias cultivadas por 16 a 24 horas.Transfira 500.000 células-alvo para um tubo cônico de centrífuga de 15 mililitros. Lave as células uma vez com 10 mililitros de PBS. Centrifugue as células a 300G durante cinco minutos à temperatura ambiente.Em seguida, remova o sobrenadante. Prepare uma solução trabalho de 0,5 micromolar de éster succinimidila de carboxifluoresceína ou CFSC em PBS, diluindo um microlitro de solução estoque de CFSE de cinco milimolar em 10 mililitros de PBS. Re-suspenda o pellet obtido em aproximadamente um milhão de células por mililitro na solução de CFSE.Incube as células por 15 minutos a 37 graus Celsius, envolvidas em folha de alumínio para proteger da luz. Em seguida, interrompa a reação adicionando cinco a dez volumes de meio de cultura e incube por cinco minutos a 37 graus Celsius. Após a centrifugação das células, re-suspenda o pellet celular a 250.000 células por mililitro, de modo que 100 microlitros contenham 25.000 células.Adicione 100 microlitros por poço de células-alvo aos poços designados de uma placa de 96 poços com fundo redondo utilizando uma pipeta multicanal. Plaque cada condição em triplicata. Em seguida, prepare 200 microlitros de solução de anticorpo 4X em meio de cultura de células NK para cada anticorpo em teste e seu controle de isotipo correspondente.Transfira as soluções de anticorpo para uma placa de poços profundos. Adicione 50 microlitros de solução de anticorpo a cada poço contendo as células-alvo e misture bem pipetando para cima e para baixo pelo menos cinco vezes. Adicione 50 microlitros de meio de cultura de células NK por poço aos poços de controle sem anticorpo e misture bem pipetando.Incube a placa por 25 a 30 minutos em condições padrão de incubação. Conte e obtenha 200.000 células NK e prossiga apenas se a viabilidade for maior ou igual a 75%. Re-suspenda as células em 250.000 células por mililitro em 800 microlitros de meio de cultura de células NK humanas primárias. Adicione 50 microlitros por poço de células NK aos poços correspondentes e misture bem pipetando para cima e para baixo pelo menos cinco vezes.Em seguida, pipete 50 microlitros por poço de meio de cultura nos poços controle e misture completamente. Inspecione cuidadosamente a placa de fundo redondo de 96 poços para confirmar que todos os poços contenham 200 microlitros com níveis uniformes de menisco e sem bolhas. Centrifugue a placa por dois minutos a 100G e, em seguida, incube-a por 16 a 18 horas sob condições padrão de incubação.Centrifugue a placa por cinco minutos a 300G e descarte o sobrenadante. Lave todas as poças com 200 microlitros por poça de tampão para triagem de células por ativação de fluorescência ou tampão FACS. Prepare uma mistura-mestra de anticorpos de superfície no tampão FACS conforme apresentado aqui.Re-suspenda as células em 50 microlitros por poço da mistura-mestra de anticorpos e misture bem pipetando para cima e para baixo pelo menos cinco vezes. Incube a placa por 15 minutos a quatro graus Celsius, envolta em folha de alumínio para proteger da luz. Adicione 150 microlitros por poço de tampão FACS.Após a centrifugação, re-suspenda as células em 100 microlitros por poço de DAPI a cinco micromolares em tampão FACS. Prossiga imediatamente para a aquisição em citometria de fluxo sem incubação prévia à aquisição. Realize a citometria de fluxo utilizando o instrumento Cytek Aurora e registre os canais de fluorescência para CFSE, BV421, BV785, PE-Cy7, DAPI e quaisquer fluoróforos adicionais.Durante a co-cultura, células efetoras, células-alvo vivas e células mortas foram visualizadas utilizando microscopia de células vivas em tempo real. As células NK-92 com CAR2 e CAR3 exibiram cinética de morte mais rápida do que as células NK-92 com CAR1, particularmente nos pontos iniciais de tempo e em uma razão igual de efetoras para alvo. A morte das células-alvo aumentou com razões maiores de efetoras para alvo, incluindo as células NK-92 controle, que demonstraram citotoxicidade natural.Células NK-92 CAR2 e CAR3 demonstraram maior potência em proporções mais baixas de efetoras para alvo em pontos temporais posteriores. Embora potência aprimorada em proporções intermediárias de efetoras para alvo tenha sido observada em pontos temporais iniciais. Três parâmetros, KR50, KT50 e IKI-50, foram definidos para quantificar a potência das células CAR-NK-92, a cinética de morte e o desempenho citotóxico geral entre populações efetoras.A adição de daratumumabe isoladamente não reduziu a sobrevivência das células-alvo, confirmando que o anticorpo não teve efeito direto sobre a viabilidade das células-alvo na ausência de células efetoras. A co-cultura com células NK isoladamente reduziu a sobrevivência das células-alvo a aproximadamente 70%, indicando citotoxicidade natural de base. A adição de daratumumabe reduziu ainda mais a sobrevivência celular para aproximadamente 37%, consistente com citotoxicidade mediada por anticorpos potencializada.Em contraste, a condição controle de isotipo apresentou aproximadamente 62% de sobrevivência, comparável à condição de apenas NK. A desgranulação de células NK foi mais baixa na co-cultura de células NK com células-alvo sem anticorpo e mais alta na condição tratada com daratumumabe, em aproximadamente 31%, enquanto o controle de isotipo mostrou desgranulação intermediária em aproximadamente 19%. Este protocolo permite aos pesquisadores quantificar a citotoxicidade natural das células NK, avaliar o potencial de eliminação tumoral de projetos de CAR-NK e comparar a eficácia da ADCD de anticorpos monoclonais. Uma consideração fundamental ao realizar este protocolo é manter uma contagem precisa e consistente de células, pipetagem e semeadura de células NK e células-alvo, a fim de garantir resultados confiáveis e interpretáveis.Estudos futuros podem aproveitar esses protocolos para explorar a evasão imunológica por células NK, comparar a suscetibilidade tumoral e avaliar novas imunoterapias baseadas em células NK em diferentes tipos de câncer.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra a atividade lítica das células natural killer contra as células-alvo coradas com fluorescência. O método permite a medição da citotoxicidade induzida por células NK colorindo células mortas e usando um citômetro de fluxo para quantificar células-alvo vivas e mortas.

Preparação de amostra de ensaio de citotoxicidade mediada por células natural killer para análise de citometria de fluxo

Descrevemos uma única célula ensaio de elevado débito para medir a citotoxicidade de células T, quando incubado com as células-alvo tumorais. Este método emprega uma matriz elastomérica denso, de sub-nanolitro poços (~ 100000 poços matriz /) para confinar espacialmente as células T e as células alvo em proporções definidas e está acoplado a microscopia de fluorescência para monitorizar alvo efetuador conjugação e apoptose subsequente.

Quantitativo de alta capacidade ensaio de citotoxicidade de célula única para as células T.

Este protocolo descreve um ensaio de citotoxicidade sensível baseado em células. Ao enumerar a diminuição na frequência de células T CD4+ alvo vivas na presença de um número crescente de células T CD8+ efetoras, este ensaio permite a avaliação direta da atividade citolítica de células T CD8+ específicas do antígeno.

Baseada em células de Citometria de Fluxo Ensaio medir citotóxicos Atividade

Um método simples e de confiança é descrito aqui para analisar um conjunto de funções das células NK, tais como desgranulação, produção de citocina e quimiocina dentro de diferentes subconjuntos de células NK.

Ensaio de citometria de fluxo baseada para a monitorização das funções das células NK

Este trabalho descreve um fluxo de trabalho avançado para a determinação precisa e rápida da contagem de células NK (Natural Killer) e citotoxicidade de células NK em amostras de sangue humano.

Citometria de fluxo e assassinas naturais celular Lytic Actividade em sangue total humano

Um método baseado em citometria de fluxo para determinar quantitativamente a atividade citotóxica de células humanas de assassino natural é mostrado aqui.

Um ensaio de citotoxicidade baseados em citometria de fluxo para a avaliação da atividade das células NK humana

Descrevemos um sistema quantitativo de ensaio de citolíse in vitro em tempo real para avaliar a potência das células T do receptor de antígeno quimérico que visam células tumorais líquidas e sólidas. Este protocolo pode ser estendido para avaliar outras células efetores imunes, bem como tratamentos combinados.

Um ensaio de potência em tempo real para células T do receptor de antígeno quimérico visando células cancerosas sólidas e hematológicas

Um protocolo para avaliar a morte quantitativa de células tumorais por células Jurkat expressando receptor de antígeno quimérico (CAR) visando antígeno único tumoral. Este protocolo pode ser usado como uma plataforma de triagem para otimização rápida de construções de dobradiças CAR antes da confirmação em células T derivadas do sangue periférico.

Avaliação Rápida da Citotoxicidade In Vitro do Receptor de Antígeno Quimérico Jurkat Expressando Usando Imagem Fluorescente

Aqui, apresentamos um método para identificar compostos que modulam o mecanismo ADCC, um importante mecanismo de morte de células cancerígenas de anticorpos antitumorais. O efeito citotóxico das células NK é medido em esferoides de células de câncer de mama na presença de trastuzumabe. A análise de imagens identifica células assassinas e alvo vivas e mortas em esferoides.

Quantificação da Citotoxicidade Celular Dependente de Anticorpos em Modelo Esferoide Tumoral: Aplicação para Descoberta de Fármacos

Aqui, descrevemos um método para criar gotículas de emulsão dupla encapsulando uma célula T e uma célula-alvo cancerígena para examinar a morte celular no nível de uma única célula. Este método permite a quantificação dupla de moléculas citotóxicas e apoptose de células-alvo em uma grande população de células T.

Ensaio de citotoxicidade baseado em gotículas para avaliar células T receptoras de antígeno quimérico no nível de célula única

Ragon Institute of Mass General, MIT, and Harvard.  Este protocolo oferece um fluxo de trabalho padronizado in vitro. para medição consistente da citotoxicidade natural, mediada pelo receptor de antígeno quimérico e dependente de anticorpos de células humanas natural killer, utilizando imagens de células vivas e citometria de fluxo.

Quantificação da citotoxicidade de células NK potenciada por receptores de antígeno quiméricos e anticorpos terapêuticos usando imagem de células vivas e citometria de fluxo

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