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	<li>Gao H, Gao S, Kan G, Valentovich LN, An Y. Research progress of base editing and prime editing tools based on the CRISPR/Cas system. Mol Ther Nucleic Acids. 2025;36.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>1M Tris-HCl, pH 8.0</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15568025</td><td></td></tr><tr><td>Agarose&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>R0491&nbsp;</td><td>Agarose UltraPure 16500500 ThermoFisher 500g</td></tr><tr><td>AMPure XP SPRI Beads&nbsp;</td><td>Beckman Coulter&nbsp;</td><td>B23317&nbsp;</td><td>A63880, AMPure XP Beads for DNA Cleanup, 5 mL, Beckman Coulter</td></tr><tr><td>ATP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CEPT Cocktail&nbsp;</td><td>Bio-Techne / Tocris&nbsp;</td><td>7200&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>CleanCap AG Reagent&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-7113&nbsp;</td><td>CleanCap AG 3&prime; OMe CleanScript IVT Kit, 125 x 20 &micro;L rxns,&nbsp;</td></tr><tr><td>CTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Custom DNA Primers&nbsp;</td><td>Integrated DNA Technologies&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DNA Loading Dye&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>B7024&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>DPBS (Dulbecco&rsquo;s Phosphate Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>14190-144&nbsp;</td><td>D8537-100ML</td></tr><tr><td>Dulbecco&rsquo;s Modified Eagle Medium (DMEM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>11965-092&nbsp;</td><td>DMEM High Glucose [4,500 mg/L] with [4.0 mM] L-Glutamine and [110 mg/L] Sodium Pyruvate, 500 mL</td></tr><tr><td>Gel Extraction Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28704&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>GTP (100 mM)&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>N0450&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Illumina Indexing Primers&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>FC-131-2001&nbsp;</td><td>10uM stocks</td></tr><tr><td>Illumina MiSeq Sequencer&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>SY-410-1003&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lithium Chloride RNA Precipitation Solution&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9480&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Lonza 4D Nucleofector System&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>AAF-1002X&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ssRNA Ladder NEB</td><td>NEB</td><td>N0362S</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>MiSeq Reagent Kit v3 (300 cycles)&nbsp;</td><td>Illumina&nbsp;</td><td>MS-102-3002&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>N1-Methyl-Pseudouridine-5&prime;-Triphosphate&nbsp;</td><td>TriLink Biotechnologies&nbsp;</td><td>N-1081&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NEBNext Ultra II Q5 Master Mix&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0544&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Nuclease-Free Water&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9937&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC Slide A8&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>941-0008&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>NucleoCounter NC-3000&nbsp;</td><td>ChemoMetec&nbsp;</td><td>NC-3000&nbsp;</td><td>10ul of cell solution and 0.4167 &mu;L of DAPI solution&nbsp;</td></tr><tr><td>Solution 15, Hoechst 33342, 1 mL 910-3015 Chemometec</td><td>Chemometec</td><td>910-3013&nbsp;</td><td>500 &mu;g/ml ~ 0.9 mM ~ 0.05%</td></tr><tr><td>Nucleocuvette Strips&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>P3 Primary Cell Nucleofector Solution&nbsp;</td><td>Lonza&nbsp;</td><td>V4XP-3032&nbsp;</td><td>1 x 0.675 mL P3 Primary Cell Nucleofector&reg; Solution</td></tr><tr><td>Phusion High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>F530L&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Proteinase K&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>EO0491&nbsp;</td><td>Quantity: 1mL, >600 U/mL (~20 mg/mL)</td></tr><tr><td>Q5 High-Fidelity DNA Polymerase&nbsp;</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>M0491&nbsp;</td><td>2,000 units/ml 100 units&nbsp;</td></tr><tr><td>QIAquick PCR Purification Kit&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>28104&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit dsDNA High Sensitivity Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q33230&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit RNA Broad Range Assay Kit&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>Q10211&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Qubit&trade; Assay Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>Q32856</td><td></td></tr><tr><td>RNA Gel Loading Dye (2x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>R0641</td><td>5ul/ reaction</td></tr><tr><td>RNA Purification Kit&nbsp;</td><td>Zymo Research&nbsp;</td><td>R1017&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>RNase Away&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>1236B62&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>SDS, 10% solution</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>15553027</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Gold Nucleic Acid Gel Stain</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S11494</td><td></td></tr><tr><td>SYBR Safe DNA Gel Stain&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>S33102&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Synthetic sgRNA / pegRNA&nbsp;</td><td>Synthego / IDT&nbsp;</td><td>Custom&nbsp;</td><td>2ug&nbsp;</td></tr><tr><td>HiScribe T7 High Yield RNA Synthesis Kit, 250 reactions</td><td>New England Biolabs&nbsp;</td><td>E2040L</td><td></td></tr><tr><td>TrypLE Express Enzyme&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12604013&nbsp;</td><td>100 mL</td></tr><tr><td>TE buffer (Tris-EDTA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>&nbsp;AM9849</td><td>TE, pH 8.0, RNase-free Thermo</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.25%)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>25200056&nbsp;</td><td>1X&nbsp;</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS), Premium, 500 mL</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5670701</td><td></td></tr><tr><td>mTSER PLUS&nbsp;</td><td>STEM cell Technologies</td><td># 100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin Mixture 10,000 ug/mL, 100 mL, 4-pack</td><td>Quality Biological</td><td>120-095-721&nbsp;</td><td></td></tr></tbody></table>

edição do genoma em células primárias de mamíferos por eletroporação do rna editor

Genome Editing in Primary Mammalian Cells via Electroporation of Editor RNA

Edição do Genoma em Células Primárias de Mamíferos por Eletroporação do RNA Editor

CRISPR editors including nucleases, base editors, and prime editors can efficiently correct disease-causing genetic variants or disrupt target genes. ...

genome-editing-primary-mammalian-cells-via-electroporation-editor

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Nucleases designers, tais como as nucleases de dedos de zinco (ZFNs) e activadores de transcrição, tal como nucleases efectoras (TALENS) pode ser utilizado para modificar o genoma de embriões préimplantação de ratinho por desencadear tanto a extremidade não homóloga de união (NHEJ) e recombinação homóloga (HR) vias. Estes avanços permitir a rápida geração de ratinhos com modificações genéticas precisas.

Rato Genoma Engenharia Usando Nucleases Designer

Utilizando um Cas9 preassembled ribonucleoprotein complexo (RNP) é um método poderoso para edição de genoma preciso e eficiente. Aqui, destacamos a sua utilidade em uma ampla variedade de células e organismos, incluindo células humanas primárias e os dois clássicos e emergentes organismos modelo.

Maior genoma edição com Cas9 Ribonucleoprotein em diversas células e organismos

CRISPR-Cas é uma tecnologia poderosa para projetar os genomas complexos de plantas e animais. Aqui, detalhamos um protocolo eficiente editar o genoma humano usando diferentes endonucleases de Cas. Destacamos importantes considerações e parâmetros de projeto para otimizar a eficiência de edição.

Edição do genoma em linhas de células de mamíferos usando CRISPR-Cas

É apresentado aqui um protocolo para a edição eficiente do gene de CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein-negociado em pilhas de mamíferos usando o electroporation do tubo.

CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteína-mediada por Gene preciso de edição por tubo Electroporation

Este protocolo descreve técnicas para isolar hepatócitos primários do fígado e eletroporar CRISPR-Cas9 como ribonucleoproteínas e mRNA para interromper um gene alvo terapêutico associado a uma doença metabólica herdada do fígado. Os métodos descritos resultam em alta viabilidade e altos níveis de modificação genética após a eletroporação.

Entrega mediada por eletroporação de cas9 ribonucleoproteínas e mRNA em hepatócitos de rato primário recém-isolados

Aqui, descrevemos uma técnica simples destinada à geração eficiente de camundongos geneticamente modificados chamada CRISPR RNP Electroporation of Zygotes (CRISPR-EZ). Este método fornece reagentes de edição por eletroporação em embriões a uma eficiência próxima de 100%. Este protocolo é eficaz para mutações pontuais, pequenas inserções genômicas e deleções em embriões de mamíferos.

Edição Eficiente do Genoma de Camundongos por Eletroporação CRISPR de Zigotos

Este protocolo descreve o procedimento de edição do genoma em macrófagos derivados da medula óssea de camundongos usando complexos ribonucleoprotéicos Cas9-sgRNA montados in vitro e liberados por eletroporação.

Ruptura Gênica de Alta Eficiência em Macrófagos Primários Derivados da Medula Óssea Usando Complexos Eletroporados Cas9-sgRNA

Este protocolo apresenta uma abordagem otimizada para a produção de modelos de ratos geneticamente modificados. O vírus adenoassociado (AAV) é usado para entregar um modelo de reparo de DNA, e a eletroporação é usada para entregar reagentes CRISPR-Cas9 para completar o processo de edição do genoma em embrião de 2 células.

CRISPR-Cas9 Edição Genômica de Embriões de Rato usando Vírus Adenoassociado (AAV) e Eletroporação de Embriões de 2 Células

O protocolo descreve métodos para edição de epigenoma baseada em Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) em linhagens de células humanas usando transfecção de DNA de plasmídeo e nucleofecção de mRNA.

Edição de Epigenoma CRISPR em Células Humanas usando Transfecção de DNA de Plasmídeo e Entrega de Nucleofecção de mRNA

A eficiência do método de Edição Aprimorada do Genoma via Entrega de Ácidos Nucléicos Ovidutais (I-GONAD) é comparável à microinjeção tradicional, que requer coleta de zigoto de fêmeas doadoras e transferência para fêmeas pseudo-grávidas. Este protocolo demonstra sua eficácia introduzindo mutações induzidas por CRISPR/Cas9 no locus ROSA26 no cromossomo 6.

Edição de genoma aprimorada por meio de técnica de eletroporação in vivo baseada em entrega de ácidos nucléicos ovidutais para geração de camundongos knockout

Johns Hopkins University School of Medicine.  A entrega de editores genômicos como RNAs é um meio particularmente potente de modificar os genomas das células primárias e linhagens celulares de mamíferos. O objetivo desse protocolo é entregar editores genômicos como mRNA em células e linhagens celulares primárias de mamíferos, seguido por sequenciamento e análise direcionados da Illumina para quantificar os resultados da edição.

Edição do Genoma em Células Primárias de Mamíferos por Eletroporação do RNA Editor

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