Name: Fenotipagem In Vivo da Neurodegeneração Dopaminérgica em Larvas de Peixe-Zebra Usando Análise Comportamental e Imagem de Alto Conteúdo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-16T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Aprenda a fenotipagem de alto rendimento em larvas de peixe-zebra para estudar neurodegeneração dopaminérgica relacionada à doença de Parkinson. Este método integra ablação quimiogenética e imagem de alto conteúdo para triagem rápida de compostos neuroprotetores.

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	<li>Haynes, E. M., Ulland, T. K., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+discovery:+the+role+of+imaging+established+and+emerging+non-mammalian+models+in+neuroscience.">A model of discovery: the role of imaging established and emerging non-mammalian models in neuroscience.</a> Front Mol Neurosci. 15, 867010 (2022).</li><li>Yang, W., Chen, X., Li, S., Li, X. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+modified+large+animal+models+for+investigating+neurodegenerative+diseases.">Genetically modified large animal models for investigating neurodegenerative diseases.</a> Cell Biosci. 11 (1), 218 (2021).</li><li>Dodiya, R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish-based+Parkinson&#8217;s+disease+models:+unveiling+genetic+mechanisms+and+therapeutic+pathways.">Zebrafish-based Parkinson&#8217;s disease models: unveiling genetic mechanisms and therapeutic pathways.</a> CNS Neurol Disord Drug Targets. 24 (12), 900-920 (2025).</li><li>Wasel, O., Freeman, J. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+and+genetic+zebrafish+models+to+define+mechanisms+of+and+treatments+for+dopaminergic+neurodegeneration.">Chemical and genetic zebrafish models to define mechanisms of and treatments for dopaminergic neurodegeneration.</a> Int J Mol Sci. 21 (17), (2020).</li><li>Kozol, R. A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+over+form:+modeling+groups+of+inherited+neurological+conditions+in+zebrafish.">Function over form: modeling groups of inherited neurological conditions in zebrafish.</a> Front Mol Neurosci. 9, 55 (2016).</li><li>Jang, H., Kim, S. H., Koh, Y., Yoon, K. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+brain+organoids:+toward+mature+neural+circuitry+with+an+intact+cytoarchitecture.">Engineering brain organoids: toward mature neural circuitry with an intact cytoarchitecture.</a> Int J Stem Cells. 15 (1), 41-59 (2022).</li><li>Vandamme, T. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+rodents+as+models+of+human+diseases.">Use of rodents as models of human diseases.</a> J Pharm Bioallied Sci. 6 (1), 2-9 (2014).</li><li>Malik, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compounds+with+species+and+cell+type+specific+toxicity+identified+in+a+2000+compound+drug+screen+of+neural+stem+cells+and+rat+mixed+cortical+neurons.">Compounds with species and cell type specific toxicity identified in a 2000 compound drug screen of neural stem cells and rat mixed cortical neurons.</a> Neurotoxicology. 45, 192-200 (2014).</li><li>Hasani, H., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-brain+imaging+of+freely-moving+zebrafish.">Whole-brain imaging of freely-moving zebrafish.</a> Front Neurosci. 17, 1127574 (2023).</li><li>Mattern, K., von Trotha, J. W., Erfle, P., K&#x00F6;ster, R. W., Dietzel, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NeuroExaminer:+an+all-glass+microfluidic+device+for+whole-brain+in+vivo+imaging+in+zebrafish.">NeuroExaminer: an all-glass microfluidic device for whole-brain in vivo imaging in zebrafish.</a> Commun Biol. 3 (1), 311 (2020).</li><li>Panier, T., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+functional+imaging+of+multiple+brain+regions+in+intact+zebrafish+larvae+using+selective+plane+illumination+microscopy.">Fast functional imaging of multiple brain regions in intact zebrafish larvae using selective plane illumination microscopy.</a> Front Neural Circuits. 7, 65 (2013).</li><li>Noda, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aging-related+motor+function+and+dopaminergic+neuronal+loss+in+C57BL/6+mice.">Aging-related motor function and dopaminergic neuronal loss in C57BL/6 mice.</a> Mol Brain. 13 (1), 46 (2020).</li><li>Godoy, R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemogenetic+ablation+of+dopaminergic+neurons+leads+to+transient+locomotor+impairments+in+zebrafish+larvae.">Chemogenetic ablation of dopaminergic neurons leads to transient locomotor impairments in zebrafish larvae.</a> J Neurochem. 135 (2), 249-260 (2015).</li><li>Schallert, T., Tillerson, J. L. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intervention+strategies+for+degeneration+of+dopamine+neurons+in+parkinsonism:+optimizing+behavioral+assessment+of+outcome.">Intervention strategies for degeneration of dopamine neurons in parkinsonism: optimizing behavioral assessment of outcome.</a> Cent Nerv Syst Dis. , 131-151 (2000).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book: a guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> J Vis Exp. (69), e4196 (2012).</li><li>Nipu, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methylene+blue+at+recommended+concentrations+alters+metabolism+in+early+zebrafish+development.">Methylene blue at recommended concentrations alters metabolism in early zebrafish development.</a> Commun Biol. 8 (1), 120 (2025).</li><li>Ohnesorge, N., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+effect+of+tricaine+(MS-222)-induced+anesthesia+on+brain-wide+neuronal+activity+of+zebrafish+larvae.">Assessment of the effect of tricaine (MS-222)-induced anesthesia on brain-wide neuronal activity of zebrafish larvae.</a> Front Neurosci. 18, 1456322 (2024).</li><li>Schroeder, A. B., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ImageJ+ecosystem:+open-source+software+for+image+visualization,+processing,+and+analysis.">The ImageJ ecosystem: open-source software for image visualization, processing, and analysis.</a> Protein Sci. 30 (1), 234-249 (2021).</li><li>Stirling, D. R., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellProfiler+4:+improvements+in+speed,+utility+and+usability.">CellProfiler 4: improvements in speed, utility and usability.</a> BMC Bioinformatics. 22 (1), 433 (2021).</li><li>Kim, G. H. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+screen+reveals+renin-angiotensin+system+inhibitors+as+neuroprotective+via+mitochondrial+restoration+in+dopamine+neurons.">A zebrafish screen reveals renin-angiotensin system inhibitors as neuroprotective via mitochondrial restoration in dopamine neurons.</a> eLife. 10, (2021).</li><li>Kim, G. H. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+dopamine+neuron+imaging-based+small+molecule+screen+identifies+novel+neuroprotective+compounds+and+targets.">In vivo dopamine neuron imaging-based small molecule screen identifies novel neuroprotective compounds and targets.</a> Front Pharmacol. 13, 837756 (2022).</li><li>Aponte, P. M., Gutierrez-Reinoso, M. A., Garcia-Herreros, M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bridging+the+gap:+animal+models+in+next-generation+reproductive+technologies+for+male+fertility+preservation.">Bridging the gap: animal models in next-generation reproductive technologies for male fertility preservation.</a> Life (Basel). 14 (1), (2023).</li><li>Fen, W., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+for+cell-based+screening+methods+in+drug+discovery.">A review for cell-based screening methods in drug discovery.</a> Biophys Rep. 7 (6), 504-516 (2021).</li></ol>

<table><tbody><tr><td>Dieta de peixe-zebra adulto, pellets de 0,5 mm</td><td>Zeigler</td><td>AH271</td><td>Usado para alimentar peixes-zebra adultos durante o manejo rotineiro</td></tr><tr><td>Agarósio, baixo ponto de fusão (LMA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9414-10G</td><td>Usado para incorporar larvas em poços para posicionamento estável durante a imagem</td></tr><tr><td>Folha de alumínio</td><td>ULINE</td><td>S-20197</td><td>Usada para proteger reagentes sensíveis à luz, como MTZ, durante a preparação e incubação</td></tr><tr><td>CellProfiler</td><td>Broad Institute</td><td>RRID: SCR_007358</td><td>Usado para análise de imagem de fluorescência automatizada opcional</td></tr><tr><td>Tubo cônico, 15 mL</td><td>Corning</td><td>352097</td><td>Usado para preparação de reagentes e manuseio de amostras</td></tr><tr><td>Tubo cônico, 50 mL</td><td>Corning</td><td>352070</td><td>Usado para preparação de reagentes e armazenamento de solução</td></tr><tr><td>Tanques de cruzamento (1,0 L)</td><td>Aquaneering</td><td>ZHCT100</td><td>Usados para reprodução controlada de peixe-zebra e coleta de embriões</td></tr><tr><td>Danio rerio (AB tipo selvagem)</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Linha de controle não transgênica usada para validar a especificidade dos efeitos dependentes da nitrorredutase</td></tr><tr><td>Danio rerio (Tg(th:Gal4; UAS:NTR-mCherry))</td><td>&mdash;</td><td>&mdash;</td><td>Linha de peixe-zebra transgênica expressando nitrorredutase-mCherry em neurônios dopaminérgicos para ablação quimiogênica direcionada</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide (DMSO), anidro (&ge;99,9%)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>472301-500ML</td><td>Solvente para PTU, MTZ e compostos de triagem</td></tr><tr><td>EthoVision XT</td><td>Noldus</td><td>RRID: SCR_000441</td><td>Software de rastreamento comportamental usado para quantificar a locomoção larval</td></tr><tr><td>Fiji (ImageJ)</td><td>NIH</td><td>RRID: SCR_003070</td><td>Software de análise de imagem usado para quantificação de fluorescência</td></tr><tr><td>Pinças de ponta fina ou sonda de 0,25 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>WPI0118</td><td>Usado para orientar larvas durante a incorporação em agarósio</td></tr><tr><td>Microscópio de fluorescência</td><td>Zeiss</td><td>11845460</td><td>Usado para imagem de neurônios dopaminérgicos via fluorescência mCherry</td></tr><tr><td>Gemma Micro 150 ZF (dieta juvenil, 100&ndash;200 &mu;m)</td><td>Skretting</td><td>10818945</td><td>Usado para alimentar peixes-zebra juvenis</td></tr><tr><td>Gemma Micro 75 ZF (dieta larval, 50&ndash;100 &mu;m)</td><td>Skretting</td><td>10818935</td><td>Usado para alimentar larvas de peixe-zebra</td></tr><tr><td>GraphPad Prism</td><td>GraphPad</td><td>RRID: SCR_002798</td><td>Software de análise estatística usado para análise e plotagem de dados</td></tr><tr><td>Bloco de aquecimento (capaz de 42&deg;C e 70&deg;C)</td><td>Thermo Fisher</td><td>88870001</td><td>Usado para derreter e manter agarósio em temperaturas controladas</td></tr><tr><td>Câmera de alta resolução (montagem superior compatível)</td><td>Basler</td><td>88-327</td><td>Usada para registrar a atividade locomotora larval</td></tr><tr><td>Ácido clorídrico (HCl), 0,1 M</td><td>Fisher Scientific</td><td>SA48-500</td><td>Usado para ajustar o pH durante a preparação de tricaine</td></tr><tr><td>Incubadora (28,5&deg;C, fotoperíodo de 14 h luz:10 h escuridão)</td><td>Millipore</td><td>Z763314</td><td>Mantém condições ambientais controladas para o desenvolvimento do peixe-zebra</td></tr><tr><td>Sal marinho Instant Ocean</td><td>Instant Ocean</td><td>SS15-10</td><td>Usado para preparar água de ovo azul (BEW)</td></tr><tr><td>Folha difusora de luz (ou equivalente)</td><td>Edmund Optics</td><td>27-103</td><td>Usada para fornecer iluminação uniforme e minimizar o brilho durante a gravação comportamental</td></tr><tr><td>Lâmpada de luz</td><td>Lightcraft</td><td>LC2004LED</td><td>Fornece iluminação inferior durante o rastreamento locomotor</td></tr><tr><td>Metronidazol (MTZ)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3761-100G</td><td>Usado para ablação quimiogênica de neurônios dopaminérgicos</td></tr><tr><td>Azul de metileno, solução aquosa a 1%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9140</td><td>Adicionado ao BEW para prevenir o crescimento microbiano em embriões</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga, 1,5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22363204</td><td>Usado para alíquota de reagentes e armazenamento</td></tr><tr><td>Micropipeta, P200</td><td>Gilson</td><td>FP10005S</td><td>Usado para manusear larvas e preparar soluções</td></tr><tr><td>Pratos de Petri, 100 mm</td><td>Corning</td><td>CLS430167</td><td>Usado para coleta e incubação de embriões</td></tr><tr><td>Pontas de pipeta, 200 &mu;L</td><td>RAININ</td><td>30389188</td><td>Usado com micropipetas para manuseio de líquidos e transferência de larvas</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio (NaCl), &ge;99,0%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888-500G</td><td>Usado para preparar tampão e soluções aquosas</td></tr><tr><td>Hidróxido de sódio (NaOH), 0,1 M</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS256-500</td><td>Usado para ajustar o pH durante a preparação de tricaine</td></tr><tr><td>Estereomicroscópio</td><td>Nikon</td><td>SMZ-745</td><td>Usado para manipulação e orientação de larvas durante a incorporação</td></tr><tr><td>Tapete térmico controlado por temperatura (25&deg;C&ndash;28&deg;C)</td><td>Vivosun</td><td>V-SHMDT</td><td>Mantém temperatura estável durante a gravação comportamental</td></tr><tr><td>Tricaine methanesulfonate (MS-222)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E10521-10G</td><td>Usado como anestésico para larvas de peixe-zebra</td></tr><tr><td>Base de tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152-1</td><td>Usado na preparação da solução tamponada de tricaine</td></tr><tr><td>Sistema de purificação de água</td><td>Millipore</td><td>ZIQ7003T0</td><td>Usado para gerar água desionizada para preparação de soluções</td></tr><tr><td>Tanques de manutenção de peixe-zebra</td><td>Aquaneering</td><td>ZS560</td><td>Usado para manter populações de peixes-zebra adultos</td></tr><tr><td>1-Fenil-2-tioureia (PTU)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7629-10G</td><td>Usado para inibir a melanogênese e manter a transparência óptica</td></tr><tr><td>Placa de 6 poços, fundo plano</td><td>Corning</td><td>07-200-83</td><td>Usada para ensaios comportamentais locomotores</td></tr><tr><td>Placa de 96 poços, fundo plano</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655096</td><td>Usada para

fenotipagem in vivo da neurodegeneração dopaminérgica em larvas de peixe-zebra usando análise comportamental e imagem de alto conteúdo

In Vivo Phenotyping of Dopaminergic Neurodegeneration in Zebrafish Larvae Using Behavioral Analysis and High-Content Imaging

Fenotipagem In Vivo da Neurodegeneração Dopaminérgica em Larvas de Peixe-Zebra Usando Análise Comportamental e Imagem de Alto Conteúdo

Drug discovery research in neurodegeneration is constrained by the high cost and low throughput of traditional mammalian models. This bottleneck is ...

Nossa pesquisa investiga a degeneração de neurônios dopaminérgicos na doença de Parkinson e realiza triagem de novos compostos neuroprotetores. A lacuna de pesquisa que nosso protocolo aborda está exatamente entre os modelos celulares tradicionais sem contexto e os modelos baseados em roedores, que são lentos. Nosso modelo de peixe-zebra oferece uma maneira muito rápida e escalonável de enfrentar essas descobertas de fármacos altamente desafiadoras em distúrbios neurodegenerativos, como a doença de Parkinson.Para começar, transfira a água do tanque contendo embriões de peixe-zebra transgênicos homozigotos através de um filtro de malha de 400 micrômetros. Incube-os em uma placa de Petri de 100 mililitros contendo 30 mililitros de água azul para ovos, ou BEW, a 28,5 graus Celsius sob um ciclo de 14 horas de luz e 10 horas de escuro. Entre 24 e 36 horas após a fertilização, prepare uma mistura contendo BEW e 60 microlitros de 1-fenil-2-tiourea ou PTU numa concentração final de 200 micromolares. Transfira os embriões para esta mistura para manter a transparência larval. Três dias após a fertilização, utilize o canal mCherry com configurações fixas do microscópio para triar as larvas, a

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este artigo descreve a resposta comportamental do peixe-zebra a compostos tóxicos monitorando a locomoção larval. O protocolo analisa ainda um exemplo da resposta das larvas do peixe-zebra ao poluente ambiental.

Ensaio de locomoção larval: método de alto rendimento para estudar a toxicidade neurocomportamental de um composto em larvas de peixe-zebra

Fonte: Schramm, P. et al. Imagem in vivo de tecido cerebral totalmente ativo em larvas e juvenis de peixe-zebra acordados por remoção de crânio e pele. J. Vis. Exp. (2021)Este vídeo demonstra a imagem in vivo de neurônios cerebelares em larvas transgênicas de peixe-zebra, que expressam proteínas fluorescentes em neurônios de Purkinje. O processo envolve anestesiar as larvas, imobilizá-las em agarose e remover cuidadosamente a pele pigmentada para aumentar a penetração da luz e a intensidade da...

Imagem in vivo do cérebro larval de peixe-zebra para visualização de neurônios cerebelares

Aqui, apresentamos uma abordagem sistemática para o desenvolvimento fisiologicamente relevante, sensível e...

In Vivo Modelagem do Morbid Genoma Humano utilizando Danio rerio

O nosso laboratório desenvolveu um novo sistema de imagem automatizado de alto débito, que é útil para a detecção de vários comportamentos diferentes em larvas de peixe-zebra de 7 dias de idade. O sistema pode ser utilizado para detectar alterações subtis no comportamento após as larvas foram expostas a agentes tóxicos ambientais ou de produtos farmacêuticos.

Automatizados análises comportamentais de alto rendimento em larvas do peixe

Aqui, apresentamos um protocolo para o desenvolvimento e a caracterização de um modelo de zebrafish de epilepsia resultante da inibição transitória do gene DEPDC5.

Análise comportamental e fisiológica em um modelo de zebrafish de epilepsia

Apresentamos uma câmara comportamental projetada para avaliar o desempenho cognitivo. Fornecemos dados mostrando que uma vez adquiridos, zebrafish se lembram da tarefa 8 semanas depois. Também mostramos que os zebrafish hiperglicêmicos alteraram o desempenho cognitivo, indicando que esse paradigma é aplicável a estudos que avaliam a cognição e a memória.

A Tarefa Comportamental de Escolha de Três Câmaras usando zebrafish como um sistema modelo

Aqui apresentamos um método para a imagem do cérebro embrionário de zebrafish in vivo upto larval e juvenil estágios. Este procedimento microinvasivo, adaptado a partir de abordagens eletrofisiológicas, fornece acesso a detalhes celulares e subcelulares de neurônio maduro e pode ser combinado com estudos optogenéticos e neurofarmaológicos para caracterização da função cerebral e intervenção medicamentosa.

In vivo Imagem de Tecido Cerebral Totalmente Ativo em Larvas de Zebrafish Acordados e Juvenis por Remoção de Crânio e Pele

O presente protocolo descreve a injeção intracerebroventricular (ICV) de zebrafish adulto com neurotóxifo 6-hidroxydopamina (6-OHDA) no diencephalon ventral (Dn) e a avaliação do prejuízo e posterior recuperação da pós-colisão do comportamento de natação usando o teste do tanque aberto, que é acompanhado pela análise usando um software de rastreamento de vídeo.

Avaliação locomotor de 6-Hidroxidopamina-induzido Modelo de Doença de Parkinson baseado em Zebrafish

Apresentamos aqui um protocolo para imagens in vivo de todo o cérebro de larvas de peixes-zebra usando microscopia de fluorescência tridimensional. O procedimento experimental inclui preparo da amostra, aquisição e visualização das imagens.

In vivo Imagem do cérebro inteiro de larvas de peixe-zebra usando microscopia de fluorescência tridimensional

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para examinar a atividade neural em regiões cerebrais de peixes-zebra transgênicos que expressam indicadores de cálcio GCaMP usando microscopia confocal.

In vivo Imagem de fluorescência confocal da atividade neural induzida por estimulação sensorial em peixes-zebra larvais parcialmente contidos

Esse protocolo estabelece um paradigma de fenotipagem comportamental em larvas de peixe-zebra tratadas com MPTP para avaliar déficits motores e não motores, semelhantes à doença de Parkinson.

Perfilamento fenotípico de fenótipos comportamentais semelhantes ao parkinsoniano induzidos por MPTP em larvas de peixe-zebra com base em experimento comportamental

Aprenda a fenotipagem de alto rendimento em larvas de peixe-zebra para estudar neurodegeneração dopaminérgica relacionada à doença de Parkinson. Este método integra ablação quimiogenética e imagem de alto conteúdo para triagem rápida de compostos neuroprotetores.

Fenotipagem In Vivo da Neurodegeneração Dopaminérgica em Larvas de Peixe-Zebra Usando Análise Comportamental e Imagem de Alto Conteúdo (Vídeo) | JoVE Journal

Fenotipagem In Vivo da Neurodegeneração Dopaminérgica em Larvas de Peixe-Zebra Usando Análise Comportamental e Imagem de Alto Conteúdo

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