Name: Quantificando a Taxa de Letalidade Embrionária em Caenorhabditis elegans (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-12T15:15:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: Aprenda a quantificar a letalidade embrionária em Caenorhabditis elegans com um ensaio de baixo custo e acessível a iniciantes. Este método elimina a necessidade de equipamentos especializados e permite avaliar defeitos de desenvolvimento causados por fatores genéticos ou ambientais com precisão.

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<table><tbody><tr><td>Ampicillin sodium salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9518</td><td></td></tr><tr><td>Bacteriological peptone</td><td>Fischer Scientific</td><td>DF0118-17-0</td><td></td></tr><tr><td>C. elegans N2</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>N2</td><td>wild type</td></tr><tr><td>C. elegans NL2099</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td>NL2099</td><td>rrf-3(pk1426) II. RNAi hypersensitive</td></tr><tr><td>Calcium chloride, anhydrous</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>746495</td><td></td></tr><tr><td>Cholesterol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3045</td><td></td></tr><tr><td>Conical tubes, 15 mL</td><td>VWR</td><td>60818-725</td><td></td></tr><tr><td>Culture tubes, 14 mL</td><td>VWR</td><td>470150-966</td><td></td></tr><tr><td>Diaphragm vacuum pump</td><td>Amazon</td><td>TC-100</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting microscope</td><td>AmScope&nbsp;</td><td>SM-2</td><td></td></tr><tr><td>Escherichia coli HT115</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td>RNAse III-deficient, used for RNAi by feeding experiments</td></tr><tr><td>Escherichia coli OP50</td><td>Caenorhabditis Genetics Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Granulated agar</td><td>Fischer Scientific</td><td>BP97445</td><td></td></tr><tr><td>Handheld tally counter</td><td>LabDepot</td><td>HTCP01</td><td></td></tr><tr><td>IPTG, dioxane free (Isopropyl-b-D-thiogalactoside)</td><td>US Biological</td><td>I8500</td><td></td></tr><tr><td>LB Broth (Miller)</td><td>US Biological</td><td>L1520</td><td>Para fazer o meio LB, dissolver 25 g de pó de LB em 1 L de água destilada. Autoclave por 20 min a 121,1 &deg;C.</td></tr><tr><td>Luer Lok disposable syringe</td><td>BH Supplies</td><td>BH20LL</td><td></td></tr><tr><td>Magnesium sulfate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M2643</td><td></td></tr><tr><td>Microscopy slides</td><td>Sail Brand</td><td>7101</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes, 100 mm</td><td>Tritech Research</td><td>T3371</td><td></td></tr><tr><td>Petri dishes, 35 mm</td><td>Tritech Research</td><td>T3501</td><td></td></tr><tr><td>Potassium Phosphate Buffer (PPB)</td><td></td><td></td><td>Para fazer o tampão de fosfato de potássio (1 M), dissolver 98 g de fosfato de potássio monobásico e 48 g de fosfato de potássio dibásico em 1 L de água destilada. Ajustar o pH para 6. Autoclave por 20 min a 121 &deg;C.</td></tr><tr><td>Potassium phosphate dibasic</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>795496</td><td></td></tr><tr><td>Potassium phosphate monobasic</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>529568</td><td></td></tr><tr><td>Rocker (nutating mixer)</td><td>Corning LSE</td><td>6720</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes, 25 mL&nbsp;</td><td>Corning</td><td>4489</td><td></td></tr><tr><td>Serological pipettes, 5 mL&nbsp;</td><td>Celltreat</td><td>229235</td><td></td></tr><tr><td>Shaking incubator Infors Multitron</td><td>INFORS HT</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Sodium chloride</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydroxide solution, 5 N</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp;SS256-500</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hypochlorite, 5%</td><td>LabDepot</td><td>LC246302</td><td></td></tr><tr><td>Sodium phosphate dibasic</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9763</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall ST1 Plus Centrifuge</td><td>Thermo Scientific</td><td>75016030</td><td></td></tr><tr><td>Stir plate</td><td>&nbsp;ONilab</td><td>ONi28-S</td><td></td></tr><tr><td>Syringe filters</td><td>Semmerfeld</td><td>JQP033022QE1</td><td></td></tr><tr><td>Water bath</td><td>FOUR E's Scientific</td><td>WB401</td><td></td></tr></tbody></table>

quantificando a taxa de letalidade embrionária em caenorhabditis elegans

Quantifying Embryonic Lethality Rate in Caenorhabditis elegans

Quantificando a Taxa de Letalidade Embrionária em Caenorhabditis elegans

Embryonic lethality is a cornerstone phenotype used in Caenorhabditis elegans research to characterize developmental defects arising from factors such as ...

Our research focuses on measuring embryonic lethality in Caenorhabditis elegans and determining how strongly a perturbation affects development. This protocol can be applied to assess embryonic lethality caused by genetic mutations, RNAi knockdowns, drug treatment, nutritional supplementation, or environmental perturbations.To begin, gather the required reagents. Prepare 1 liter of nematode growth medium or NGM in a 2-liter bottle. Allow the medium to cool to 55 degrees Celsius in a water bath. After placing the bottle on a stir plate, aseptically add the required reagents. Pour approximately 25 milliliters of medium into each 100-milliliter plate. Inoculate 200 milliliters of LB medium with a single E. coli OP50 colony using a sterile inoculation loop. Place the flask on an orbital shaker at 200 revolutions per minute, and incubate overnight at 37 degrees Celsius. Transfer the E. coli OP50 culture into autoclaved centrifuge bottles. After centrifugation, resuspend the bacterial pellet in 1/20th of the original volume. Seed each 100-millimeter NGM plate with one to 1.5 milliliters of the concentrated culture, and incubate overnight at room temperature to allow the bacteria to grow.

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Este vídeo descreve um método tradicional baseado em placas para medir a vida útil de C. elegans. O protocolo de exemplo mede a vida útil de vermes tratados com RNAi.

Análise de vida útil: medindo a longevidade de C. elegans

C. elegans O comportamento de postura de ovos pode fornecer informações importantes em estudos de desenvolvimento, reprodutivos e anatômicos. Este vídeo apresenta as etapas importantes de um ensaio de postura de ovos e mostra um experimento de amostra no qual um medicamento é testado quanto à toxicidade reprodutiva.

Ensaio de postura de ovos: um método para quantificar o comportamento de postura de C. elegans

Fonte: Anderson, Q. L., et al. Um patossistema de C. elegans de alto rendimento, alto conteúdo e base líquida. J. Vis. Exp. (2018)O vídeo demonstra um ensaio em base líquida onde larvas de C. elegans geneticamente modificadas são expostas a bactérias patogênicas em uma microplaca. As toxinas bacterianas secretadas no meio induzem o estresse e a morte do hospedeiro. Um corante fluorescente cora vermes mortos, permitindo a quantificação baseada em imagens da mortalidade para avaliar a...

Avaliação da mortalidade induzida por bactérias patogênicas em larvas de C. elegans

Um ensaio ovo-in-worm (EIW) é um método útil para quantificar o comportamento de postura. Alterações na postura de ovos pode ser uma resposta comportamental do organismo...

Medição dos Efeitos de bactérias em<em&gt; C. Elegans</em&gt; Comportamento Usando um Retenção Ensaio Egg

Descrevemos as etapas detalhadas de um ensaio químico de alto rendimento no nematóide Caenorhabditis elegans usado para avaliar a toxicidade da linha germinativa. Neste ensaio, a interrupção da função germinativa após a exposição química é monitorada usando um repórter fluorescente específico para embriões aneuploides.

Avaliação Compreensiva de Germline Chemical Toxicity Usando o Nemátodo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Aqui detalhamos protocolos projetados especificamente para monitorar defeitos morfogênicos que ocorrem durante as fases inicial e tardia do alongamento embrionário do nematóide Caenorhabditis elegans. Em última análise, esses protocolos são projetados para identificar genes que regulam essas fases e caracterizar suas necessidades diferenciais ao longo do eixo ântero-posterior do embrião.

Novas métricas para Caracterizar Embryonic Alongamento do nemátodo<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Aqui descrevemos o método conjunto de réplicas, uma abordagem quantitativamente medida de expectativa de vida/sobrevivência de c. elegans e healthspan de forma robusta e de alta produtividade, permitindo assim a seleção de muitas condições sem sacrificar a qualidade dos dados. Este protocolo detalha a estratégia e fornece uma ferramenta de software para análise de dados do conjunto de réplicas.

O método de conjunto de réplica: Uma abordagem de alto rendimento para quantitativamente medida Caenorhabditis elegans expectativa de vida

Este trabalho descreve um protocolo semi-alta de supressão que permite imagens simultâneas de lapso de tempo 3D de embriaênese embrionária em embriões de 80-100 C. elegans em uma única corrida noturna. Além disso, as ferramentas de processamento e visualização de imagens são incluídas para simplificar a análise de dados. A combinação destes métodos com tensões personalizadas do repórter permite a monitoração detalhada do embryogenesis.

Um método de imagem semi-alta-fonte e um kit de ferramentas de visualização de dados para analisar o desenvolvimento embrionário de C. elegans

Para estudar as interações acompanhante-acompanhante e acompanhante-substrato, realizamos telas de interação sintética em elegans caenorhabditis usando interferência de RNA em combinação com mutações leves ou sobre-expressão de acompanhantes e monitorar disfunção proteica específica do tecido no nível do organismo.

Usando elegans caenorhabditis para tela para interações de acompanhantes específicas de tecido

Aqui, apresentamos um método geral para determinar a viabilidade embrionária e o número total de embriões produzidos (ninhada) usando o organismo modelo C. elegans.

Mensuração da Viabilidade Embrionária e do Tamanho da Ninhada em Caenorhabditis elegans

Aprenda a quantificar a letalidade embrionária em Caenorhabditis elegans com um ensaio de baixo custo e acessível a iniciantes. Este método elimina a necessidade de equipamentos especializados e permite avaliar defeitos de desenvolvimento causados por fatores genéticos ou ambientais com precisão.

Quantificando a Taxa de Letalidade Embrionária em Caenorhabditis elegans

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