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	<li>Hattar S, Liao HW, Takao M, Berson DM, Yau KW. Melanopsin-containing retinal ganglion cells: architecture, projections, and intrinsic photosensitivity. Science. 2002;295(5557):1065&#8211;70.</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>AAV2-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-mCherry</td><td>Addgene</td><td>44361</td><td>Vetor viral dependente de Cre que codifica DREADD excitatório (hM3Dq) fundido a mCherry para ativação seletiva de ipRGC</td></tr><tr><td>Anti-c-Fos antibody (rabbit monoclonal)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>2250S</td><td>Anticorpo primário usado para detectar c-Fos como marcador de ativação neuronal</td></tr><tr><td>Anti-tdTomato antibody (goat)</td><td>LSBio</td><td>LS-C340696</td><td>Anticorpo primário usado para detectar expressão do reporter mCherry/tdTomato</td></tr><tr><td>Blue LED driver</td><td>Thorlabs</td><td>LEDD1B</td><td>Fonte de alimentação para controlar a intensidade e saída do LED azul</td></tr><tr><td>Blue LED light source</td><td>Thorlabs</td><td>M470L5</td><td>Fonte LED que emite luz azul (&lambda;max &asymp; 470 nm) para estimulação fótica</td></tr><tr><td>ClockLab software</td><td>Actimetrics</td><td>Versão 6.0.53</td><td>Software para aquisição e análise de dados de atividade locomotora circadiana</td></tr><tr><td>Clozapine-N-oxide (CNO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C0832-5MG</td><td>Ligando usado para ativar os receptores DREADD hM3Dq in vivo</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>62248</td><td>Corante nuclear fluorescente para marcação de núcleos celulares</td></tr><tr><td>Donkey anti-goat Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen</td><td>A21432</td><td>Anticorpo secundário fluorescente para detecção de anticorpos primários de cabra</td></tr><tr><td>Donkey anti-rabbit Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>A21206</td><td>Anticorpo secundário fluorescente para detecção de anticorpos primários de coelho</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Invitrogen</td><td>00-4958-02</td><td>Meio de montagem usado para preservar a fluorescência em secções de tecido</td></tr><tr><td>ImageJ (Fiji) software</td><td>NIH</td><td>Versão 2.16.0/1.54g</td><td>Software de código aberto para processamento de imagem e análise quantitativa</td></tr><tr><td>Opn4cre Mice</td><td>The Jackson Laboratry</td><td>RRID:IMSR_JAX:035925</td><td>Camundongos usados para ativação quimiogênica</td></tr><tr><td>Violet LED driver</td><td>Mightex</td><td>SLA-1000-2</td><td>Fonte de alimentação para controlar a saída do LED violeta</td></tr><tr><td>Violet LED light source</td><td>Mightex</td><td>BLS-LCS-0385-04-22</td><td>Fonte LED que emite luz violeta (&lambda;max &asymp; 385 nm) para estimulação específica do comprimento de onda</td></tr><tr><td>Wild-type mice</td><td>The Jackson Laboratry</td><td>Jackson strain #101043</td><td>Camundongos usados para o experimento de luz violeta</td></tr></tbody></table>

induzir deslocamentos de fase circadianos diurnos usando abordagens quimiogenéticas e espectrais

Inducing Daytime Circadian Phase Shifts Using Chemogenetic and Spectral Approaches

Induzir deslocamentos de fase circadianos diurnos usando abordagens quimiogenéticas e espectrais

In mammals, circadian phase shifting during the daytime is limited by reduced photic responsiveness of the suprachiasmatic nucleus (SCN), restricting the ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Este artigo irá rever os métodos que podem ser usados ​​para determinar a função circadiano e capacidade de resposta de luz em camundongos.

Medição Responses Luz circadianos e aguda em ratos usando Atividade Roda Executando

Relógios circadianos funcionam no interior das células individuais, ou seja, são células-autónomo. Aqui, descrevem métodos para a geração de modelos de células autónomas relógio usando não-invasiva, com base em tecnologia de luciferase bioluminescência em tempo real. Células repórter fornecer tratáveis, sistemas modelo funcional para estudar biologia circadiano.

Monitorização das células-autônomas Ritmos relógio circadiano de expressão genética dos Repórteres Bioluminescência luciferase

Fonte: Kodani, S., et.al. Manipulação optogenética de circuitos neurais durante o monitoramento de estados de sono/vigília em camundongos. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra a manipulação optogenética de circuitos neurais envolvidos na transição do sono para a vigília em camundongos. O procedimento envolve a implantação cirúrgica de uma fibra óptica e eletrodos no cérebro e nos músculos para permitir a estimulação da luz e o registro eletrofisiológico. Ao fornecer luz para ativar canais...

Manipulação optogenética de circuitos neurais para a transição do sono para a vigília em camundongos

Um ensaio de bioluminescência em vitro para determinar celular ritmo circadiano em células epiteliais mamárias é apresentado. Este método utiliza plasmídeos de repórter de pilha mamífera expressando desestabilizado luciferase sob o controle do promotor do gene de período 2 . Ele pode ser adaptado para outros tipos de células para avaliar efeitos de órgãos específicos no ritmo circadiano.

In Vitro Ensaio de bioluminescência para caracterizar o ritmo circadiano em células epiteliais mamárias

Luciferase geneticamente codificado é um repórter popular não-invasivo da expressão do gene. Uso de um automatizado do longitudinal luciferase gravador de gás e temperatura-otimizado (jacaré) de imagem permite gravação longitudinal das células bioluminescentes sob uma ampla gama de condições. Aqui nós mostramos como jacaré pode ser usado no contexto de pesquisa de ritmos circadianos.

Medição flexível de repórteres bioluminescentes usando um Luciferase Longitudinal automatizado de imagem gravador de gás e temperatura-otimizado (jacaré)

Esta tecnologia baseada em fluorescência recém-desenvolvido permite a monitoração a longo prazo da transcrição de genes do relógio circadiano no núcleo supraquiasmático (SCN) de movimentando-se livremente os ratos em tempo real e em uma alta resolução temporal.

Na Vivo Monitoramento de expressão de Gene relógio circadiano no núcleo supraquiasmático do Mouse usando a repórteres de fluorescência

Aqui, apresentamos um método para investigar ritmos diurnos em desempenho após categorização precisa dos participantes em grupos fenótipos circadianos com base no Questionário cronotipo de Munique, biomarcadores de fase circadiana padrão ouro e medidas actigráficas.

Fenotipagem circadiana humana e testes de desempenho diurno no mundo real

Aqui, detalhamos como sincronizar drosophila a um dia circadiano. Este é o primeiro e mais importante passo necessário para o estudo de ritmos biológicos e cronobiologia.

Circadiano De Drosophila Melanogaster

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Assaying atividade locomotora para estudar ritmos circadianos e sono Parâmetros em Drosophila</em

O perfilamento da expressão de RNA em regiões discretas do cérebro de camundongos exige uma estratégia precisa e repetível de coleta de tecidos. Aqui é descrito um protocolo que utiliza o seccionamento coronal do cérebro e a microdissecação assistida por perfurador de tecidos. O rendimento e a qualidade do RNA total obtido a partir das amostras resultantes confirmam a utilidade do método descrito.

Laser não-Abordagem Microscopia de captura para o Microdissecção de regiões cerebrais discretas Mouse para isolamento de RNA total e Seqüenciamento Next-Generation Downstream e perfil de expressão gênica

National Institute of Mental Health (NIMH), National Institutes of Health (NIH).  Este estudo apresenta estratégias quimiogenéticas e baseadas em luz violeta para permitir um deslocamento de fase circadiano diurno confiável.

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