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<ol>
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</ol>

```html
<table><tbody><tr><td>BD OptEIA Mouse TNF ELISA Kit</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>560478</td></tr><tr><td>Bodipy 558/568 C12</td><td>Flow cytometry: 1:10000; Staining: 1:2000</td><td>Invitrogen</td><td>D3835</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin</td><td>3%</td><td>Sigma</td><td>A9647</td></tr><tr><td>CD107a (LAMP1) &ndash; AF647</td><td>Staining: 1:100; Flow cytometry: 1:200</td><td>BioLegend</td><td>121610</td></tr><tr><td>CD11c &ndash; BV605</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>BioLegend</td><td>117334</td></tr><tr><td>CD16/32</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>Invitrogen</td><td>14-0161-82</td></tr><tr><td>CD301 &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:50</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA2392A647</td></tr><tr><td>CD36 &ndash; PE</td><td>Flow cytometry: 1:400</td><td>BioLegend</td><td>102606</td></tr><tr><td>CD45 &ndash; PE</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>BD Pharmingen</td><td>555483</td></tr><tr><td>Click-iT Plus EdU Alexa Fluor 350 Flow Cytometry Assay Kit</td><td>EdU: 5 &micro;M</td><td>Invitrogen</td><td>C10632</td></tr><tr><td>Clodronate Liposomes</td><td>500 &micro;g/ml clodronate</td><td>Liposoma</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase Type 2</td><td>1 mg/ml, 315 U/mg</td><td>Worthington</td><td>LS004176</td></tr><tr><td>CyQUANT LDH Cytotoxicity Assay Kit</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>C20301</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Flow cytometry: 0.2 &micro;g/ml</td><td>Thermo Fisher</td><td>62248</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>70%</td><td>Carl Roth</td><td>T913.1</td></tr><tr><td>F4/80 &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:100</td><td>Invitrogen</td><td>MF48021</td></tr><tr><td>F4/80 &ndash; PE-Cy7</td><td>Flow cytometry: 1:200</td><td>Invitrogen</td><td>25-4801-82</td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>1.10</td><td>Gibco</td><td>10270106</td></tr><tr><td>Fetal Calf Serum</td><td>1.20</td><td>Gibco</td><td>10270106</td></tr><tr><td>HBSS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14170138</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>13 mM</td><td>Roth</td><td>HN77.2</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>1:10,000</td><td>Life Technologies</td><td>H3570</td></tr><tr><td>LysoTracker &ndash; AF647</td><td>Flow cytometry: 1:20000; Staining: 1:10000</td><td>Invitrogen</td><td>H34477</td></tr><tr><td>MAC-2</td><td>Staining: 1:1000</td><td>Cedarlane</td><td>CL8942AP</td></tr><tr><td>Millicell Cell Culture Insert, 30 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 &micro;m</td><td></td><td>Merck Millipore</td><td>PICM0RG50</td></tr><tr><td>PBS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14190169</td></tr><tr><td>PBS (-Mg, -Ca)</td><td></td><td>Gibco</td><td>14190169</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)</td><td>0.111111111</td><td>Gibco</td><td>11548876</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (10,000 U/ml)</td><td>0.111111111</td><td>Gibco</td><td>11548876</td></tr><tr><td>Perilipin</td><td>2 &micro;g/ml</td><td>Abcam</td><td>ab3526</td></tr><tr><td>Plexxicon 5622</td><td>40 &micro;M</td><td>Plexxicon Inc.</td><td>HY-114153</td></tr><tr><td>RPMI-Media 1640</td><td>with 11 mM glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R8758</td></tr><tr><td>RPMI-Media 1640</td><td></td><td>Sigma</td><td>R8758</td></tr><tr><td>TC-Insert for 6-well plates</td><td></td><td>Sarstedt</td><td>83.3930.040</td></tr><tr><td>TPP tissue culture test plate 6</td><td></td><td>TPP</td><td>92006</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>1%</td><td>Carl Roth</td><td>3051.2</td></tr><tr><td>Zinc chloride</td><td>0.8 mM</td><td>Sigma</td><td>Z0152</td></tr><tr><td>Zinc formaline</td><td></td><td>Polyscience</td><td>21516-3.75</td></tr></tbody></table>
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um modelo de camundongo ex vivo para inflamação do tecido adiposo com dieta rica em gordura

An ex vivo Mouse Model for High-Fat Diet-Like Adipose Tissue Inflammation

Um modelo de camundongo ex vivo para inflamação do tecido adiposo com dieta rica em gordura

This protocol describes an ex vivo mouse model that recapitulates selected cellular and inflammatory features observed in visceral adipose tissue (VAT) ...

We are investigating inflammation in adipose tissue, focusing on the role of adipose tissue macrophages in this process. This model can be applied in a great variety of adipose tissue inflammation research where the focus is on the adipose tissue itself. To begin, prepare the culture medium under sterile conditions.Warm the culture medium and sterile PBS to 37 degrees Celsius. Clean all equipment and the work area inside the tissue culture hood with 70%ethanol. After placing the sacrificed animal in a glass beaker containing 70%ethanol, wipe the exterior of the glass beaker with ethanol and transfer it into the tissue culture hood.Using blunt forceps, place the mouse in a supine position, and pin it to a dissection board. Then, add a thin layer of pre-warmed PBS to a Petri dish. Change to a fresh pair of gloves.Using forceps, lift the lower abdominal skin, and make a small horizontal incision using scissors to open the abdominal cavity. Make a vertical incision extending from the initial cut to expose the internal organs. For male mice, carefully lift the gonadal fat pad, which is attached to the epididymis and testis.Make a cut above the epididymis. Alternatively, excise the epidi

an-ex-vivo-mouse-model-for-high-fat-diet-like-adipose-tissue

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

O tecido adiposo (TA) é um site de ativação imune celular intensa e interação. Quase todas as células do sistema imune estão presentes em AT e as suas proporções são alteradas pela obesidade. Isolamento adequado, quantificação e caracterização de populações de células imunes são fundamentais para a compreensão do seu papel na doença immunometabolic.

Isolamento de tecido adiposo de células imunes

O tecido adiposo (TA) pode influenciar a homeostase de todo o corpo, portanto, entender os mecanismos moleculares de diferenciação e função dos adipócitos é importante. Fornecemos um protocolo para obter novos insights sobre esses processos, analisando a homeostase, diferenciação e exposição à hipóxia dos adipócitos como um modelo para a apoptose induzida de adipócitos.

Mecanismo do Regulamento de Números de adipócitos em adultos Organismos através da diferenciação e apoptose homeostase

Um modelo animal da dieta-induzido simples e de confiança do roedor para o esteatohepatite não alcoólico (Nash) é descrito, conseguido com a carcaça non-SPF dos animais e a administração de uma dieta high-fat específica. Nós descrevemos a identificação de subconjuntos hepatic e adiposos da pilha imune para recapitular condições imunológicas humanas expondo ratos aos germes ambientais.

Um modelo murino avançado para esteatohepatite não alcoólica em associação com diabetes tipo 2

Descrevemos um sistema de cultura in vitro de matriz extracelular em 3D que permite a dissecação dos papéis da matriz e dos adipócitos em contribuir para o fenótipo metabólico do tecido adiposo.

Um modelo de cultura de matriz-adipócito extracelular humano para estudar crosstalk metabólico de matriz e células

Este protocolo descreve a abordagem técnica para isolar subpopulações de células estromais adipogênicas e fibroinflamatórias de depósitos de tecido adiposo branco intra-abdominal murino (WAT) por classificação de células ativadas por fluorescência ou separação de esferas imunomagnéticas.

Isolamento de Subpopulações de Células Estromais Adipogênicas e Fibro-Inflamatórias de Depósitos Adiposos Intra-Abdominais Murinos

Este protocolo descreve o isolamento de pré-adipócitos de camundongos da gordura subcutânea, sua diferenciação em adipócitos maduros e a indução de resistência à insulina. A ação da insulina é avaliada pela fosforilação/ativação de membros da via de sinalização da insulina através do western blot. Este método permite a determinação direta da resistência/sensibilidade à insulina em adipócitos primários.

Adipócitos diferenciados de camundongos em cultura primária: um modelo de resistência à insulina

A lipólise de triglicerídeos em adipócitos é um importante processo metabólico que resulta na liberação de ácidos graxos livres e glicerol. Aqui, fornecemos um protocolo detalhado para medir a lipólise basal e estimulada em adipócitos e tecido adiposo ex vivo de camundongos.

Mensuração da Taxa de Lipólise em Tecido Adiposo Murino Ex Vivo e Pré-adipócitos Primários Diferenciados In Vitro

Este protocolo descreve o isolamento semi-automatizado da fração vascular estromal (FVS) do tecido adiposo murino para obtenção de pré-adipócitos e diferenciação de adipócitos in vitro. O uso de um dissociador tecidual para digestão da colagenase reduz a variação experimental e aumenta a reprodutibilidade.

Isolamento Semi-Automatizado da Fração Vascular Estromal do Tecido Adiposo Branco Murino Usando um Dissociador de Tecido

Este protocolo apresenta uma abordagem detalhada para replicar um modelo murino de insuficiência cardíaca induzida por hiperlipidemia com fração de ejeção preservada (ICFEP). O projeto combina a administração do vírus adeno-associado 9-receptor de lipoproteína de baixa densidade T de troponina cardíaca (AAV9-cTnT-LDLR) e poloxâmero-407 (P-407).

Um modelo murino de insuficiência cardíaca induzida por hiperlipidemia com fração de ejeção preservada

Ovos de Schistosoma mansoni são potentes estimuladores do tipo T helper 2 (Th2) resposta imunológica, característica da infecção por parasita, asma e inflamação alérgica. Este protocolo utiliza S. mansoni injecção de ovo para gerar CD4 de resposta de citocinas induzida por Th2 inflamatória no pulmão, caracterizada por formação de granuloma pulmonar em torno do ovo, eosinofilia e macrófagos activação alternativa.

Usando Ovos de<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Como um<em&gt; Em vivo</em&gt; Modelo de Helmintos induzida por inflamação pulmonar

Leipzig University.  Usando um modelo explantado ex vivo , pequenos pedaços da porção rostral do tecido adiposo branco visceral de camundongos magros são cultivados por 7 a 10 dias, permitindo a indução e o estudo da inflamação do tecido adiposo conforme ocorre durante a alimentação rica em gordura.

Um modelo de camundongo ex vivo para inflamação do tecido adiposo com dieta rica em gordura

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