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<table><tbody><tr><td>&minus;80 &deg;C freezer</td><td>Eppendorf New Brunswick</td><td>U700</td><td>Armazenamento de amostras biológicas antes da preparação.</td></tr><tr><td>6" vertical bracket for breadboards, 1/4"-20 holes (2 pieces)</td><td>Millipore Sigma</td><td>VB01A</td><td>Suporte mecânico e estabilização da montagem personalizada do sprayer</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>Fisher Chemical</td><td>240744</td><td>Solvente orgânico para preparação e otimização de solvente compatível com DESI</td></tr><tr><td>Ammonium formate</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>401152500</td><td>Preparação de buffer de lavagem de formiato de amônio isotônico para lavagem de células antes do DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>Brightfield microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>12575252</td><td>Imageamento óptico e visualização de células aderentes antes da aquisição DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>C18 column</td><td>Waters</td><td>186009259</td><td>Geração de contrapressão em linha para formação estável de spray DESI nano-fluxo</td></tr><tr><td>Copper wire</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Conexão elétrica e aterramento durante a fabricação do suporte do sprayer</td></tr><tr><td>DESI XS sprayer</td><td>Waters</td><td>700014033</td><td>Fonte de ionização DESI ambiente para experimentos de DESI&ndash;MSI de célula única</td></tr><tr><td>Epoxy resin</td><td>Devcon</td><td>20945</td><td>Estabilização mecânica e fixação dos componentes personalizados do suporte do sprayer</td></tr><tr><td>FAIMS Pro electrode ion source housing adaptor</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>98100-20046</td><td>Modificação e fabricação da interface DESI personalizada compatível com Orbitrap</td></tr><tr><td>Formic acid</td><td>Ward&rsquo;s Science</td><td>470301-120</td><td>Modificador de ácido para preparação do solvente do spray DESI</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Fisher Chemical</td><td>A456-4 Optima</td><td>Solvente orgânico para preparação do solvente do spray DESI</td></tr><tr><td>Gas regulator</td><td>Millipore Sigma</td><td>23831-U</td><td>Regulação da pressão do gás de bainha de nitrogênio durante a operação DESI</td></tr><tr><td>Gridded glass coverslip</td><td>Ibidi</td><td>10817</td><td>Substrato de cultura celular e referência posicional para registro de imagem óptico para MS</td></tr><tr><td>Grounding wire</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Conexão de aterramento elétrico para o sprayer DESI e montagem da interface</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>HeraCell</td><td>51026282</td><td>Manutenção de culturas celulares de mamíferos sob condições controladas de temperatura e CO2</td></tr><tr><td>LC/MS-grade water</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>W6500</td><td>Preparação do buffer de lavagem de formiato de amônio e do solvente do spray DESI</td></tr><tr><td>METASPACE platform</td><td>METASPACE</td><td>https://metaspace2020.eu</td><td>Visualização de imagem MS baseada em nuvem e análise de dados de metabolômica espacial</td></tr><tr><td>Modified FAIMS interface</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>98100-20046</td><td>Interface personalizada para acoplamento do sprayer DESI com espectrômetros de massa Orbitrap</td></tr><tr><td>Motorized XYZ stage</td><td>Newport Corporation</td><td>CONEX-MFACC</td><td>Movimento controlado do estágio raster durante a aquisição DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>MycoAlert PLUS mycoplasma detection kit</td><td>Lonza</td><td>LT07-703</td><td>Monitoramento de rotina da contaminação por micoplasma em células cultivadas</td></tr><tr><td>Nano-liquid chromatography system</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>5200.0355</td><td>Sistema de entrega de solvente nano-fluxo para geração de spray DESI</td></tr><tr><td>Optical breadboard</td><td>Thorlabs</td><td>MB1012</td><td>Plataforma de suporte mecânico para o sprayer DESI e montagem da interface modificada</td></tr><tr><td>Orbitrap Fusion Lumos mass spectrometer</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>UVPD</td><td>Espectrômetro de massa Orbitrap de alta resolução para aquisição de dados DESI&ndash;MSI</td></tr><tr><td>PEEK tubing</td><td>IDEX</td><td>1535</td><td>Conexão da linha de solvente entre o sistema nano-LC e o sprayer DESI</td></tr><tr><td>Penicillin&ndash;streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>Suplemento antibiótico para meio de cultura celular de mamíferos</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>VWR</td><td>0780-50L</td><td>Solução de lavagem para células cultivadas durante o passaging</td></tr><tr><td>RPMI-1640 medium</td><td>Gibco</td><td>11875093</td><td>Meio de cultura celular de mamíferos para manutenção de células OVCAR-8</td></tr><tr><td>Stage-control software</td><td>Lasken Group</td><td>Versão 6</td><td>Controle de software do rastreamento raster, movimento do estágio e parâmetros de aquisição de imagem</td></tr><tr><td>Stainless steel tubing</td><td>MicroGroup</td><td>316H16H</td><td>Tubulação de transferência de íons fabricada sob medida (1/16" OD, 0,033" ID) para integração da interface Orbitrap</td></tr><tr><td>Syringe, 250 &micro;L</td><td>Hamilton</td><td>1725LTN250UL</td><td>Carregamento de solvente e entrega de solvente nano-fluxo</td></tr><tr><td>Synthetic fetal bovine serum (FBS)</td><td>HyClone</td><td>SH3006603</td><td>Suplemento sérico para preparação do meio completo de cultura celular de mamíferos</td></tr><tr><td>TC20 Automated Cell Counter</td><td>Bio-Rad Laboratories</td><td>1450102EDU</td><td>Contagem automatizada de células cultivadas antes da semeadura em lâminas</td></tr><tr><td>Tissue culture dish, 100 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012924</td><td>Expansão e manutenção de culturas celulares OVCAR-8 aderentes</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-072</td><td>Descolamento enzimático de células aderentes durante o passaging</td></tr><tr><td>UV-curing resin</td><td>Prime Dental</td><td>6.03</td><td>Fabricação e estabilização de componentes personalizados do suporte do sprayer DESI</td></tr><tr><td>Xcalibur software</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4.7</td><td>Controle do instrumento, configuração do método Orbitrap e aquisição de dados espectrais de massa</td></tr></tbody></table>

imagem por espectrometria de massa de célula Única usando ionização por eletrospray por dessorção acoplada a espectrômetros de massa orbitrap

Single-Cell Mass Spectrometry Imaging Using Desorption Electrospray Ionization Coupled To Orbitrap Mass Spectrometers

Imagem por Espectrometria de Massa de Célula Única usando Ionização por Eletrospray por Dessorção Acoplada a Espectrômetros de Massa Orbitrap

Desorption electrospray ionization&#8211;mass spectrometry imaging (DESI&#8211;MSI) enables ambient, matrix-free molecular imaging with minimal sample ...

single-cell-mass-spectrometry-imaging-using-desorption-electrospray

Research

JoVE Journal

Chemistry

Química

Dessorção de espectrometria de massa com ionização por electropulverização (DESI-MS) é um método pelo qual as amostras do ambiente, incluindo os tecidos biológicos, pode ser trabalhada com a preparação da amostra mínima. Por rastering a amostra abaixo da sonda de ionização, esta técnica baseada em pulverizador fornece resolução espacial suficiente para discernir as características moleculares de interesse dentro de cortes de tecido.

Imagem de tecidos biológicos por dessorção ionização electrospray Espectrometria de Massa

Linhas celulares de cancro imortalizadas pode ser cultivada como culturas de células em 3D, um modelo valioso para a pesquisa biológica. Este protocolo descreve imaging espectrometria de massa de culturas de células em 3D, incluindo melhorias na plataforma de preparação de amostras. O objetivo deste protocolo é para instruir os usuários a preparar culturas de células em 3D para análise de imagem espectrometria de massa.

Amostra Estratégias Preparação para Mass Spectrometry imagem da cultura celular 3D Models

Aqui, apresentamos protocolos para realizar imagens de espectrometria de massa ambiente (MSI) de tecidos e análise de MS de célula única viva (SCMS) in-situ usando a sonda única, que é um dispositivo multifuncional miniaturizado para análise de MS.

Aplicações da sonda Individual: Imagem Espectrometria de Massa e Análise única célula sob condições ambientais

Uma fonte de imagem de espectrometria de massa (MSI) operada à pressão atmosférica foi desenvolvida acoplando dessorção a laser de infravermelho médio e pós-ionização por eletrospray. A matriz de gelo exógena foi usada como matriz de absorção de energia para facilitar a dessorção ressonante do material relacionado ao tecido. Este manuscrito fornece um protocolo passo a passo para a realização de IR-MALDESI MSI de camundongos neonatais de corpo inteiro.

Whole-body Espectrometria de Massa de imagem por infravermelhos matriz assistida por laser de Dessorção Ionização por Electrospray (IR-MALDESI)

Caracterização do Proteome de leitos microvasculares oculares é crucial para a compreensão aprofundada de muitas patologias oculares em seres humanos. Este estudo demonstra um método eficaz, rápido e robusto para a extração de proteínas e preparação da amostra de pequenos vasos sanguíneos, empregando porcinos curtas posteriores artérias ciliares como vasos de modelo para análise proteômica de espectrometria de massa-base.

Preparação da amostra para análise de Proteomics baseados em massa-espectrometria de Microvessels Ocular

Uma plataforma integrada da manipulação da pilha é desenvolvida para o uso conjuntamente com uma instalação de espectrometria maciça da único-ponta de prova para a análise em linha de pilhas individuais da suspensão circunstâncias ambientais.

Plataforma integrada da manipulação da pilha acoplada com a único-ponta de prova para a análise da espectrometria maciça das drogas e dos metabolitos em únicas pilhas da suspensão

Este artigo introduz métodos de preparação de amostras para um método analítico único em tempo real baseado na espectrometria de massa ambiente. Este método nos permite realizar a análise em tempo real das moléculas biológicas in vivo sem nenhum pré-tratamento especial.

Preparação de amostras para espectrometria de ionização de eletrospray de sonda

A espectrometria de mobilidade de íons (IMS) é um complemento interessante à espectrometria de massa para a caracterização de biomoléculas, notadamente por ser sensível ao isomerismo. Este protocolo descreve um experimento tandem IMS (IMS/IMS), que permite o isolamento de uma molécula e a geração dos perfis de mobilidade de seus fragmentos.

Usando um espectrômetro de mobilidade de íons cíclicos para experimentos de mobilidade de íons tandem

Descrevemos aqui uma caracterização proteômica baseada em espectrometria de massa de linhagens celulares com destino tecidual conhecido no embrião do vertebrado Xenopus laevis .

Proteômica por Espectrometria de Massas Guiada por Linhagem Celular no Embrião em Desenvolvimento (Rã)

Este protocolo descreve o uso de microMS para espectrometria de massa MALDI-2 de célula única guiada por fluorescência, permitindo um perfil molecular aprimorado de células neuronais primárias de ratos.

Dessorção/ionização a laser assistida por matriz guiada por fluorescência com espectrometria de massa de postionização induzida por laser de células neurais de ratos individuais

Este protocolo visa preservar metabólitos celulares para espectrometria de massa de célula única (SCMS), combinando lavagem de solução salina volátil, têmpera rápida de nitrogênio líquido, liofilização e armazenamento de -8 °C. Isso demonstra que a extinção do nitrogênio líquido é essencial para manter os perfis de metabólitos, enquanto o armazenamento refrigerado prolongado deve ser minimizado para evitar alterações metabólicas.

Preparação de amostras para estudos metabolômicos de espectrometria de massa de célula única: lavagem, têmpera, secagem e armazenamento de células combinadas

University of Oklahoma.  Este protocolo descreve a imagem por espectrometria de massa de célula única de células OVCAR-8 usando ionização por eletrospray por dessorção acoplada a espectrômetros de massa Orbitrap para análise metabolômica de alta resolução espacial.

Imagem por Espectrometria de Massa de Célula Única usando Ionização por Eletrospray por Dessorção Acoplada a Espectrômetros de Massa Orbitrap

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