Name: Preparação de vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e polímero de membrana, proteína e lipídio (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-08-07T15:55:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Aprenda a preparar vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e lipídio funcionalizadas com proteínas de membrana usando o copolímero PDMS-g-PEO. Este método possibilita aplicações avançadas em sistemas de liberação de fármacos e biologia sintética.

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	<li>Zhao Z,et al. Super-Resolution Imaging of Highly Curved Membrane Structures in Giant Vesicles Encapsulating Molecular Condensates. AdvMater. 2022;34(4):2106633.</li>
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<table><tbody><tr><td>&Auml;KTA pure&trade; chromatography system</td><td>Cytiva</td><td>29018224</td><td></td></tr><tr><td>18:1 Liss Rhod PE</td><td>Avanti Research</td><td>810150</td><td></td></tr><tr><td>8 well chambered coverglass</td><td>Cellvis</td><td>C8-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>Amicon Ultra 0.5 mL Centrifugal Filters</td><td>Sigma Aldrich</td><td>UFC5030</td><td></td></tr><tr><td>ATTO 643 NHS ester</td><td>ATTO-TEC</td><td>AD 643-31</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Beads SM-2</td><td>Bio-Rad</td><td>1523920</td><td></td></tr><tr><td>Cholic acid-Na-salt (sodium cholate)</td><td>Serva</td><td>361-09-1</td><td></td></tr><tr><td>Coenzyme Q1</td><td>TargetMol</td><td>TGM-T19594</td><td></td></tr><tr><td>Confocal microscope STELLARIS 5</td><td>Leica Microsystems</td><td>603810</td><td></td></tr><tr><td>DTT (Dithiothreitol)</td><td>Merck</td><td>10197777001</td><td></td></tr><tr><td>Fine Tip Ultra Micro Pastette</td><td>Pastette</td><td>LW4243</td><td></td></tr><tr><td>HPTS (pyranine, 8-Hydroxypyrene-1,3,6-Trisulfonic Acid, Trisodium Salt)&nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>6358-69-6</td><td></td></tr><tr><td>ITO-coated glass slides (25&times;75&times;1.1 mm, &le;20 Ohm/sq.)</td><td>pgo</td><td>CEC020S</td><td></td></tr><tr><td>LAS X software</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/products/microscope-software/p/leica-las-x-ls/</td><td></td></tr><tr><td>Mini centrifuge MCF-2360</td><td>LMS</td><td>24572</td><td></td></tr><tr><td>Mini-extruder</td><td>Avanti Research</td><td>610000</td><td></td></tr><tr><td>Oxytherm+P system</td><td>Hansatech Instruments</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>Plasma cleaner (benchtop)</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-32G-2</td><td></td></tr><tr><td>Polycarbonate membranes 0.1 &mu;m</td><td>Avanti Research</td><td>610005</td><td></td></tr><tr><td>Press-to-seal silicone isolator (round, 20 mm diameter, 1 mm depth)</td><td>Grace Bio-Labs&nbsp;</td><td>41161502</td><td></td></tr><tr><td>Silicone spacers (round, 24.2 mm outer diameter, 14.3 mm inner diameter, 1.8 mm depth)</td><td></td><td></td><td>laboratory-made, cut from silicone sheet</td></tr><tr><td>Soy PC (95%)</td><td>Avanti Research</td><td>441601</td><td></td></tr><tr><td>Specord 50 PLUS spectrophotometer</td><td>Analytik Jena</td><td>823-0200P-3</td><td></td></tr><tr><td>Superdex 200 10/300 GL column (column L &times; I.D. 30 cm &times; 10 mm)</td><td>Cytiva</td><td>28-9909-44</td><td></td></tr><tr><td>Test tube shaker (2800 rpm)</td><td>IKA Lab Dancer</td><td>3365000</td><td></td></tr><tr><td>Thermomixer comfort 5355</td><td>Eppendorf</td><td>5355000.011</td><td></td></tr><tr><td>Xiameter OFX-5329 (PDMS-g-PEO; MW 3000)</td><td>Dow Corning</td><td>000000000004109892</td><td></td></tr><tr><td>Zetasizer Nano ZS&nbsp;</td><td>Malvern Panalytical</td><td>ZEN3600</td><td></td></tr></tbody></table>

preparação de vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e polímero de membrana, proteína e lipídio

Preparation of Membrane Protein&#8211;Functionalized Polymer and Polymer/Lipid Hybrid Large and Giant Unilamellar Vesicles

Preparação de vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e polímero de membrana, proteína e lipídio

Vesicles formed from amphiphilic copolymers, alone or blended with phospholipids, offer superior mechanical and chemical stability compared to ...

Our research focuses on building artificial cells from the bottom up, combining natural and synthetic materials to form fully functional biomimetic systems. Our protocol for building protein-functionalized polymer vesicles applies to drug delivery, construction of artificial cells, nanoreactors and biosensors.To begin, use positive-displacement pipettes with solvent-resistant tips or gas-tight glass syringes to transfer the polymer, lipid and fluorescent dye solutions dissolved in a 2-to-1 mixture of chloroform and methanol into a clean glass vial. Mix the solution thoroughly by gentle vortexing while holding the glass vial upright to ensure homogeneity. Evaporate the organic solvents under a gentle stream of nitrogen in the fume hood for approximately one hour, until a uniform thin film forms on the glass vial wall. If polymersomes are used for reconstitution, supplement the rehydration buffer with 0.1% sodium cholate, then rehydrate the dried film with 1 milliliter of rehydration buffer to obtain a final amphiphile concentration of 5mg/ml. Vortex the glass vial vigorously until the film is completely detached and suspended, forming multilamellar vesicles. Subject the hybrid multi

preparation-membrane-proteinfunctionalized-polymer-polymerlipid

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bioquímica

Um protocolo para a produção, purificação e uso de vesículas de membrana externa (OMV) empacotadas com enzimas, proporcionando maior estabilidade enzimática para implementação em diversas aplicações, é apresentado.

Dirigido Embalagem Proteína da Membrana Externa no interior de vesículas<em&gt; Escherichia coli</em&gt;: Concepção, produção e purificação

Este artigo descreve um método para avaliar as interações e montagens de proteínas integrais de membrana in vitro com vários fatores parceiros em um ambiente lipídico-proximal.

Usando andaime lipossomas para reconstituir interações proteína-proteína Lipid-proximal In Vitro

Vesículas gigantes contendo componentes micrométricos altamente compactados são modelos de células úteis. O método de centrifugação em emulsão água-em-óleo é uma ferramenta simples e poderosa para a preparação de vesículas gigantes com materiais encapsulados.

Preparação de gigantes Vesículas Encapsulamento microesferas por centrifugação de uma emulsão de água-em-óleo

precursor marcação isotópica combinados e marcação isobaric (cPILOT) é uma estratégia proteômica quantitativa que aumenta a capacidade de multiplexação de amostras de etiquetas isobáricos. Este protocolo descreve a aplicação de cPILOT aos tecidos a partir de controlos modelo de rato da doença e do tipo selvagem de um Alzheimer.

Reforçada Amostra Multiplexagem de tecidos utilizando Combinada Precursor isotópica Rotulagem e Isobaric Marcação (cPILOT)

O objetivo do protocolo é preparar o hidrolisado de queratina de penas de galinha por hidrólise alcalina-enzimática e testar se adicionando hidrolisado de queratina em uma base de pomada de cosméticos melhora a função de barreira da pele (aumentando a hidratação e diminuindo a perda de água transepidermal). Os testes são realizados em homens e mulheres voluntários.

Preparação de hidrolisado de queratina de penas de galinha e sua aplicação em cosméticos

Este protocolo descreve um método para o cultivo em grande escala de Caenorhabditis elegans em meios sólidos. Como alternativa à cultura líquida, este protocolo permite a obtenção de parâmetros de diferentes escalas sob cultivo baseado na placa. Isto aumenta a comparabilidade dos resultados, omitindo as diferenças morfológicas e metabólicas entre cultura de meios líquidos e sólidos.

Baseados na placa de cultivo em grande escala de Caenorhabditis elegans: preparação da amostra para o estudo de alterações metabólicas em Diabetes

Este protocolo descreve uma abordagem de baseados em espectroscopia de flutuação de fluorescência para investigar interações entre proteínas mediando as interações célula-célula, ou seja, as proteínas localizadas em cruzamentos de célula, diretamente em células vivas. Nós fornecemos orientações detalhadas na calibração de instrumentos, aquisição de dados e análise, incluindo correcções de fontes possível artefato.

Um ensaio de espectroscopia de flutuação de fluorescência das interações da proteína-proteína em contatos do celular

Um procedimento passo a passo é descrito para a imobilização sem rótulo de exosomas e vesículas extracelulares de amostras líquidas e sua imagem por microscopia de força atômica (AFM). As imagens de AFM são usadas para estimar o tamanho das vesículas na solução e caracterizar outras propriedades biofísicas.

Imagens de vesículas extracelulares por microscopia de força atômica

Descrevemos um método para a caracterização de transportadores de membrana sufrágio movidos a prótons em preparações de vesículas de membrana produzidas pela expressão heterologous em E. coli e lise de células usando uma imprensa francesa.

Caracterização de transportadores de membrana por expressão heterologous em E. coli e produção de vesículas de membrana

Neste protocolo, apresentamos um fluxo de trabalho otimizado, que combina uma preparação eficiente e rápida de amostras de muitas amostras. Além disso, fornecemos um guia passo-a-passo para reduzir as variações analíticas para avaliação de alto rendimento de estudos metabólicos de GWAS.

Estudos de associação multi-omics em larga escala (Mo-GWAS): Diretrizes para preparação e normalização de amostras

Aprenda a preparar vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e lipídio funcionalizadas com proteínas de membrana usando o copolímero PDMS-g-PEO. Este método possibilita aplicações avançadas em sistemas de liberação de fármacos e biologia sintética.

Preparação de vesículas unilamelares grandes e gigantes híbridas de polímero e polímero de membrana, proteína e lipídio

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