Name: Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-29T12:11:00.000+00:00
Duration: 7 min 6 s
Description: Aprenda os princípios da tecnologia de recombinase site-specific (SSR) e o sistema Cre/lox para engenharia genômica avançada. Este método permite mutagênese condicional com maior flexibilidade que as estratégias tradicionais.

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princípios do site-specific recombinase (ssr) tecnologia

Principles of Site-Specific Recombinase (SSR) Technology

Site-specific recombinase tecnologia (SSR) permite a manipulação da estrutura dos genes para explorar a função do gene e se tornou uma ferramenta integrante da biologia molecular. Site-specific recombinases são proteínas que se ligam a seqüências de DNA-alvo distintos. O sistema Cre / lox foi descrita pela primeira vez em bacteriófagos durante a década de 1980. Cre recombinase é uma topoisomerase tipo I que catalisa site-specific recombinação de DNA entre dois loxP (locus de X-over P1) sites. O sistema Cre / lox não requer cofatores. Seqüências distintas LoxP contêm sítios de ligação para recombinases Cre que envolvem uma seqüência núcleo direcional onde a recombinação e rearranjo ocorre. Quando as células contêm sites loxP e expressar a recombinase Cre, um evento de recombinação ocorre. Dupla fita de DNA é cortada em ambos os locais loxP pelo Cre recombinase, reorganizados, e ligados (&quot;tesoura e cola&quot;). Produtos do evento de recombinação depende da orientação relativa das seqüências assimétrica. Tecnologia SSR é freqüentemente usado como uma ferramenta para explorar a função do gene. Aqui, o gene de interesse é flanqueado com Cre-alvo locais loxP (&quot;floxed&quot;). Os animais são então cruzados com animais expressando a recombinase Cre sob o controle de um promotor de tecidos específicos. Nos tecidos que expressam a recombinase Cre se liga a seqüências alvo e extirpa o gene floxed. Deleção do gene controlado permite a investigação da função dos genes em tecidos específicos e em momentos distintos. Análise da função do gene empregando tecnologia SSR --- mutagênese condicional - tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock-outs onde deleção do gene é freqüentemente letal.

O advento da tecnologia local específico recombinase (SSR) eo sistema Cre / lox tem levado a inúmeros avanços em biologia molecular, e provou-se como uma valiosa ferramenta para avaliar a função do gene em animais transgênicos. Esta entrevista aborda o mecanismo de recombinação sítio específica por Ciclização recombinase (CRE) e como o uso desta enzima tem levado ao desenvolvimento de mutagênese condicional, que tem vantagens significativas sobre os tradicionais knock out estratégias.

Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia

A tecnologia de recombinase sítio-específica (SSR) permite a manipulação da estrutura gênica para explorar a função gênica e tornou-se uma ferramenta integral da biologia molecular...

Olá, meu nome é Frank Buchholz. Sou líder de grupo aqui no Instituto Max PL de Biologia Celular e Genética Molecular. E o nosso trabalho é mantido.Temos dois aspectos em nosso trabalho. Um está relacionado à triagem de RNA I. O outro está relacionado ao desenvolvimento de recombinase específica de sítio para engenharia avançada do genoma.Minha formação é de bióloga, uma bióloga molecular, e estudei genética na biologia. Em seguida, realizei meu doutorado nos Laboratórios Europeus de Biologia Molecular em Heidelberg e depois meu pós-doutorado em São Francisco na UCSF com Mike Bishop, trabalhando em modelos animais de leucemia. O Instituto Max Puncture aqui em Dresden tenta combinar, digamos, pelo menos dois aspectos diferentes, que são biólogos do desenvolvimento e biólogos celulares, com o objetivo principal, creio eu, do que se poderia dizer ser o tema básico deles: tentar compreender como as células formam tecidos.Esse é basicamente o objetivo geral do instituto aqui em Ston. Então trabalhamos em dois campos, basicamente. Um dos campos diz respeito à realização de telas de RNAi, tentando identificar funções novas de genes previamente não caracterizados em processos biológicos.O o

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Biology

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Atuais estratégias de HIV-1 agem para suprimir o ciclo de vida viral, mas não efetivamente erradicar a infecção. Aqui, demonstramos que uma recombinase engenharia podem eficientemente consumo DNA integrado HIV-1 proviral do genoma das células infectadas.

Entrevista: HIV-1 DNA proviral Excisão Usando um Recombinase Evolved

A proteína de levedura nucleóide mitocondrial, Mgm101, é uma proteína de recombinação de tipo rad52 que forma anéis grandes oligoméricas. Um protocolo é descrito para preparar Mgm101 solúvel recombinante utilizando a proteína de ligação à maltose (MBP), acoplado com a estratégia de marcação de permuta catiónica e a cromatografia de exclusão de tamanho.

Preparação do Mgm101 recombinação de proteínas por Estratégia Tagging baseado MBP

Metodologias de direcionamento de genes podem ser usadas para gerar camundongos transgênicos com alelos knockout, knock-in e marcados.  Aqui, descrevemos um método aprimorado de recombinação em E. coli, que chamamos de 'subclonagem mais inserção', que pode ser usado para gerar vetores de direcionamento de genes personalizados rapidamente.

Subclonagem Além disso Inserção (SPI) - Um Método recombineering Novel para a construção rápida de Gene Segmentação Vetores

O minivetor de DNA linear covalentemente fechado (LCC) (ministring de DNA) é um vetor de entrega de genes não viral que oferece alta eficiência de transfecção e é relevante para qualquer aplicação de entrega de DNA. O sistema de produção é simples, rápido e escalável in vivo. O protocolo a seguir fornece instruções visuais passo a passo para a produção de ministrings de DNA.

Produção de Double-stranded DNA Ministrings

Aqui relatamos um método de edição gene rápida e eficiente com base em RMCE no locus AAVS1 de humanos pluripotentes células estaminais (hPSCs) que melhora a sistemas descritos anteriormente. Usando esta técnica, linhas isogênicas pode ser rápida e confiável gerada para estudos comparativos adequados, facilitar a investigação mediada por transgênese com hPSCs.

Geração rápida e eficiente de células-tronco pluripotentes Recombinante Humana pela recombinase mediada troca cassete no<em&gt; AAVS1</em&gt; Locus

Aqui, apresentamos um protocolo detalhado para identificar os eventos de recombinação homóloga que ocorreram em células-tronco embrionárias do mouse usando a mancha do Sul e/ou PCR. Este método é exemplificado pela geração de nonmuscle myosin II substituição genética rato modelos usando embrionária baseada em células-tronco homóloga mediada por recombinação segmentação tecnologia tradicional.

Identificação de eventos de recombinação homóloga em células-tronco embrionárias de camundongo usando Southern Blotting e reação em cadeia da polimerase

Endonucleases de restrição com nova especificidade de seqüência podem ser desenvolvidas a partir de enzimas que reconhecem uma seqüência parcialmente degenerada. Aqui fornecemos um protocolo detalhado que usamos com sucesso para alterar a especificidade da seqüência da enzima NlaIV. Os ingredientes-chave do protocolo são a compartimentação in vitro da reação de transcrição/tradução e a seleção de variantes com novas especificidades de seqüência.

In Vitro Evolução dirigida de uma endonuclease de restrição com especificidade mais rigorosa

A Biotinilação Iluminada Restrita por Localização específica (ALIBi) é um método optogeneticamente ativado inovador desenvolvido para marcar e purificar populações subcelulares de ribossomos para sequenciamento a jusante e análise proteômica.

Isolamento de Subpopulações Subcelulares de Ribossomo Baseado em Biotinilação Iluminada Aprimorada por Localização Específica de Etiquetas Peptídicas Recombinantes

Aqui nós relatamos a geração de Tre recombinase através dirigido evolução, molecular. Tre recombinase reconhece uma seqüência alvo pré-definido dentro das sequências LTR do pró-vírus HIV-1, resultando na excisão e erradicação do provírus de células humanas infectadas. Enquanto ainda em sua infância, dirigido a evolução molecular irá permitir a criação de enzimas personalizadas que servirão como ferramentas de cirurgia e medicina molecular molecular.

Evolução Molecular do Recombinase Tre

Antes de tentar a cirurgia, um cirurgião novo deve ter uma formação básica em técnicas cirúrgicas e conceitos. Este artigo apresenta considerações básicas cirúrgica com ênfase em roedores.

Princípios de Cirurgia de roedores para o Cirurgião Nova

Aprenda os princípios da tecnologia de recombinase site-specific (SSR) e o sistema Cre/lox para engenharia genômica avançada. Este método permite mutagênese condicional com maior flexibilidade que as estratégias tradicionais.

Princípios do site-specific Recombinase (SSR) Tecnologia

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