Name: Um método definido à base de hidrogel para gerar organoides mamários humanos tridimensionais que recapitulam a morfogênese mamária (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: Aprenda a gerar organoides mamários humanos 3D usando hidrogel definido com colágeno, laminina e fibronectina. Este método recapitula a morfogênese mamária e permite estudar plasticidade epitelial e carcinogênese precoce.

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<table><tbody><tr><td>15 mL conical tubes</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td>Tubos estéreis para processamento de tecidos e centrifugação</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer</td><td>VWR</td><td>732-2757</td><td>Dispositivo de filtração para preparação de suspensão de células únicas</td></tr><tr><td>40 &mu;m cell strainer for low volumes</td><td>Bel-Art</td><td>136800040</td><td>Dispositivo de filtração para preparação de suspensão de células únicas</td></tr><tr><td>Automated cell counter</td><td>Bio-Rad</td><td>1450102</td><td>Dispositivo usado para contar células e determinar a viabilidade</td></tr><tr><td>Bovine pituitary extract</td><td>Thermo Scientific</td><td>13028014</td><td>Suplemento para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Cell counting slides</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0011</td><td>Lâminas de câmara dupla usadas para contagem de células</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Centrífuga de mesa/s precisa ter pelo menos capacidade de velocidade de 500 x g e acomodação de tubos de 15 mL e 1,5 mL. </td></tr><tr><td>Collagen I</td><td>Millipore Sigma</td><td>08-115</td><td>Proteína da matriz extracelular usada para formação de hidrogel</td></tr><tr><td>Collagenase A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11088793001</td><td>Enzima usada para dissociação de tecidos</td></tr><tr><td>Cryovials</td><td>Corning</td><td>976171</td><td>Frascos estéreis para armazenamento criogênico de amostras</td></tr><tr><td>Culture vessels (e.g., chamber slides, multiwell plates)</td><td>Corning</td><td>354104 354108 3603</td><td>Plataformas para deposição de hidrogel e cultura de organoides.</td></tr><tr><td>Dimethyl sulfoxide</td><td>Millipore Sigma</td><td>317275</td><td>Crioprotetor usado em meio de congelamento</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche</td><td>4942078001</td><td>Enzima usada para dissociação secundária de tecidos</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche</td><td>10104159001</td><td>Enzima usada durante a dissociação celular.</td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Gibco</td><td>10437</td><td>Suplemento sérico usado em meio de lavagem e neutralização</td></tr><tr><td>Fibronectin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F2006</td><td>Componente da proteína da matriz extracelular</td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td>Suplemento para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Human epidermal growth factor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Suplemento para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H0888</td><td>Suplemento para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Hyaluronic acid</td><td>Millipore Sigma</td><td>385908</td><td>Componente da matriz extracelular para formulação de hidrogel</td></tr><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Enzima usada para dissociação de tecidos</td></tr><tr><td>Incubator</td><td>Thermo Scientific</td><td>3598</td><td>Dispositivo usado para incubação de cultura de tecidos</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Suplemento para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Gibco</td><td>23017-015</td><td>Componente da proteína da matriz extracelular</td></tr><tr><td>Mammary epithelial basal medium</td><td>Thermo Scientific</td><td>M171500</td><td>Meio de crescimento para células epiteliais</td></tr><tr><td>Microcentrifuge tubes (1.5 mL)</td><td>Thermo Scientific</td><td>3451</td><td>Tubos usados para reações de pequeno volume</td></tr><tr><td>Orbital rotator</td><td>Thermo Scientific</td><td>400110</td><td>Rotador usado para dispersão de tecidos durante a dissociação enzimática</td></tr><tr><td>P1000 pipette</td><td>Gilson</td><td>P1000</td><td>Dispositivo usado para misturar e transferir volumes de até 1.000 &mu;L</td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin</td><td>Thermo Scientific</td><td>15140122</td><td>Suplemento antibiótico para meio de células epiteliais</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline</td><td>Gibco</td><td>20012-027</td><td>Solução tamponada com fosfato usada para lavagem e enxágue</td></tr><tr><td>Precision balance</td><td>Mettler Toledo</td><td>ML303E</td><td>Balança usada para pesagem de tecidos</td></tr><tr><td>Serological pipette</td><td>Nunc</td><td>170356N</td><td>Pipeta usada para colher células epiteliais não aderentes</td></tr><tr><td>Sodium hydroxide (1 N)</td><td>Fisher Chemical</td><td>SS261</td><td>Reagente usado para neutralização de colágeno</td></tr><tr><td>Sterile scalpels</td><td>Bard-Parker</td><td>372615</td><td>Ferramentas usadas para picar mecanicamente tecidos</td></tr><tr><td>Trypan blue solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td>Corante usado para avaliação da viabilidade celular</td></tr><tr><td>Trypsin (0.25%)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>Reagente enzimático usado para dissociação celular</td></tr><tr><td>Water bath (37 &deg;C)</td><td>VWR</td><td>10LA</td><td>Dispositivo usado para descongelamento controlado de amostras</td></tr></tbody></table>

um método definido à base de hidrogel para gerar organoides mamários humanos tridimensionais que recapitulam a morfogênese mamária

A Defined Hydrogel-Based Method For Generating Three-Dimensional Human Breast Organoids That Recapitulate Mammary Morphogenesis

Um método definido à base de hidrogel para gerar organoides mamários humanos tridimensionais que recapitulam a morfogênese mamária

The development of physiologically relevant human model systems that recapitulate tissue architecture and cell-state dynamics remains a major challenge in ...

Nossa pesquisa concentra-se no desenvolvimento mamário humano e na lactação, na organização tecidual, nas exposições ambientais e nos fatores genéticos que levam a alterações biológicas no câncer. Os modelos existentes não representam com precisão a arquitetura do tecido mamário humano, o cronograma de desenvolvimento e o microambiente. Este protocolo preenche a lacuna entre modelos bidimensionais e modelos animais em um sistema humano.Obtenha tecido mamário humano digerido criopreservado por pelo menos 24 horas. Mergulhe imediatamente o tubo de criopreservação até a tampa em banho-maria a 37 graus Celsius e descongele rapidamente por um minuto para minimizar a morte celular. Após descongelamento completo, transfira o conteúdo do tubo de criopreservação para um tubo cônico de 15 mililitros contendo 10 mililitros de meio de crescimento de epitélio mamário, ou MEGM, e centrifugue a 250g por cinco minutos.Após descartar o sobrenadante, re-suspenda o pellet em 500 microlitros de solução enzimática de dissociação pré-aquecida a 37 graus Celsius contendo 0,25% de tripsina. Transfira a suspensão para um tubo microcentrífugo de 1,5 mililitro. Usando uma pipeta P1000, triture a amostra 20 v

a-defined-hydrogel-based-method-for-generating-three-dimensional

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Descrevemos um modelo de cultura 3D do epitélio da mama humana que é adequado para estudar a ação hormonal.

Um modelo de cultura 3D Hormone-responsive da Human glândula mamária Epitélio

Este manuscrito descreve uma técnica suave baseado em litografia para engenharia matrizes uniformes de tridimensional (3D) de tecidos epiteliais geometria definida rodeados por matriz extracelular. Este método é favorável a uma ampla variedade de tipos de células e contextos experimentais e permite o rastreio de alto rendimento de réplicas idênticas.

Engenharia tridimensionais tecidos epiteliais incorporado dentro Matriz Extracelular

Organóides desenvolvidos a partir de glândulas mamárias do camundongo foram irradiados e caracterizados para avaliar características epiteliais e interações com células imunes. Os organóides irradiados podem ser usados para melhor avaliar as interações célula-célula que podem levar ao recrutamento de células tumorais em tecido normal irradiado.

Crescimento e caracterização de organóides irradiados de glândulas mamárias

Um protocolo para gerar os organóides endometrial preliminares humanos que consistem em pilhas epithelial e stromal e retêm características do tecido endometrial nativo é apresentado. Este protocolo descreve métodos da aquisição uterine do tecido ao processamento histologic de organoids endometrial.

Geração de organóides endometriais primários humanos multicelulares

A glândula mamária é uma estrutura bicamada, composta por células epiteliais mioepiteleliais externas e internas. Apresentado é um protocolo para preparar organóides utilizando a tripspsinização diferencial. Este método eficiente permite que os pesquisadores manipulem separadamente esses dois tipos de células para explorar questões sobre seus papéis na forma e função da glândula mamária.

Geração de Organóides Mammary mosaicos por Trypsinização Diferencial

O objetivo deste protocolo é bioimprimir diretamente as células epiteliais mamárias como esferoides multicelulares em redes endoteliais pré-formadas para criar rapidamente modelos de cocultura 3D de mama endotelial que podem ser usados para estudos de triagem de medicamentos.

Bioimpressão direta de esferoides de mama multicelular 3D em redes endoteliais

O objetivo deste protocolo é explicar e demonstrar o desenvolvimento de um modelo microfluido tridimensional (3D) de tecido cardíaco humano altamente alinhado, composto por cardiomiócitos derivados de células-tronco co-cultivados com fibroblastos cardíacos (CFs) dentro de um hidrogel biomimético, à base de colágeno, para aplicações em engenharia de tecido cardíaco, triagem de medicamentos e modelagem de doenças.

Desenvolvimento de tecido cardíaco humano organizado 3D dentro de uma plataforma microfluida

Este protocolo discute uma abordagem para a geração de organoides epiteliais a partir de tecido mamário primário normal e tumoral através da centrifugação diferencial. Além disso, estão incluídas instruções para a cultura tridimensional, bem como imagens imunofluorescentes de organoides incorporados.

Gerando e Imageando Organoides Epitéliares de Camundongos e Humanos a partir de Tecido Mamário Normal e Tumoral Sem Passagem

Aqui, descrevemos um protocolo para a formação de organoides de timo derivados de iPSC humanos cultivados em hidrogéis de fibrina 3D com o objetivo de apoiar a maturação e manutenção prolongada das células epiteliais tímicas (TEC), bem como a timopoiese in vitro.

Formação de organoides do timo humano em hidrogéis de fibrina tridimensionais

Há uma necessidade crítica de modelos 3D de câncer que capturem crosstalk heterocelular para estudar a metástase do câncer. Nosso estudo apresenta a geração de estroma-epitelial heteromulticelular em um ambiente scaffold e scaffold-free que pode ser usado para estudar a invasão e as distribuições espaciais celulares.

Células estromais heteromulticelulares em culturas 3D sem andaimes de células epiteliais cancerígenas para impulsionar a invasão

Aprenda a gerar organoides mamários humanos 3D usando hidrogel definido com colágeno, laminina e fibronectina. Este método recapitula a morfogênese mamária e permite estudar plasticidade epitelial e carcinogênese precoce.

Um método definido à base de hidrogel para gerar organoides mamários humanos tridimensionais que recapitulam a morfogênese mamária (Vídeo) | JoVE Journal

Um método definido à base de hidrogel para gerar organoides mamários humanos tridimensionais que recapitulam a morfogênese mamária

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