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<ol>
	<li>Vogel, J. W. et al. Spread of pathological tau proteins through communicating neurons in human Alzheimer&#8217;s disease. Nat Commun 11, 2612 (2020).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>Accutase</td><td>Thermo Scientific</td><td>A1110501</td><td></td></tr><tr><td>Conical Sterile Polypropylene Centrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-565-268</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix, Phenol Red-free, LDEV-free</td><td>Corning</td><td>356231</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Thermo Scientific</td><td>11330057</td><td></td></tr><tr><td>Doxycycline</td><td>Clontech</td><td>631311</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Scientific</td><td>14-190-250</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX</td><td>Thermo Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>Graphing Software</td><td>GraphPad Prism (ou similar)</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Human GM-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-03</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut DMEM</td><td>Thermo Scientific</td><td>10829018</td><td></td></tr><tr><td>Luminescent Plate Reader</td><td>SpectraMax i3x (ou similar) - Molecular Devices</td><td>n/a</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuge Tubes</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-682-002</td><td></td></tr><tr><td>Microplate, 96 Well, PS, Half-area, White</td><td>Greiner</td><td>675075</td><td></td></tr><tr><td>mTeSR Plus</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>100-0276</td><td></td></tr><tr><td>Nano-Glo HiBiT Lytic Detection System</td><td>Promega</td><td>N3030</td><td></td></tr><tr><td>Poly-L-Lysine hydrobromide&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>ICN15017750</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human IL-34</td><td>Thermo Scientific</td><td>200-34</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human M-CSF</td><td>Thermo Scientific</td><td>300-25</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant Human TGF-&beta;1</td><td>Thermo Scientific</td><td>100-21C</td><td></td></tr><tr><td>Surface Treated Sterile Tissue Culture Plates</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB012927</td><td></td></tr><tr><td>Tau-HiBiT protein</td><td>In house</td><td>n/a</td><td>Proteína Tau com um tag peptídeo VSGWRLFKKIS</td></tr><tr><td>Trypsin Inhibitor</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T9128</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Thermo Scientific</td><td>5-200-072</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 dihydrochloride</td><td>Bio-techne</td><td>1254</td><td></td></tr></tbody></table>

um ensaio de complementação com lúciferase dividida para medição temporalmente resolvida da depuração de tau na microglia

A Split-Luciferase Complementation Assay for Temporally Resolved Measurement of Tau Clearance in Microglia

Um ensaio de complementação com lúciferase dividida para medição temporalmente resolvida da depuração de tau na microglia

As the resident immune cells of the central nervous system, microglia are central regulators of brain homeostasis and key mediators of neurodegenerative ...

a-split-luciferase-complementation-assay-for-temporally-resolved

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

O vídeo demonstra um ensaio de citometria de fluxo de transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) para detectar a atividade de semeadura de agregados de proteínas isolados de amostras biológicas. Células de mamíferos que expressam proteínas repórter de tau são incubadas com complexos de transdução de lipossomas contendo sementes de tau. Essas sementes medeiam a agregação das proteínas repórteres, levando à geração de um sinal positivo de FRET no citômetro de fluxo.

Uma técnica de citometria de fluxo FRET para detectar a agregação de proteína repórter induzida por sementes de Tau

Este vídeo mostra um ensaio baseado em células quantificando a captação de Tau pela microglia murina usando agregados de Tau marcados com fluorescência sensíveis ao pH, analisados por meio de classificação de células ativadas por fluorescência para uma avaliação quantitativa.

Um ensaio baseado em células para avaliar a captação da proteína tau pela microglia

A transferência de célula para célula de agregados proteicos, ou sementes proteopáticas, pode estar subjacente à progressão da patologia em doenças neurodegenerativas. Aqui, é descrito um novo ensaio de citometria de fluxo FRET que permite a detecção específica e sensível da atividade de semeadura de amostras recombinantes ou biológicas.

Detecção sensível de Proteopathic Sementeira Atividade com FRET Citometria de Fluxo

Aqui, descrevemos a configuração, navegação software e análise de dados para um método espacial e temporalmente precisa de medir a tônica e fásica mudanças glutamato extracelulares in vivo utilizando matrizes de microeletrodos ligado a enzima (MEA).

Utilizando biossensores baseados em Enzyme medir Tonic e Phasic glutamato na doença de Alzheimer rato Models

Estamos com sucesso geraram dois ensaios de substrato específico γ-secretase. Ambos os ensaios cell-based aqui apresentados destinam-se para quantificar o γ-secretase actividades enzimáticas através da saída de repórteres de luciferase de vaga-lume.

Medida quantitativa da proteína precursora amiloide γ-Secretase-mediada e clivagem de entalhe em plataformas de ensaio baseada em célula Luciferase Reporter

Aqui nós descrevemos um baseada em célula de ensaio para avaliar quantitativamente a absorção de tau por microglia com o objectivo de criar uma ferramenta experimental para melhor caracterizar os mecanismos de ação dos anticorpos anti-tau.

Baseada em célula de ensaio para estudar mediada por anticorpos Tau afastamento por Microglia

Este protocolo detalha um procedimento em que as culturas neuronal humanas são transadas com construções lentivirais que codificam para o Tau humano do mutante. As culturas transadas exibem agregados Tau e patologias associadas.

Um modelo in vitro para estudar a agregação Tau usando transdução mediada por Lentivirus de neurônios humanos

Tau é uma proteína neuronal presente tanto no citoplasma, onde liga microtúbulos, e no núcleo, onde exerce funções não convencionais, incluindo a modulação dos genes relacionados à doença de Alzheimer. Aqui, descrevemos um método para investigar a função do tau nuclear, excluindo quaisquer interferências provenientes de Tau citoplasmamic.

Modulação da localização subcelular tau como uma ferramenta para investigar a expressão de genes relacionados à doença

Aqui, demonstramos como combinar a transfecção de neurônios primários de roedores do hipocampo com imagens confocais de células vivas para analisar os efeitos patológicos induzidos por proteínas no transporte axonal e identificar vias mecanicistas que medeiam esses efeitos.

Usando imagens de células vivas para medir os efeitos de proteínas patológicas no transporte axonal em neurônios primários do hipocampo

Este artigo demonstra um método para visualizar e quantificar a motilidade e o contato da microglia com pontos pós-sinápticos na retina usando microscopia confocal de disco giratório.

Imagem ao vivo e caracterização da dinâmica da microglia e interações com sinapses na retina murina doente

University of Massachusetts Amherst.  Descrevemos uma plataforma quantitativa sensível e resolvida no tempo para medir a eliminação da tau extracelular em microglia derivada de células-tronco pluripotentes induzidas humanas (iPSC), utilizando um sistema de luminescência baseado em microplacas. Essa abordagem permite a detecção sensível da cinética de degradação de tau em formato micropoço, possibilitando interrogações de alta taxa do manuseio de tau sob várias ...

Um ensaio de complementação com lúciferase dividida para medição temporalmente resolvida da depuração de tau na microglia

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