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<table><tbody><tr><td>Artificial saliva</td><td>Solarbio, China</td><td>A7990</td><td></td></tr><tr><td>Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>5000006</td><td>Para o ensaio de Bradford</td></tr><tr><td>Coomassie blue</td><td>Abcam, UK</td><td>ab119211</td><td>Para visualização de bandas de proteínas</td></tr><tr><td>Cortisol ELISA Kit</td><td>Abcam, UK</td><td>ab154996</td><td></td></tr><tr><td>Cortisol LFA</td><td>In-house</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hot plate</td><td>Daihan Scientific, República da Coreia)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone (Cortisol)</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>PHR1014</td><td></td></tr><tr><td>Laemmli sample buffer</td><td>GenDEPOT, USA</td><td>L1200-001</td><td>Para desnaturação de proteínas antes do SDS-PAGE</td></tr><tr><td>Membrane holder</td><td>GVS Filter Technology</td><td>1220950</td><td>Suporte de 13 mm de diâmetro</td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN&reg; Tetra Cell for 0.75 mm Gels</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1658000</td><td>Para eletroforese em gel</td></tr><tr><td>Mucin</td><td>Sigma-Aldrich, USA</td><td>M2378</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 spectrophotometer</td><td>Thermo Fisher Scientific, USA</td><td></td><td>Para o ensaio de proteínas</td></tr><tr><td>PES membranes</td><td>STERLITECH, USA</td><td>PES00313100</td><td>Membran PES de 0,03 mícrons, 13 mm</td></tr><tr><td>Phosphate-buffered saline (PBS)</td><td>DUKSAN, República da Coreia</td><td>LB004</td><td></td></tr><tr><td>Pooled Human Saliva</td><td>Innovative Research Inc., USA</td><td>IRHUSL5ML</td><td></td></tr><tr><td>RBCM</td><td>In-house</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Resolving Gel Buffer for PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610798</td><td>Para preparação de gel de resolução</td></tr><tr><td>Salivette Cortisol</td><td>SARSTEDT, Alemanha</td><td>51.1534.500</td><td>Kit de coleta de saliva</td></tr><tr><td>Stacking Gel Buffer for PAGE</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610799</td><td>Para preparação de gel de empilhamento</td></tr><tr><td>Super&bull;SAL&trade;</td><td>Oasis Diagnostics, USA</td><td>SSAL-601</td><td>Kit de coleta de saliva</td></tr><tr><td>Syringe</td><td>koreavaccine, República da Coreia)</td><td></td><td>Volume de 1 mL</td></tr><tr><td>TEMED</td><td>Bio-Rad, USA</td><td>1610800</td><td>Para polimerização de acrilamida</td></tr></tbody></table>

dispositivo portátil para pré-tratamento de saliva para melhorar a detecção de cortisol

Handheld Device for Saliva Pretreatment to Improve Cortisol Detection

Dispositivo portátil para pré-tratamento de saliva para melhorar a detecção de cortisol

Salivary cortisol detection offers a noninvasive alternative to blood-based analysis. However, its practical implementation remains limited by the ...

Nossa pesquisa concentra-se no pré-tratamento da saliva para melhorar a confiabilidade da detecção de cortisol. Este protocolo pode ser aplicado à análise de biomarcadores baseada em saliva utilizando o ensaio de fluxo lateral. Para começar, misture suavemente a amostra de saliva humana em pool, desidentificada e obtida comercialmente, antes do uso para garantir a homogeneidade.Armazene as amostras de saliva a quatro graus Celsius e utilize-as dentro do período de armazenamento recomendado pelo fornecedor. Reconstitua o pellet de membrana de hemácias de cor rosa pálido ou RBCM preparado e armazenado a 80 graus Celsius conforme um protocolo padrão. Prepare uma membrana de poliéter sulfona ou PES com tamanho de poro de 30 nanômetros e diâmetro de 13 milímetros.Deposite 100 microlitros de solução de RBCM a 2% peso por volume em um lado da membrana de PES. Espalhe ou dispense suavemente a solução gota a gota até que toda a superfície da membrana esteja completamente umedecida. Incube a membrana a 50 graus Celsius por 30 minutos para garantir um revestimento e secagem uniformes.Armazene a membrana revestida em temperatura ambiente e utilize-a no máximo 15 dias após a preparação. Para fabricar o dispositivo SaliFilter, coloque a membrana de PES revestida com RBCM no suporte de filtro designado. Monte o dispositivo conectando firmemente os componentes de entrada e saída.Conecte uma seringa de um mililitro à entrada do dispositivo. Carregue 500 microlitros de saliva na seringa conectada ao dispositivo SaliFilter. Aplique pressão manual suave para passar a amostra de saliva através da membrana por aproximadamente dois minutos.Colete a saliva pré-tratada proveniente da saída e utilize-a imediatamente ou armazene-a a quatro graus Celsius até a análise subsequente. Após a detecção proteica por SDS-PAGE, aplique 150 microlitros de saliva pré-tratada na almofada de amostra da tira de LFA para detecção de cortisol. Deixe a amostra migrar ao longo da tira por 10 minutos.Capture imagens dos resultados do teste usando um smartphone ou sistema de imagem. Arraste e solte o arquivo LFA capturado na janela do software ImageJ. Clique na imagem, escolha a cor e, em seguida, selecione separar canais para dividir os canais vermelho, verde e azul.Feche os canais vermelho e azul e utilize a imagem do canal verde para a análise da intensidade da linha de teste. Utilize a ferramenta de retângulo para selecionar a região de interesse (ROI) de 100 por 10 pixels que cubra a linha de teste. Abra as outras imagens da tira LFA e aplique o mesmo tamanho de ROI em todas as amostras.Clique em analisar e escolha medir para obter o valor médio da intensidade da região de interesse (ROI) da linha de teste. Em seguida, selecione uma região adjacente da membrana em branco com o mesmo tamanho de ROI e meça a intensidade de fundo. Exporte os valores para uma planilha do Excel e calcule a intensidade normalizada da linha de teste subtraindo a intensidade de fundo da intensidade da linha de teste.Avaliação da capacidade de filtração do SaliFilter mediante comparação das alterações na turbidez com kits comerciais de coleta de saliva mostrou alta turbidez na saliva não tratada, enquanto as amostras tratadas com o SaliFilter apareceram visivelmente claras. As amostras processadas usando kits comerciais mostraram apenas melhoria limitada na clareza. A quantificação de proteínas salivares por absorvância a 280 nanômetros mostrou uma redução aproximada de 69% após a filtração.Um ensaio de Bradford mostrou uma diminuição acentuada na intensidade da cor em amostras tratadas com SaliFilter, correspondendo a uma redução de aproximadamente 80% na concentração total de proteína. A análise de fluxo capilar demonstrou que a remoção de mucinas restaurou o desempenho do fluxo na saliva pré-tratada. A análise por SDS-PAGE confirmou que as mucinas foram retidas a montante da membrana e estavam ausentes nas amostras processadas.Este protocolo permite aos pesquisadores avaliar o cortisol solúvel após a remoção de proteínas e mucinas. Após a filtração, as amostras podem ser analisadas por SDS-PAGE, ensaios de proteínas, ELISA ou outros. Estudos futuros podem validar esta plataforma utilizando amostras clínicas de saliva com diferentes concentrações de cortisol.

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Demonstramos: (1) procedimentos para coleta de amostras salivares em idosos com comprometimento cognitivo por cuidadores familiares no ambiente domiciliar, (2) procedimentos para medir a atividade do estresse via cortisol salivar e alfa amilase e (3) perfis representativos. Protocolos que permitem aos pesquisadores estudar processos ligados ao estresse avançam nossa compreensão da sensibilidade e suscetibilidade biológica.

Coleta de saliva e medição de cortisol salivar e alfa-amilase em idosos residentes em comunidades frágeis por meio de cuidadores familiares

O cortisol (CORT) acumula-se no eixo do crescimento de cabelo de humanos e primatas não-humanos. Nós descrevemos métodos para extrair e analisar CORT cabelo com alta precisão e sensibilidade. Medição de cabelo CORT é particularmente bem adequado para a avaliação de stress crónico durante períodos de semanas a meses.

Extração e Análise de Cortisol de cabelo humano e do macaco

A pesquisa sobre as emoções de desempenho acadêmico dos alunos de graduação baseou-se principalmente em autorrelatos em ambientes de laboratório. Os estudos raramente incluem medidas biofisiológicas para esses autorrelatos. Este protocolo descreverá uma metodologia que integra autorrelatos e medidas biofisiológicas para avaliar a resposta e o desempenho do aluno durante uma atividade de exame laboratorial.

Uso de respostas galvânicas da pele, saliva Biomarkers e auto-relatórios para avaliar o desempenho de Graduação Estudante durante uma atividade Laboratório Exame

Um protocolo de estudo é apresentado sobre como avaliar as associações entre ouvir música e estresse psicobiológico (medido por níveis subjetivos de estresse, cortisol salivar e alfa-amilase salivar) na vida diária. São fornecidos conselhos sobre desenho do estudo, materiais, métodos, seleção de participantes e manuseio estatístico. Resultados representativos são apresentados e discutidos.

Avaliando os efeitos da música de escuta sobre Stress psicobiológica na Vida Diária

Análise de concentração de cortisol cabelo fornece uma alternativa às medidas tradicionais de cortisol; no entanto, para coletar amostras de cabelo de afro-americanos, os cientistas precisam ser culturalmente competente e informada. O propósito do presente protocolo é demonstrar uma técnica culturalmente informada para coletar amostras de cabelo para análise de cortisol de afro-americanos.

Coletar amostras de cabelo para cabelo análise de Cortisol em americanos africanos

Aqui, apresentamos um método misto original, combinando uma quantitativa e uma abordagem qualitativa para examinar com precisão as experiências dos participantes durante o teste de Stress Social de Trier e o teste de esforço Social de Trier para grupos.

Enactive abordagem fenomenológica para o teste de Stress Social Trier: ponto de vista métodos mistos

Nós apresentamos um protocolo para determinar o solvente óptimo da extração para medir o cortisol da pele do Koala. Os solventes utilizados neste protocolo são metanol, etanol e isopropanol. Determinar um solvente de extração ideal ajudará na medição de peles de forma confiável para determinar o impacto do estresse crônico em coalas.

Medição de cortisol em Koala (Phascolarctos cinereus) Fur

O objetivo deste trabalho é identificar mudanças nos níveis de estresse após a visitação em três diferentes configurações e descrever os métodos utilizados na identificação de níveis de estresse com base em medidas de cortisol salivar, α-amilase e um autorrelato psicológico Instrumento.

Medindo níveis de stress biofísicos e psicológicos após visitação a três locais com diferentes níveis de natureza

Neste estudo, apresentamos um protocolo de extração de cortisol da barbatana e mandíbula de espécies de esturjão. Os níveis do cortisol da aleta e do Jawbone foram examinados mais adicional comparando dois solventes de lavagem seguidos por ensaios de ELISA. Este estudo pilotou a viabilidade do cortisol do Jawbone como um indicador novo do esforço.

Extração de cortisol de matrizes de Sturgeon Fin e Jawbone

Um delineamento experimental foi desenvolvido para investigar as influências em tempo real de uma experiência de exame para avaliar as realidades emocionais que os alunos vivenciam nas configurações e tarefas do ensino superior. Este projeto é o resultado de uma abordagem Cross-disciplinar (por exemplo, psicologia educacional, biologia, fisiologia, engenharia) e multimodal (por exemplo, marcadores salivares, pesquisas, sensor eletrodérmico).

Um projeto experimental multidisciplinar e multimodal para estudar experiências de exame autêntico em tempo real

Este protocolo demonstra como fornecer o enriquecimento ambiental prático significativo para os porcos que são alojados no revestimento slatted durante os estágios diferentes de suas vidas, e como coletar amostras da saliva em uma maneira não invasora para a medida de concentrações de cortisol, como um biomarcador para o stress agudo.

Fornecendo o enriquecimento ambiental significativo e medindo o cortisol do saliva nos porcos alojados no revestimento slatted

112 visualizações.  Kwangwoon University. Nossa pesquisa se concentra no pré-tratamento da saliva para melhorar a confiabilidade da detecção de cortisol. Este protocolo pode ser aplicado à análise de biomarcadores baseada em saliva usando o teste de fluxo lateral. Para começar, misture suavemente a amostra de saliva humana em pool desidentificada e comercial antes de usar para garantir homogeneidade.Armazene as amostras de saliva a quatro graus Celsius e use-as dentro do período de armazenamento recomendado pelo fornece...

Dispositivo portátil para pré-tratamento de saliva para melhorar a detecção de cortisol

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