Name: A metafase DNA-FISH se espalha para distinguir o DNA extracromossômico de regiões de coloração homogênea em linhas celulares de câncer humano (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-08-04T13:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 21 s
Description: Aprenda a distinguir DNA extracromossômico de regiões de coloração homogênea em linhas celulares de câncer humano usando DNA-FISH em metáfases. Este protocolo permite visualizar amplificações de oncogenes com resolução de célula única.

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a metafase dna-fish se espalha para distinguir o dna extracromossômico de regiões de coloração homogênea em linhas celulares de câncer humano

DNA-FISH Metaphase Spreads to Distinguish Extrachromosomal DNA from Homogeneously Staining Regions in Human Cancer Cell Lines

A metafase DNA-FISH se espalha para distinguir o DNA extracromossômico de regiões de coloração homogênea em linhas celulares de câncer humano

Whole-genome sequencing identifies focal DNA amplifications with base-pair resolution but cannot determine whether amplified sequences reside on ...

Nossa pesquisa foca em determinar se oncogenes amplificados residem em DNA extracromossômico ou dentro de regiões homogeneamente coradas distintas integradas ao cromossomo. O sequenciamento não consegue distinguir ecDNA de amplificação em RCH, de modo que nosso protocolo resolve isso com resolução em nível de célula única.Para começar, dilua a solução estoque de Colcemid em uma proporção de 1 para 1 com água ultrapura estéril. Para a interrupção na metáfase, adicione 100 microlitros da solução diluída de Colcemid às células COLO320DM mantidas em 10 mililitros de meio de cultura em crescimento logarítmico, com confluência entre 70% e 90%, e coloque-as em uma incubadora de cultura celular por 45 minutos até a noite. Prepare um fixador de Carnoy fresco utilizando uma proporção de 3 para 1 de metanol para ácido acético. Mantenha o fixador de Carnoy em gelo durante todo o procedimento de fixação. Prepare uma solução fresca de cloreto de potássio 0,075 molar e aqueça a solução em banho-maria a 37 graus Celsius. Após a centrifugação e contagem celular, lave as células com PBS. Resuspenda suavemente em 10 mililitros da solução morna de cloreto de potássio 0,075 molar e homogeneíze a suspen

dna-fish-metaphase-spreads-to-distinguish-extrachromosomal-dna-from

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este artigo descreve a seleção de sondas adequadas para uma única célula FISH, técnicas de espalhamento de núcleos de blastômeros, e hibridização in situ e marcando sinal, aplicada ao diagnóstico genético pré-implantação (PGD) em um ambiente clínico.

FISH para diagnóstico pré-implantação Genética

Chromosomics: Detecção de alterações numéricas e estruturais em todos os 24 cromossomos humanos ao mesmo tempo usando um ensaio de FISH Novel OctoChrome

O isolamento e caracterização de células tumorais circulantes (CTC) do sangue de pacientes com câncer é um tipo de biópsia líquida não invasiva e associada à recidiva e progressão da doença. Este vídeo descreve a técnica de hibridização in situ de fluorescência de DNA (DNA FISH) em CTCs capturadas em um fio médico, para estudar um gene específico de interesse.

FISH de DNA 3D: uma técnica para localizar um gene específico em um cromossomo

Aqui nós descrevemos um protocolo para a detecção simultânea de modificações de histonas por imunofluorescência e seqüências de DNA por FISH DNA seguido por microscopia 3D e análises (3D FISH imuno-DNA).

Imunofluorescência combinados e FISH DNA em 3D preservado núcleos interfásicos para estudar mudanças na organização nuclear 3D

Nós descrevemos um protocolo robusto e versátil para a análise de arquitetura nuclear por FISH DNA 3D usando sondas fluorescentes diretamente marcadas.

Robust FISH DNA 3D utilizando sondas Diretamente rotuladas

Vias de reparo de DNA são essenciais para a manutenção da integridade genômica e mutação prevenção e câncer. O objetivo deste protocolo é quantificar instabilidade genômica por observação direta de aberrações cromossômicas em metáfase se espalha a partir de células de rato B usando hibridização in situ fluorescente (FISH) para repetições de DNA telomérico.

Rápida análise de aberrações cromossômicas em linfócitos B mouse por PNA-FISH

Apresentamos uma nova abordagem para caracterizar as células do tumor. Nós combinamos a imunofluorescência com DNA fluorescentein situ-hibridação para avaliar células capturadas por um fio médico funcionalizado capaz de na vivo enriquecimento CTC diretamente do sangue do paciente.

Caracterização de células tumorais, usando um fio de médico para a captura de células tumorais de circulação: uma abordagem 3D baseado no DNA peixe e imunofluorescência

Os spreads de superfície nuclear são uma ferramenta indispensável para estudar eventos cromossomos durante a meiose. Aqui demonstramos um método para preparar e visualizar cromossomos meioóticos durante a profase I de espermatotatocitos de zebrafish.

Preparação do Cromossomo Meioético Se espalha de espermatocitocitos de zebrafish

O DNA 3D multicolor FISH representa uma ferramenta para visualizar loci múltiplogenômico dentro de núcleos preservados em 3D, definindo inequivocamente suas interações recíprocas e localização dentro do espaço nuclear em um único nível celular. Aqui, um protocolo passo a passo é descrito para um amplo espectro de células primárias humanas.

Ferramenta de peixe de DNA Multicolor 3D para estudar arquitetura nuclear em células primárias humanas

A combinação de preparações de halo de DNA com hibridização in situ fluorescente permite a análise de alta resolução das interações genômicas com o nucleoesqueleto. O genoma anexado leva a sinais fluorescentes hibridizados localizados dentro dos núcleos residuais extraídos, enquanto o genoma não ligado está no halo de DNA ao redor dos núcleos residuais.

Hibridização in situ fluorescente em preparações de halo de DNA para revelar cromossomos inteiros, telômeros e loci gênicos

Este protocolo fornece um método reprodutível para visualizar a amplificação gênica em amostras de tecido fixadas em formalina e embebidas em parafina (FFPE).

Detecção robusta de amplificação gênica em amostras embebidas em parafina fixadas em formalina por hibridização in situ por fluorescência

Aprenda a distinguir DNA extracromossômico de regiões de coloração homogênea em linhas celulares de câncer humano usando DNA-FISH em metáfases. Este protocolo permite visualizar amplificações de oncogenes com resolução de célula única.

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