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</ol>

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>01916-500G</td><td>Componente do meio de ágar LB; 15 g/L.</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Lab1st&nbsp;</td><td>SV120H</td><td>Usado para esterilizar instrumentos/materiais ou validar tratamento asséptico.</td></tr><tr><td>Kit de extração de DNA bacteriano</td><td>Promocell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Extração de DNA&nbsp;</td></tr><tr><td>Configuração de contagem/registro de colônias</td><td>OCS</td><td>B079Y5W57N</td><td>Necessário para registrar UFCs, morfotipos e diferenças de placa; o manuscrito não especifica contador/modelo.</td></tr><tr><td>Frascos de crioconservação</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z359033</td><td>Implícito para armazenamento de estoques de glicerol a -80 &deg;C; não nomeado explicitamente, mas necessário para a etapa de preservação.</td></tr><tr><td>Sistema digital de registro de isolado</td><td>Não especificado no manuscrito</td><td>Não aplicável</td><td>Usado para registrar metadados de isolado: origem, réplica, condição, tratamento de esterilização, data de isolamento, meio de placa, morfologia, status de identificação.</td></tr><tr><td>Etanol</td><td>VWR</td><td>83813440</td><td>Usado para preparar solução de etanol 70% v/v para esterilização da superfície da semente.</td></tr><tr><td>Papel filtro</td><td>Fisher Scientific</td><td>11718772</td><td>Alternativa opcional de suporte de germinação.</td></tr><tr><td>Pinças/Pega-papel</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>930229</td><td>Usado para transferir sementes e coletar plântulas germinadas.</td></tr><tr><td>Kit de extração de DNA genômico</td><td>PromoCell</td><td>PK-MB708-206-100</td><td>Usado para extrair DNA genômico de culturas bacterianas purificadas; kit/método exato não especificado.</td></tr><tr><td>Glicerol, estéril 80%</td><td>VWR</td><td>24388364</td><td>Misturado 1:1 v/v com cultura líquida para preparação de crioestoque.</td></tr><tr><td>Capa de fluxo laminar Bio48</td><td>Faster</td><td>LAB-CAP-22</td><td>Requerido para manuseio asséptico de sementes, transferências de esterilização e preparação de materiais estéreis.</td></tr><tr><td>Meio ágar LB</td><td>VWR</td><td>846495000</td><td>Meio padrão usado para cultivo comparativo; por litro: 10 g de tripsina, 5 g de extrato de levedura, 10 g de NaCl, 15 g de ágar.</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga</td><td>Ratiolab</td><td>RATI5615000</td><td>Usado para esterilização de sementes e processamento de amostras.</td></tr><tr><td>Meio MS</td><td>Sigma</td><td>M0404-10L</td><td>Mencionado como suporte de germinação estéril para germinação áxica.</td></tr><tr><td>NZYTaq II 2&times; Master mix</td><td>Nzytech</td><td>MB35803</td><td>Mistura de PCR para amplificação</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm/Merck</td><td>HS234526A</td><td>Usado para selar placas de germinação enquanto reduz a contaminação.</td></tr><tr><td>Placas de Petri</td><td>Labbox</td><td>PDIP-E9N-500</td><td>Usado para configuração de germinação, placas e manuseio de sementes esterilizadas.</td></tr><tr><td>Phytoagar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>9002-18-0</td><td>Mencionado como suporte de germinação estéril opcional alternativo.</td></tr><tr><td>Conjunto de pipetas e pontas</td><td>Merck</td><td>EP3123000918-1EA</td><td>Usado para remover soluções de esterilização, lavagem, diluição e placas.</td></tr><tr><td>Meio ágar R2A</td><td>HI-MEDIA</td><td>M1743-500G</td><td>Meio adicional opcional para fluxos de trabalho culturômicos estendidos.</td></tr><tr><td>Cloreto de sódio, NaCl</td><td>Fisher Chemical</td><td>10040460</td><td>Usado para preparar NaCl estéril 0,45% para homogeneização e diluições seriais; também faz parte do meio LB.</td></tr><tr><td>Hipoclorito de sódio</td><td>Carlo Erba</td><td>370323</td><td>Usado para preparar solução de hipoclorito de sódio 20% v/v para esterilização da superfície da semente. Corrosivo; requer EPI.</td></tr><tr><td>Pistões descartáveis estéreis</td><td>Eppendorf</td><td>EP0030120973</td><td>Usado para homogeneização de sementes secas e plântulas germinadas.</td></tr><tr><td>Misturador Vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901137</td><td>Usado para resuspender células microbianas de homogeneizados.</td></tr></tbody></table>

isolamento da microbiota associada às sementes de tomate por germinação controlada e cultivo comparativo

Isolation of Tomato Seed-Associated Microbiota Through Controlled Germination and Comparative Culturing

Isolamento da Microbiota Associada às Sementes de Tomate por Germinação Controlada e Cultivo Comparativo

Surface sterilization is a critical yet frequently under-optimized step in studies aiming to isolate seed-associated microorganisms, as excessively harsh ...

isolation-tomato-seed-associated-microbiota-through-controlled

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Fonte: Hassan, J. A., et al. Identificação de alto rendimento de resistência a Pseudomonas syringae pv. Tomate em tomate usando ensaio de inundação de mudas. J. Vis. Exp. (2020).Este vídeo demonstra um método para rastrear a resistência bacteriana em diferentes cepas de tomate usando mudas de dez dias inoculadas com uma suspensão bacteriana. Ele explica como as bactérias invadem os estômatos, fornecem proteínas efetoras para suprimir a imunidade das plantas e como as respostas das plantas...

Ensaio de inundação de mudas para triagem de resistência bacteriana em tomates

Fonte: Nathoo, N., et al. Um sistema de co-cultivo hidropônico para análise simultânea e sistemática de interações moleculares e sinalização planta/micróbio. J. Vis. Exp. (2017).Este vídeo demonstra um sistema de co-cultivo hidropônico para estudar as interações planta-bactéria em condições estéreis. As mudas das plantas são transferidas para um meio de crescimento ácido estéril, incubadas e inspecionadas quanto à contaminação antes da inoculação com Agrobacterium. As bactérias ativadas se...

Um sistema de co-cultivo para estudar as respostas moleculares de hospedeiros vegetais e bactérias em interação

As bactérias endofíticas colonizam os tecidos vegetais e promovem o crescimento das plantas.Para estudar seu impacto no crescimento do tomateiro sob estresse salino, comece com mudas estéreis mostrando folhas e raízes em desenvolvimento.Mergulhe as raízes da muda experimental em uma suspensão de bactérias endofíticas; deixar o controlo não inoculado.Transfira ambos os grupos para solo esterilizado para evitar interferência microbiana externa e incube em uma câmara de crescimento.Do solo, as...

Aumentando a tolerância ao estresse salino em plantas de tomate por meio da colonização bacteriana endofítica

Fonte: Matthysse, A. G. Adesão de bactérias às superfícies das plantas medida em laboratório. J. Vis. Exp., (2018)Este vídeo demonstra um protocolo para medir a colonização radicular de mudas de tomate por bactérias patogênicas selvagens e deficientes em celulose. Contagens viáveis de bactérias aderentes firmes apresentam maior adesão e formação de microcolônias pela cepa selvagem, destacando o papel da celulose na colonização radicular estável.

Avaliação da colonização radicular de mudas de tomate por uma bactéria patogênica usando contagens celulares viáveis

Um método fácil para medir e caracterizar adesão bacteriana em plantas, principalmente raízes e brotos, é descrito neste artigo.

Aderência de bactérias para plantar superfícies medidas em laboratório

Aqui, apresentamos um método versátil para transformação da raiz do tomate seguido de inoculação com Ralstonia solanacearum para realizar análise genética simples para o estudo da doença de murcha bacteriana.

Transformação da Raiz do Tomate Seguida de Inoculação com Ralstonia Solanacearum para Análise Genética Direta da Doença de Wilt Bacteriano

O ensaio de inundação de mudas facilita a rápida triagem das adesões de tomate selvagem para a resistência à bactéria Pseudomonas seringae. Este ensaio, usado em conjunto com o ensaio de crescimento bacteriano de mudas, pode auxiliar na caracterização da resistência subjacente à bactéria, e pode ser usado para mapear populações para determinar a base genética da resistência.

Identificação de alta duração da resistência a Pseudomonas syringae pv. Tomate no Tomate usando Ensaio de Inundação de Mudas

Para obter um inseto axenic, sua superfície de ovo é esterilizada, e a larva eclodida é posteriormente criada usando folhas axenic. Este método fornece uma maneira eficiente de preparação de insetos machados sem administrar antibióticos ou desenvolver uma dieta artificial, que também pode ser aplicada a outros insetos comedores de folhas.

Preparando e criando insetos axeônicos com mudas cultivadas de tecido para estudos de interação microbiota hospedeiro-intestinal do besouro-folha

Este protocolo apresenta um resumo detalhado das estratégias para inocular raízes vegetais com micróbios transportados pelo solo. Exemplificados para os fungos Verticillium longisporum e Verticillium dahliae, três diferentes sistemas de infecção radicular são descritos. Potenciais aplicações e possíveis análises a jusante são destacadas, e vantagens ou desvantagens são discutidas para cada sistema.

Estratégias de inoculação para infectar raízes vegetais com microrganismos transportados pelo solo

Este protocolo visa fornecer procedimentos detalhados para coleta, fixação e manutenção de amostras de plantas micoheterotróficas, aplicando diferentes técnicas de microscopia, como microscopia eletrônica de varredura e transmissão, microscopia de luz, confocal e fluorescência para estudar a colonização fúngica em tecidos e sementes geridas com fungos micorrizais.

Técnicas de Microscopia para Interpretação da Colonização Fúngica em Tecidos de Plantas Micoheterotróficas e Germinação Simbiótica de Sementes

A semente de tomate é um modelo importante para o estudo da genética e biologia do desenvolvimento durante a reprodução das plantas. Este protocolo é útil para a limpeza de sementes de tomate em diferentes estágios de desenvolvimento para observar a estrutura embrionária mais fina.

Um Protocolo de Limpeza Eficiente para o Estudo do Desenvolvimento de Sementes em Tomateiro (Solanum lycopersicum L.)

iPlantMicro Lab..  Esse protocolo combina esterilização padronizada da superfície da semente com a germinação controlada para permitir o isolamento reprodutível da microbiota associada à semente de tomate durante a transição da semente para a muda. A abordagem melhora a recuperação de microrganismos cultiváveis sub-representados em sementes secas e apoia estudos comparativos de cultivo durante o desenvolvimento inicial das mudas.

Isolamento da Microbiota Associada às Sementes de Tomate por Germinação Controlada e Cultivo Comparativo

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