Name: Uma Plataforma Microfluídica para Estudar os Papéis da Compressão Mecânica nas Interações entre Células Tumorais e Imunes em uma Matriz Extracelular 3D (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-08-28T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Aprenda a usar uma plataforma microfluídica para estudar como a compressão mecânica afeta as interações entre células NK e esferoides tumorais de mama em matriz extracelular 3D.

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Este trabalho é financiado por uma bolsa do National Cancer Institute (Grant R01CA221346), pela Lance R. Collins Fellowship do College of Engineering da Cornell University concedida a FM e pelo Cornell Provost’s Fund for Research Resilience concedido a FM. Este trabalho foi realizado em parte na Cornell NanoScale Facility, membro da National Nanotechnology Coordinated Infrastructure (NNCI), que é apoiada pela National Science Foundation (Grant NNCI-2025233).

1. Preparação dos componentes do dispositivo
<ol>
	<li>Ativação da superfície da câmara de carregamento da amostra
	<ol>
		<li>Coloque uma máscara sobre a câmara de carregamento da amostra (Camada 1, C1) de modo que apenas os poços fiquem expostos.</li>
		<li>Exponha a camada 1 mascarada ao plasma de oxigênio por 15 s usando a configuração de alta potência (45 W).</li>
		<li>Coloque a Camada 1 em uma placa de Petri e, em seguida, prossiga com os seguintes passos em uma cabine de segurança biológica.</li>
		<li>Trate cada poço com 10 &#181;L de PEI (polietilenimina) a 1% por 10 min.</li>
		<li>Remova o PEI das cavidades por aspiração a vácuo a partir dos quatro cantos de cada cavidade para evitar arranhar a superfície de vidro.</li>
		<li>Lave as cavidades com 10 &#181;L de solução salina tamponada com fosfato (PBS), em seguida remova a solução por aspiração a vácuo pela lateral.</li>
		<li>Trate os poços com 10 &#181;L de glutaraldeído 0,1% por 30 min, depois remova o glutaraldeído por aspiração a vácuo a partir dos cantos.</li>
		<li>Lave as cavidades com PBS três vezes, removendo o lavado dos cantos após cada lavagem.</li>
		<li>Envolva a placa de Petri contendo a Camada 1 com papel alumínio e deixe-a no gabinete de segurança biológica durante a noite.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Esterilização da estrutura metálica
	<ol>
		<li>Submergir o disco de 38 mm &#215; Estrutura metálica de 88 mm e os doze parafusos cabeça redonda M2.5 em etanol 70% durante a noite.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Priming da unidade de controle de pressão
	<ol>
		<li>Expor a unidade de controle de pressão ao plasma de oxigênio por 30 s utilizando a configuração de alta potência (45 W).</li>
		<li>Mergulhe a unidade de controle de pressão, com as características voltadas para baixo, em água desionizada (DI) durante a noite para preencher os canais e as câmaras da unidade de controle de pressão.</li>
		<li>No dia seguinte, remova a unidade de controle de pressão da água deionizada na qual estava submersa.</li>
		<li>Preencha um reservatório microfluídico com 50 mL de água desionizada. 
		OBSERVAÇÃO: O reservatório microfluídico consiste em um tubo cônico de 50 mL equipado com uma tampa personalizada contendo duas conexões para tubos: uma linha de tubo pneumático e uma linha de tubo para entrega de fluido.</li>
		<li>Conecte uma seringa cheia de ar à linha de tubo pneumático.</li>
		<li>Pressione lentamente o êmbolo da seringa para pressurizar o reservatório e forçar a água desionizada a passar pela tubulação de entrega de fluido até que a tubulação esteja completamente cheia e a água comece a gotejar pela extremidade do tubo.</li>
		<li>Conecte o tubo de entrega de fluido pré-cheio e escorrendo ao manifold de policarbonato e, em seguida, à entrada de 1,5 mm localizada na parte traseira da unidade de controle de pressão.</li>
		<li>Deixe a unidade de controle de pressão e o conjunto do coletor secarem ao ar por 2 h. Após secagem completa, a unidade de controle de pressão e o conjunto do coletor estão prontos para o próximo passo.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. Montagem do dispositivo
<ol>
	<li>Preparação do colágeno com células incorporadas
	<ol>
		<li>Remova e seque o quadro metálico e os parafusos do etanol a 70%.</li>
		<li>No gabinete de segurança biológica, coloque três microtubos de 600 µL sobre gelo. Rotule os tubos da seguinte forma: &#34;N&#34; (neutralização), &#34;sp&#34; (esferoides de MCF-7) e &#34;sp+NK&#34; (esferoides de MCF-7 com células NK).</li>
		<li>Prepare a mistura de neutralização adicionando 10× o volume necessário de Meio 199 (M199) e hidróxido de sódio (NaOH) ao tubo &#34;N&#34;.</li>
		<li>Transfira o volume apropriado da mistura M199:NaOH para os tubos &#34;sp&#34; e &#34;sp+NK&#34; para obter uma concentração final de 1×.</li>
		<li>Recupere os esferoides tumorais e centrifugue a 141 × g por 3 min para permitir que os esferoides sedimentem no fundo do tubo. 
		NOTA: Esferoides tumorais com aproximadamente 200 µm de diâmetro foram gerados utilizando uma plataforma de micropoços de agarose descrita previamente16. Resumidamente, 3 × 106 células MCF-7 foram semeadas em uma matriz de micropoços de agarose de 36 × 36, composta por poços de 200 µm de diâmetro e 200 µm de profundidade, e então cultivadas por 7 dias para produzir os esferoides tumorais utilizados nos experimentos.</li>
		<li>Remova cuidadosamente o sobrenadante e ressuspenda os esferoides em 200 µL de meio completo 50:50 MCF-7/NK (Tabela 1 e Tabela 2).</li>
		<li>Recolha as células NK em um tubo cônico de 50 mL, centrifugue a 141 × g por 4 min e conte as células. 
		NOTA: A viabilidade das células NK deve ser &#62;85% no dia do experimento.</li>
		<li>Ressuspenda o pellet resultante em 200 µL de meio completo para células NK.</li>
		<li>Adicione o volume apropriado da solução estoque de colágeno a cada tubo microcentrífugo.</li>
		<li>Adicione o volume apropriado da suspensão celular a cada tubo para obter um volume final de 200 µL contendo colágeno a 1,5 mg/mL. 
		NOTA: A suspensão &#34;sp&#34; contém apenas esferoides tumorais, enquanto a suspensão &#34;sp+NK&#34; contém esferoides tumorais e 1,5 × 106 células NK.</li>
		<li>Misture suavemente por pipetagem para garantir uma distribuição homogênea de células e colágeno, minimizando a formação de bolhas.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Montagem do dispositivo e carregamento celular
	<ol>
		<li>Coloque a Camada 1 dentro do quadro metálico seco.</li>
		<li>Carregue 9&#160;µL da mistura de colágeno em cada poço.</li>
		<li>Alinhe a unidade de controle de pressão e o conjunto do manifold com as câmaras celulares na Camada 1 utilizando um microscópio.</li>
		<li>Insira os parafusos secos através do manifold e no quadro metálico, fixando a unidade de controle de pressão e a Camada 1 entre o manifold e o quadro metálico.</li>
		<li>Coloque o dispositivo montado em um incubador a 37 °C e 5% CO₂ por 45 min para permitir a polimerização do colágeno.</li>
		<li>Adicione meio completo de cultura celular 50:50 MCF-7/NK através dos quatro portos de meio.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. Imagem das interações tumor-imunes
<ol>
	<li>Coloque o dispositivo montado dentro do incubador de estágio acoplado a um microscópio invertido de epifluorescência para a aquisição de imagens de células vivas. 
	NOTA: O incubador de estágio manteve uma temperatura de 37 °C e uma umidade de aproximadamente 50% durante todo o período de aquisição de imagens.</li>
	<li>Coloque uma caixa de proteção secundária sobre o dispositivo montado para manter o ambiente interno a 37 °C, umidade de 100% e 5% de CO₂ ao longo do período de aquisição de imagens.</li>
	<li>Conecte o dispositivo ao controlador de pressão utilizando o tubo pneumático.</li>
	<li>Adquira imagens de campo claro e GFP dos esferoides tumorais antes de aplicar compressão, a fim de permitir a avaliação da deformação dos esferoides após a compressão.</li>
	<li>Aplique uma pressão constante de 120 mbar durante todo o período de aquisição de imagens. 
	NOTA: O software do controlador de pressão permite ao usuário definir o perfil e a magnitude da pressão aplicada durante o experimento. A Figura Suplementar 1 contém um esquema do sistema de controle de pressão.</li>
	<li>Inicie a aquisição de imagens em lapso de tempo adquirindo imagens de campo claro e GFP a cada 10 minutos durante 18 h. 
	NOTA: As imagens foram adquiridas no plano Z central de cada esferoide tumoral utilizando uma objetiva de 20× em um microscópio invertido de epifluorescência. As imagens de campo claro e de fluorescência GFP foram capturadas com tempos de exposição de 200,1 ms e 298,9 ms, respectivamente.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Cao J-Z, Zhao W, Xia X-J. Cell-based cancer immunotherapy: milestones, mechanistic insights, and emerging therapeutic directions. Acta Pharmacol Sin. 2026:https://doi.org/10.1038/s41401-026-01811-y.</li>
	<li>Yang R, Yang Y, Liu R, et al. Advances in CAR-NK cell therapy for hematological malignancies. Front Immunol. 2024;15:1414264.</li>
	<li>Neelapu SS, et al. Axicabtagene ciloleucel CAR T-cell therapy in refractory large B-cell lymphoma. N Engl J Med. 2017;377(26):2531-44.</li>
	<li>Sheykhhasan M, Manoochehri H, Dama P. Use of CAR T-cell for acute lymphoblastic leukemia (ALL) treatment: a review study. Cancer Gene Ther. 2022;29(8-9):1080-96.</li>
	<li>Tan S, Li D, Zhu X. Cancer immunotherapy: Pros, cons and beyond. Biomed Pharmacother. 2020;124:109821.</li>
	<li>Chen T, Wang M, Chen Y, Liu Y. Current challenges and therapeutic advances of CAR-T cell therapy for solid tumors. Cancer Cell Int. 2024;24(1):133.</li>
	<li>Peng L, et al. CAR-T and CAR-NK as cellular cancer immunotherapy for solid tumors. Cell Mol Immunol. 2024;21(10):1089-108.</li>
	<li>Basu R, et al. Cytotoxic T cells use mechanical force to potentiate target cell killing. Cell. 2016;165(1):100-10.</li>
	<li>Dolega ME, et al. Cell-like pressure sensors reveal increase of mechanical stress towards the core of multicellular spheroids under compression. Nat Commun. 2017;8(1):14056.</li>
	<li>Linke JA, Munn LL, Jain RK. Compressive stresses in cancer: characterization and implications for tumour progression and treatment. Nat Rev Cancer. 2024;24(11):768-91.</li>
	<li>Luo M, Cai G, Ho KKY, et al. Compression enhances invasive phenotype and matrix degradation of breast cancer cells via Piezo1 activation. BMC Mol Cell Biol. 2022;23(1):1.</li>
	<li>Ren T, Sun L, Zheng Y, et al. Mechanical forces and immune cells in the tumor microenvironment: from regulation mechanisms to therapeutic strategies. Int J Surg. 2025;111(8):5420-34.</li>
	<li>Helmlinger G, Netti PA, Lichtenbeld HC, Melder RJ, Jain RK. Solid stress inhibits the growth of multicellular tumor spheroids. Nat Biotechnol. 1997;15(8):778-83.</li>
	<li>Pandey M, et al. Mechanical compression regulates tumor spheroid invasion into a 3D collagen matrix. Phys Biol. 2024;21(3):036003.</li>
	<li>Suh YJ, et al. A microfluidic rheometer for tumor mechanics and invasion studies. Lab Chip. 2025;25(22):6018-32.</li>
	<li>Song W, et al. Dynamic self-organization of microwell-aggregated cellular mixtures. Soft Matter. 2016;12(26):5739-46.</li>
	<li>Pandey M, et al. Viscoelastic properties of tumor spheroids revealed by a microfluidic compression device and a modified power law model. Soft Matter. 2026;22(7):1618-29.</li>
	<li>Steff A-M, Fortin M, Arguin C, Hugo P. Detection of a decrease in green fluorescent protein fluorescence for the monitoring of cell death: An assay amenable to high-throughput screening technologies. Cytometry. 2001;45(4):237-43.</li>
</ol>

Os autores não têm nada a declarar.

Este método descreve o uso de um dispositivo microfluídico de compressão para investigar os efeitos do estresse compressivo sobre as interações tumor-imunes. Esse sistema é capaz de aplicar compressão mecânica controlada a esferoides tumorais embutidos em uma matriz tridimensional de colágeno. O substrato de vidro que forma a base da câmara celular (L1) permite a aquisição de imagens de células vivas com alta resolução, tornando a plataforma adequada para estudos que visam quantificar a motilidade, infiltração e atividad...

A imunoterapia contra o câncer baseada em células é uma abordagem terapêutica que utiliza células imunes para direcionar células cancerosas1. Essa estratégia demonstrou sucesso notável no tratamento de cânceres sanguíneos2,3,4. No entanto, o nível de sucesso observado nos cânceres sanguíneos ainda não foi totalmente traduzido para o tratamento de tumores sólidos5,6,7. Uma das principais razões para essa limitação é o microambiente tumoral imunossupressor (TME) específico dos tumores sólidos.
O ME é caracterizado por sinais mecânicos distintos que podem regular o comportamento celular. A eliminação eficaz de células tumorais por células imunes exige que elas exerçam forças sobre as células-alvo e estabeleçam uma sinapse imune através da qual moléculas citotóxicas são entregues8. Portanto, compreender como as forças mecânicas influenciam a função das células imunes pode revelar novas estratégias terapêuticas para melhorar a eficácia das imunoterapias baseadas em células contra tumores sólidos.
Uma característica mecânica definidora do microambiente tumoral (TME) sólido é a tensão compressiva que o microambiente tumoral impõe ao tumor em crescimento9,10. Até o momento, a maioria dos estudos sobre compressão tem se concentrado nos efeitos sobre o comportamento das células tumorais10,11. Apenas recentemente a atenção passou a se voltar para a compreensão de como a compressão influencia as células imunes dentro do TME12. Como resultado, os mecanismos pelos quais a tensão compressiva afeta a migração das células Natural Killer (NK), a formação da sinapse imune e a atividade citotóxica permanecem pouco compreendidos e insuficientemente quantificados. Essa lacuna representa uma limitação crítica em nosso entendimento sobre como os sinais mecânicos dentro do TME podem ser aproveitados para melhorar o direcionamento imune de tumores sólidos.
Uma grande barreira para abordar essa questão é a falta de plataformas experimentais capazes de aplicar compressão controlada e quantificável em microambientes tridimensionais fisiologicamente relevantes, ao mesmo tempo em que permitem a imagem em tempo real das interações entre tumor e sistema imunológico. As primeiras abordagens experimentais para estudar o estresse compressivo envolviam a incorporação de esferoides em géis de agarose13. Embora este método tenha capturado efetivamente o confinamento físico, ele eliminou as interações nativas entre matriz extracelular (ECM) e células. Dolega et al. aplicaram pressão osmótica para induzir estresse compressivo; no entanto, os esferoides foram mantidos em suspensão no meio de cultura e, portanto, permaneceram desprovidos de interações com a ECM9. Pandey et al. utilizaram um inserto tipo transwell e pesos para comprimir esferoides incorporados em colágeno, o que preservou as interações entre ECM e células, mas limitou a imagem de alta resolução necessária para quantificar a motilidade das células imunes e sua atividade citotóxica14. Em conjunto, essas limitações destacam a necessidade de plataformas experimentais que permitam a imagem em tempo real das respostas morfológicas das células à compressão dentro do microambiente tumoral (TME).
Aqui, apresentamos um protocolo para um dispositivo microfluídico de compressão15 que permite a aplicação controlada de tensão compressiva, mantendo interações fisiologicamente relevantes entre a matriz extracelular e as células, além de possibilitar a imagem de células vivas com alta resolução das dinâmicas imune-tumorais. O protocolo consiste na preparação dos componentes do dispositivo (Seção 1), montagem do dispositivo (Seção 2) e na aquisição de imagens das interações tumor-imunes (Seção 3). Demonstramos o fluxo de trabalho utilizando um ensaio de citotoxicidade por células NK contra esferoides tumorais marcados com proteína verde fluorescente (GFP). Além dessa aplicação, a plataforma pode ser facilmente adaptada para investigar os efeitos de forças mecânicas sobre uma ampla variedade de tipos celulares e interações celulares em microambientes tridimensionais.

<table><tbody><tr><td>1 N NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>79724</td><td>7 &amp;micro;L</td></tr><tr><td>Meio M199 10&amp;times;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0650</td><td>200 &amp;micro;L</td></tr><tr><td>2-mercaptoetanol</td><td>ThermoFisher</td><td>313500100</td><td></td></tr><tr><td>Compressor de ar</td><td>Elveflow</td><td>Jun-Air Model 3 Compressor</td><td></td></tr><tr><td>Estágio microscópico automático X-Y</td><td>Applied Scientific Instrumentation</td><td>MS-2000</td><td></td></tr><tr><td>Câmera CCD</td><td>Hamamtsu Photonics</td><td>ORCA-R2</td><td></td></tr><tr><td>Soro bovino fetal (FBS)</td><td>GeminiBio</td><td>S11150</td><td></td></tr><tr><td>Tubo de entrega de fluido</td><td>Eleveflow</td><td>PTFE tubing spare roll</td><td>Diâmetro externo de 1/16 in</td></tr><tr><td>Fonte de luz de fluorescência</td><td>Excelitas Technologies&amp;nbsp;</td><td>X-Cite series 120 PC unit</td><td></td></tr><tr><td>Ácido fólico</td><td>Sigma</td><td>F7876</td><td></td></tr><tr><td>Glutaraldeído</td><td>EM Sciences&amp;nbsp;</td><td>16019</td><td>0,10%</td></tr><tr><td>Limpeza de plasma Harrick</td><td>Harrick Plasma</td><td>PDC-001-HP</td><td>Configuração de alta potência (45 W)</td></tr><tr><td>Soro de cavalo (HS)</td><td>ThermoFisher</td><td>16050-122</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio invertido com epifluorescência</td><td>Olympus</td><td>IX81</td><td>Lente objetiva de 20x (NA = 0,25), operado com o software Olympus CellSens</td></tr><tr><td>Máscara</td><td>Artus</td><td>10 Sheet Aluminum Shim Stock</td><td>Espessura de 0,0125" (0,75 mm)</td></tr><tr><td>Linhagem celular estável MCF-7/GFP (Puromicina)</td><td>GenTarget Inc</td><td>SC050-G</td><td></td></tr><tr><td>Quadro metálico</td><td>Custom made&amp;nbsp;</td><td>Custom made&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Reservatório microfluídico</td><td>Eleveflow</td><td>50 mL microfluidic reservoir&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio&amp;nbsp;</td><td>Olympus</td><td>CKX41</td><td>Lente objetiva de 4x&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; (NA = 0,1)</td></tr><tr><td>Mio-inositol</td><td>Sigma</td><td>I7508</td><td></td></tr><tr><td>NK-92 MI</td><td>ATCC</td><td>CRL-2407</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina/estreptomicina</td><td>Gibco&amp;nbsp;</td><td>15140122</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)&amp;nbsp;</td><td>ThermoFisher&amp;nbsp;</td><td>10010072</td><td></td></tr><tr><td>Tubo pneumático</td><td>Eleveflow</td><td>PUR polyether clear pipe input</td><td>Diâmetro externo de 4" mm</td></tr><tr><td>Polietilenimina (PEI)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3143</td><td>1%</td></tr><tr><td>Controlador de pressão</td><td>Elveflow</td><td>OB1 NK4</td><td>Operado com o software Elveflow Smart Interface</td></tr><tr><td>Colágeno tipo I de cauda de rato&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>354249</td><td>31,3 &amp;micro;L de colágeno estoque a 9,6 mg/mL</td></tr><tr><td>Parafusos</td><td>Phillips</td><td>M2,5 Pan-head</td><td>12 parafusos</td></tr><tr><td>Incubadora de estágio</td><td>Precision Plastic</td><td>Custom made</td><td></td></tr><tr><td>Seringa</td><td>Becton Dickinson</td><td>303134</td><td>Emparelhada com um conector luer macho com trava integral para barbela de 3/32" OD da Eleveflow</td></tr><tr><td>Meio &amp;alpha;-MEM</td><td>ThermoFisher</td><td>12561056</td><td></td></tr></tbody></table>

uma plataforma microfluídica para estudar os papéis da compressão mecânica nas interações entre células tumorais e imunes em uma matriz extracelular 3d

A Microfluidic Platform for Studying Roles of Mechanical Compression in Tumor-Immune Cell Interactions in a 3D Extracellular Matrix

As forças mecânicas influenciam significativamente a capacidade das células imunes de matar células tumorais no contexto da imunoterapia baseada em células. Para eliminar células tumorais, as células imunes precisam exercer forças sobre a célula-alvo e formar uma sinapse imune, por meio da qual moléculas citotóxicas — incluindo a granzima B — são entregues. Apesar de sua importância, ainda se compreende pouco sobre como os estímulos mecânicos podem ser aproveitados para potencializar a eliminação mediada pelo sistema imune. Essa lacuna de conhecimento é parcialmente decorrente da falta de ferramentas capazes de fornecer estresse mecânico bem controlado aos cultivos celulares em um ambiente fisiologicamente realista. Aqui, descrevemos um dispositivo microfluídico de compressão que pode aplicar compressão estática ou dinâmica a esferoides tumorais embutidos em matriz extracelular (ECM), permitindo ao mesmo tempo a imagem em tempo real das interações tumor-imunes por meio de microscopia óptica.
A plataforma microfluídica é composta por 12 compartimentos (6 de controle e 6 funcionais). Cada compartimento contém uma câmara celular posicionada diretamente sob a unidade de controle de pressão. Esferoides incorporados na MEC são colocados dentro da câmara celular. Utilizando esta plataforma, investigamos a eficiência de morte mediada por células Natural Killer (NK) contra esferoides tumorais de mama (MCF-7) sob compressão mecânica definida. Os resultados mostraram que as células NK permaneceram os principais responsáveis pela morte dos esferoides tumorais, independentemente da compressão mecânica em colágeno a 1,5 mg/mL.&#160;Portanto, sugere-se que as células NK podem manter sua atividade antitumoral sob estresse compressivo. Esses achados demonstram a utilidade dessa plataforma para investigar o papel das forças mecânicas nas interações tumor-imunes. Estudos em andamento estão identificando os mecanismos moleculares que permitem às células imunes se adaptar ao estresse compressivo. Os conhecimentos obtidos a partir desses estudos podem revelar uma via terapêutica promissora.

Para os experimentos seguintes, utilizou-se um dispositivo microfluídico de compressão15 para modelar interações tumor-imunes em um microambiente tridimensional fisiologicamente relevante e, ao mesmo tempo, aplicar compressões estáticas e dinâmicas a esferoides tumorais (Figura 1). Os componentes do dispositivo (Figura 1A1) e sua ordem de montagem (Figura 1A2) são mostrados n...

Apresentamos um protocolo para utilizar uma plataforma microfluídica no modelamento de interações tumor-imunes em um ambiente tridimensional (3D). Nossos resultados revelaram que as células Natural Killer (NK) mantiveram sua atividade antitumoral sob compressão mecânica.

Uma Plataforma Microfluídica para Estudar os Papéis da Compressão Mecânica nas Interações entre Células Tumorais e Imunes em uma Matriz Extracelular 3D

As forças mecânicas influenciam significativamente a capacidade das células imunes de eliminar células tumorais no contexto da imunoterapia baseada em células. Para eliminar as células tumorais, ...

Nosso objetivo é utilizar sinais mecânicos para melhorar a capacidade das células imunes de matar células tumorais de forma eficaz. Este protocolo pode ser aplicado para investigar a regulação mediada por estresse compressivo na atividade de morte celular imune em diversos tipos de células imunes e modelos de células-alvo.Para começar, coloque uma máscara sobre a câmara de carregamento da amostra de modo que apenas os poços fiquem expostos. Exponha a Camada 1 mascarada ao plasma de oxigênio por 15 segundos na configuração de alta potência. Em seguida, coloque a Camada 1 em uma placa de Petri. Trate cada poço com 10 microlitros de polietilenimina a 1%. Após 10 minutos, remova a polietilenimina dos poços por aspiração a vácuo a partir dos quatro cantos de cada poço para evitar riscar a superfície de vidro. Lave os poços com 10 microlitros de PBS e remova a solução de lavagem por aspiração a vácuo lateralmente. Em seguida, trate os poços com 10 microlitros de glutaraldeído a 0,1% por 30 minutos. Remova o glutaraldeído pelos cantos utilizando aspiração a vácuo. A seguir, lave os poços com PBS três vezes, removendo a solução de lavagem pelos cantos após cada lavagem. Depois, enrole a pl

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