Name: Separação eletroforética de proteínas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:29:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: Aprenda a separar proteínas por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) para análise proteômica. Este método demonstra a migração de proteínas em campo elétrico, permitindo separação por tamanho e carga.

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O protocolo de texto completo para essa abordagem experimental está disponível em <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471142720/cp/cpmb/article/mb1002a/current/abstract" target="_blank">protocolos atuais em Biologia Molecular</a> .

Os autores não têm nada a declarar.

separação eletroforética de proteínas

Electrophoretic Separation of Proteins

Eletroforese é usada para separar misturas complexas de proteínas (por exemplo, a partir de células, frações subcelulares, frações da coluna, ou imunoprecipitados), para investigar composições subunidade, e para verificar a homogeneidade das amostras de proteína. Ele também pode servir para purificar proteínas para uso em outras aplicações. Eletroforese em gel de poliacrilamida, as proteínas migram em resposta a um campo elétrico através de poros em uma matriz de gel de poliacrilamida; tamanho dos poros diminui com a concentração de acrilamida crescente. A combinação de tamanho dos poros e carga de proteína, tamanho e forma determina a taxa de migração da proteína. Nesta unidade, o método de Laemmli padrão é descrito por eletroforese em gel descontínua em condições de desnaturação, ou seja, na presença de dodecil sulfato de sódio (SDS).

Neste vídeo, demonstramos um método para separação eletroforética de proteínas usando poli-acrylimide eletroforese em gel (PAGE).

Separação eletroforética de proteínas

A eletroforese é utilizada para separar misturas complexas de proteínas (p. ex., de células, frações subcelulares, frações de coluna ou imunoprecipitados), para...

A separação de proteínas individuais a partir de misturas proteicas complexas pode ser realizada por eletroforese em gel de poliacrilamida, também conhecida como PAGE. As proteínas migram em resposta a um campo elétrico através dos poros da matriz do gel. A combinação do tamanho dos poros do gel com a carga, o tamanho e a forma da proteína determina a taxa de migração da proteína. Neste vídeo, demonstraremos um método para separação eletroforética de proteínas.Olá, eu sou o Dr. Bobul Chakravarti do Centro de Proteômica do Instituto Graduado Keck de Ciências da Vida Aplicadas. Hoje vou mostrar a vocês um procedimento para realizar eletroforese em gel 1D. Então, vamos começar.Para começar, monte o sanduíche de placas de vidro do aparelho de eletroforese de acordo com as instruções do fabricante, utilizando duas placas de vidro limpas e dois espaçadores de 1,5 milímetro. Agora, fixe o sanduíche de placas de vidro na plataforma de moldagem. Em seguida, prepare a solução do gel separador, que foi descrita nos protocolos atuais.Adicione a quantidade especificada de 10% de persulfato de amônio e teed à solução e misture suavemente. Devido à alta concentração de acrilamida, a dessurgelagem

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Biologia

Este vídeo demonstra uma técnica de separação desnaturante baseada em poliacrilamida para proteínas. Essa técnica auxilia na identificação preliminar de proteínas com base em seus pesos moleculares.

Eletroforese em gel de poliacrilamida de dodecil sulfato de sódio para análise de proteínas: uma técnica para separar e visualizar proteínas com base no peso molecular

Este vídeo descreve o PAGE multimérico para separar complexos de proteínas nativas de homogeneizados de tecidos. A técnica é um híbrido das técnicas PAGE e SDS-PAGE nativas azuis. Os complexos separados podem ser caracterizados e estudados por seu papel no funcionamento celular.

Multimer-PAGE para separação de complexos de proteínas nativas: uma técnica de separação híbrida que consiste em Blue Native-PAGE e SDS-PAGE para separar proteínas multiméricas intactas do lisado tecidual

Neste vídeo, demonstramos um método de eletroforese em gel bidimensional que separa proteínas individuais de uma mistura complexa de proteínas obtida de tecidos tumorais de adenoma hipofisário humano não funcional (NFPA). As proteínas são separadas com base em sua carga elétrica na primeira dimensão e posteriormente separadas com base em pesos moleculares na segunda dimensão.

Eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional: uma técnica de separação para análise de proteínas em mistura de proteínas complexas com base na carga e no peso molecular

Este protocolo descreve como preparar e realizar eletroforese de aprisionamento de fração líquida eluída nativa clara (CN-GELFrEE), uma técnica de separação nativa para conjuntos biomoleculares não covalentes e proteínas de amostras heterogêneas que é compatível com várias técnicas de análise de proteínas a jusante.

NC-GELFrEE - Limpar nativo de gel eluída fracção líquida Entrapment Electroforese

Após a separação por métodos eletroforéticos, proteínas em um gel pode ser detectado por vários métodos de coloração. Coloração de proteínas com Coomassie Blue, coloração pela prata, Orange SYPRO, Ruby SYPRO são demonstradas neste vídeo.

Coloração Proteínas em Gel

Microcontact impressão é usado extensivamente às proteínas padrão e outras moléculas nas superfícies de materiais. Demonstramos as etapas básicas desse processo, carimbar padrões de fibronectina em vidro.

Impressão microcontact de Proteínas de Biologia Celular

Acasalamento e separação tetrad são necessários para análise genética...

Acasalamento e separação da Tétrade Chlamydomonas reinhardtii Para análise genética

Rat CTMs foram isoladas do fémur ea tíbia e então enriquecida por separação de células magnéticas. Células classificadas foram confirmados para a expressão de marcadores de superfície por citometria de fluxo. Estas células também foram cultivadas na densidade clonal para formar colônias individuais e, em seguida essas colônias foram separados por cilindros de clonagem.

Isolamento e Enriquecimento de células-tronco mesenquimais Rat (MSC) e Separação de-colônia Único Derivado MSCs

Os protocolos descrevem os passos essenciais para a obtenção de cristais de difração de qualidade de uma proteína de membrana a partir de reconstituição da proteína em uma fase lipídica cúbicos (LCP), encontrando condições iniciais com os ensaios pré-cristalização LCP-FRAP, a criação de ensaios de cristalização LCP e cristais colheita .

Cristalização de proteínas da membrana lipídica em mesofases

Calmodulina (CaM) ensaio de pull-down é uma maneira eficaz para investigar a interação de CaM com várias proteínas. Este método usa CaM-sepharose contas para análise eficiente e específica do CaM proteínas de ligação. Isto proporciona uma importante ferramenta para explorar sinalização CaM em função celular.

Pull-down da Calmodulina Proteínas de Ligação

Aprenda a separar proteínas por eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE) para análise proteômica. Este método demonstra a migração de proteínas em campo elétrico, permitindo separação por tamanho e carga.

Separação eletroforética de proteínas

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