Name: O método MODS para o diagnóstico da tuberculose e da tuberculose resistente a múltiplas drogas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 23 min 6 s
Description: Aprenda o método MODS para diagnóstico rápido de tuberculose e tuberculose multirresistente usando cultura líquida de baixo custo. Esta técnica permite detectar Mycobacterium tuberculosis em ambientes com recursos limitados.

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Gostaríamos de agradecer Sean Fitzwater e Carmen Giannina Luna Colombo para o segmento de vídeo tuberculose crescimento lapso de tempo. Agradecemos a Marty Roper para ela um feedback completo e excelente durante a edição e co-autoria o Guia do Usuário, a partir do qual o actual protocolo foi tomada principalmente verbatim. Produção deste vídeo foi financiado pelo NIH / Fogarty International Center <a href="http://www.fic.nih.gov/">http://www.fic.nih.gov/</a> David AJ Moore contribuiu como Research Fellow Wellcome Trust Clínica em Medicina Tropical e Reader em Doenças Infecciosas do Imperial College London (Sociedade número prêmio 078067/Z/05). Mark F. Brady contribuiu como um NIH / Fogarty Fellow Research International Center.

<ol><li> Preparar soluções estoque <ol><li> Fosfato de estoque regulador <ol><li> Misture 950ml de solução de sódio dibásico (9.47g de fosfato de sódio dibásico dissolvido em água destilada 1000ml) com 950ml de potássio solução de fosfato monobásico (9.07g de potássio fosfato monobásico dissolvido em água destilada 1000ml) e agitar; retivesses 50ml de cada solução para ajustar pH se necessário </li><li> Ajustar o pH para 6,8 ± 0,2: adicionar fosfato de sódio dibásico solução para elevar o pH, adicione a solução de fosfato de potássio monobásico de baixar o pH </li><li> Autoclave a 121-124 ° C por 15 minutos para esterilizar </li><li> Placa de uma alíquota de 100μl da solução tampão de fosfato em meio agar nutriente em uma placa de Petri e incubar a 37 ° C por 48 horas para confirmar a esterilidade </li><li> Guarde na geladeira a 2-8 ° C por até um mês Nota: Cada amostra de escarro requer 10ml de solução tampão fosfato </li></ol></li><li> Ações de descontaminação <ol><li> Combine volumes iguais de solução de hidróxido de sódio (8,0 g de hidróxido de sódio dissolvido em água destilada estéril 200ml) e solução de citrato de sódio (5,8 g de citrato de sódio em água destilada estéril 200ml destilada) </li><li> Misture e autoclave a 121-124 ° C por 15 minutos </li><li> Guarde na geladeira a 2-8 ° C por até um mês Nota: Cada amostra de escarro requer 2ml de ações de descontaminação </li></ol></li><li> Cultura de ações de mídia <ol><li> Em 900ml de água destilada estéril, adicionar 3.1ml de glicerol e 1,25 g de casitone e 5,9 g de pó meio 7H9 e misturar com agitação constante até completamente dissolvido </li><li> Autoclave a 121-124 ° C por 15 minutos </li><li> Esfriar e dividir o meio estéril em alíquotas 4.5ml em estéril 16x 100 tubos de vidro milímetros para preparação de amostras, e 10.8ml alíquotas para a preparação de soluções de antibióticos e de controles internos </li><li> Incubar a 37 ° C por 48 horas para verificar a esterilidade (ausência de turbidez) </li><li> Armazenar de 2-8 ° C com tampa bem fechado por até um mês Nota: Cada amostra de escarro requer um tubo contendo 4,5 ml de meio 7H9 </li></ol></li><li> Antibiótico soluções estoque <ol><li> A. Isoniazida estoque (8 mg / ml) <ol><li> Dissolver 20 mg de isoniazida completamente em água destilada estéril, 2,5 ml </li><li> Filtro com filtro de seringa de 0,2 Hm para solvente aquoso </li><li> Loja em alíquotas 20μl em tubos de centrifugação estéril micro a -20 ° C por até 6 meses Nota: Cada alíquota armazenada 20μl é suficiente para até 100 amostras (incluindo o desperdício) </li></ol></li><li> B. A rifampicina estoque (8 mg / ml) </li></ol><ol><li> Dissolver 20mg rifampicina completamente em 1.25ml DMSO </li><li> Adicionar 1.25ml água destilada estéril e misturar </li><li> Filtro com filtro de seringa de 0,2 Hm de solvente orgânico </li><li> Loja em alíquotas 20μl em tubos de microcentrífuga estéril a -20 ° C por até 6 meses Nota: Cada alíquota armazenada 20μl é suficiente para até 100 amostras (incluindo o desperdício) </li></ol></li></ol></li><li> Prepare soluções de trabalho <ol><li> Solução de descontaminação de trabalho <ol><li> Dissolver 0,1 g de cristais de NALC em cada 20ml de solução de descontaminação requerido Nota: Cada amostra necessidades 2ml de solução de descontaminação Nota: Eliminar qualquer solução de descontaminação NaOH-NALC que permanece não utilizado após 24 horas, como NALC perde a sua atividade ao longo do tempo mucolítico </li></ol></li><li> Solução de meios de cultura de trabalho <ol><li> Estabelecidos: <ol><li> 1 tubo com meio 7H9 para cada amostra de escarro para ser processado, além de um tubo adicional para cada placa (para a coluna controle negativo) </li><li> 2 tubos de meio 7H9 para os controles positivo (3 se cepas monoresistant são usados) </li><li> 02/01 tubos com 7H9 10.8ml para a preparação de solução antibiótica </li></ol></li><li> Adicionar 0,5 ml OADC ao 4.5ml de 7H9 em cada tubo de amostra </li><li> Adicionar OADC 1,2 ml para tubos com 7H9 10.8ml </li><li> Separe dois tubos com 5ml 7H9-OADC os controles positivos, e tubo (s) com 12ml 7H9-OADC a ser utilizado para a preparação de solução antibiótica (estes não requerem PANTA) </li><li> PANTA reconstituir e adicionar 0,1 ml para cada tubo de amostra e os tubos de controle negativo (7H9-OADC-PANTA: volume total = 5.1ml) Nota: médio completo com PANTA (7H9-OADC-PANTA) é usado para amostras de escarro e controles negativos; use 7H9-OADC sem PANTA de controlos positivos e para a preparação de solução antibiótica </li></ol></li><li> Antibiótico soluções de trabalho <ol><li> 1. Veja a Figura 1 para as etapas para tornar a solução antibiótica trabalhando em uma placa de 24 poços não utilizados Nota: Para obter resultados precisos de suscetibilidade, as concentrações finais de antibióticos são críticos. O procedimento a seguir é adequado para laboratories equipado com micropipetas. Se micropipetas não estão disponíveis, seringas de tuberculina pode ser usado com uma série de diluições diferentes descritos no Guia do Usuário Apêndice 3 a modsperu.org Nota: Não volte a congelar ou re-utilização de trabalho antibióticos ou soluções de ações como a atividade das drogas podem ser perdidos Descartar todas as soluções não utilizado antibiótico no final do dia de processamento Figura 1.. Tornando as soluções de antibióticos de trabalho (de Guia do Usuário no modsperu.org) </li></ol></li></ol></li><li> Amostra de escarro e placa de preparação <ol><li> Descontaminação <ol><li> 2ml lugar de amostra de escarro em um tubo de centrífuga de 15ml (se for inferior, compõem a 2ml com tampão fosfato; se mais, use apenas 2ml) </li><li> Adicionar 2 ml de solução NaOH-NALC </li><li> Tubo de tampa bem e vortex por 20 segundos; inverter tubo para garantir contatos NaOH-NALC solução a superfície interior do tubo inteiro e tampa </li><li> Deixe repousar por um mínimo de 15 minutos - pode prolongar por alguns minutos se a amostra é particularmente viscoso. Para evitar o excesso de tratamento, não deve exceder 20 minutos </li><li> Encha o tubo de 14ml com tampão fosfato (pH 6,8) para neutralizar alcalinos e encerrar o processo de descontaminação, e misture bem, vire o tubo 4 vezes </li><li> Centrifugar a 3000 g por 15 minutos (ver Apêndice 2 no Guia do Usuário no modsperu.org para a equação de rotações por minuto necessário para atingir 3000 g) </li><li> Deitar fora o sobrenadante cuidadosamente em um recipiente de resíduos líquidos com hipoclorito de sódio 10% ou outro desinfetante adequado e manter o pellet </li></ol></li><li> Preparação da suspensão amostra final e backup <ol><li> Utilizando-7H9-OADC PANTA (a partir do tubo contendo 5.1ml), ressuspender o sedimento em amostra de um volume total de 2ml no tubo de ensaio com uma pipeta Pasteur, misture bem </li><li> Retire 1ml de suspensão da amostra e armazenar em um tubo de microcentrífuga de 2-8 ° C como um backup </li><li> Adicione o segundo 1ml de suspensão de amostra para o tubo com os restantes 7H9-OADC-PANTA; misture bem. Esta é a solução da amostra final pronto para revestimento </li></ol></li><li> Colocando suspensões amostra em 24 poços da placa <ol><li> 900μl lugar da suspensão amostra final em cada um dos quatro poços de uma coluna na placa de 24 poços </li><li> Repita com amostras adicionais até que todas as colunas da placa, com exceção da coluna 3, são preenchidos (ou até que todas as amostras são banhados) </li><li> 900μl lugar de 7H9-OADC meio sem amostra na 4 poços da coluna 3 de cada placa de amostra (negativo controles internos) </li></ol></li><li> Adição de antibióticos para amostras <ol><li> Com uma pipeta multi-canal, preencha cuidadosamente quatro pontas com 100μl dos poços com 7H9-OADC e antibiótico soluções de trabalho (Coluna 2 na diluição de antibióticos placa-ver Figura 1) </li><li> Adicione o alíquotas 100μl para a coluna 1 poços com soluções amostra 900μl sem tocar placa ou amostra </li><li> Repita até que todas as colunas receberam o adicional de 100μl médio (livre de drogas poços) ou soluções de antibiótico (incluindo coluna de controle negativo 3) </li><li> Feche a placa com a sua tampa e coloque em um saco de polietileno lacrado (Ziplock) e selo (saco não for aberto novamente a partir deste ponto) </li><li> Incubar a 37 ° C (CO 2 de enriquecimento não é necessário) </li></ol></li></ol></li><li> Controle de qualidade <ol><li> Controles negativos são executados em cada placa. A presença de qualquer crescimento em qualquer um dos poços na coluna de controle negativo indica a contaminação cruzada, portanto, toda a placa deve ser descartado e as amostras re-plated. </li><li> Os controlos positivos são executados em uma placa separada no final do dia. Uma cepa totalmente drogas suscetíveis é executado em uma coluna e uma cepa resistente à INH e RIF é executado em outra coluna. Se há preocupação sobre a execução de uma cepa MDR, tanto a tensão um monoresistant INH e RIF monoresistant uma cepa pode ser executado no lugar das cepas sensíveis e MDR. Todos os controles positivos deve ter crescimento nos poços livre de drogas para demonstrar que o crescimento apoio da mídia. Para demonstrar que as concentrações da droga estão corretas, a cepa suscetível não deve crescer no INH ou poços RIF, mas a cepa MDR deve crescer também crescer no INH e RIF poços. </li></ol></li><li> Leitura da placa <ol><li> Com o dia do chapeamento como &quot;dia 0&quot;, a leitura da placa começa no dia 5, e se negativo no dia 5 de leitura é feito a cada dia (ou dias alternados, dependendo da carga de trabalho) até o dia 14 e depois a cada 2-3 dias a partir de dia 15 -21. Placas são examinadas em ummicroscópio de luz invertida, com o objetivo de 10x </li><li> A cultura positiva é aquela em que há duas ou mais unidades formadoras de colônia (&gt; 2 CFU) em AMBAS as livre de drogas poços. Micobactérias de crescimento no início se parece com pequenas vírgulas curvas ou espirais (dia 09/05). Formação de colônias geralmente progride para &quot;cordas&quot; ou &quot;emaranhados&quot; (ver imagem na biblioteca modsperu.org) </li><li> No dia em que uma cultura é positiva na 2 livre de drogas poços, os poços de drogas que contêm deve ser lido. Qualquer crescimento na presença de uma droga indica resistência a essa droga. Nota: Se a leitura dos poços de drogas que contêm é feito&gt; uma semana depois de uma cultura positiva é observado nos poços livre de drogas, isso não pode representar a resistência como break-through crescimento é visto ocasionalmente </li><li> As amostras que não são positivos por Dia 21 são consideradas culturas negativas </li><li> Nebulosidade dos poços é resultado de crescimento excessivo de contaminação, enquanto que o crescimento de micobactérias não resulta na nebulosidade </li><li> Após a conclusão de 21 dias as culturas podem ser descartados. Culturas permanecem em seus sacos fechados e são colocados em sacos de autoclave e autoclavados a 121-124 ° C durante 45-60 minutos </li></ol></li></ol>

<ol><li>Arias, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+the+microscopic-observation+drug-susceptibility+assay+for+detection+of+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of the microscopic-observation drug-susceptibility assay for detection of tuberculosis.</a> Clin Infect Dis. 44, 674-674 (2007).</li>
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<li>Moore, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+observation+drug+susceptibility+assay%2C+a+rapid%2C+reliable+diagnostic+test+for+multidrug-resistant+tuberculosis+suitable+for+use+in+resource-poor+settings%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Microscopic observation drug susceptibility assay, a rapid, reliable diagnostic test for multidrug-resistant tuberculosis suitable for use in resource-poor settings.</a> J Clin Microbiol. 42, 4432-4432 (2004).</li>
<li>Moore, D. A., Roper, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+smear-negative+tuberculosis+in+people+with+HIV%2FAIDS%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of smear-negative tuberculosis in people with HIV/AIDS.</a> Lancet. 370, 1033-1033 (2007).</li>
<li>Oberhelman, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+recovery+of+Mycobacterium+tuberculosis+from+children+using+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+method%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Improved recovery of Mycobacterium tuberculosis from children using the microscopic observation drug susceptibility method.</a> Pediatrics. 118, e100-e100 (2006).</li>
<li>Palomino, J. C., Martin, A., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MODS+assay+for+the+diagnosis+of+TB%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">MODS assay for the diagnosis of TB.</a> N Engl J Med. 356, 188-189 (2007).</li>
<li>Park, W. G., Bishai, W. R., Chaisson, R. E., Dorman, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+the+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+in+drug+susceptibility+testing+for+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in drug susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 40, 4750-4750 (2002).</li>
<li>Shiferaw, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+microscopic+observation+drug+susceptibility+assay+for+detection+of+multidrug-resistant+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of microscopic observation drug susceptibility assay for detection of multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis.</a> J Clin Microbiol. 45, 1093-1093 (2007).</li>
<li>Tovar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+diagnosis+of+pleural+tuberculosis+using+the+microscopic-+observation+drug-susceptibility+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Improved diagnosis of pleural tuberculosis using the microscopic- observation drug-susceptibility technique.</a> Clin Infect Dis. 46, 909-909 (2008).</li>
<li>Vargas, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+sputum-scarce+HIV-associated+pulmonary+tuberculosis+in+Lima%2C+Peru%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of sputum-scarce HIV-associated pulmonary tuberculosis in Lima, Peru.</a> Lancet. 365, 150-150 (2005).</li>
</ol>

O ensaio MODS é destinado a ambientes de recursos limitados. Pela primeira vez, MODS traz a capacidade para a detecção rápida de cultura líquido de tuberculose multirresistente e tuberculose resistente a ambientes de recursos limitados em pouco menos de 3 dólares por teste. MODS é um não-proprietário, a metodologia iterativa, ea comunidade MODS está sempre interessada em melhorias que outros laboratórios têm conseguido fazer. Uma preocupação recorrente é a biossegurança da cultura de mídia líquida da tuberculose, porque os líquidos ...

<table><tbody><tr><td>Geladeira/congelador</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para armazenar caldo pré-preparado e estoques de antibióticos</td></tr><tr><td>Vórtex</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para auxiliar na descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>Centrífuga</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para concentração de escarro; capaz de atingir 3000 g; n&amp;#8211;o precisa ser refrigerada, mas DEVE ser biossegura (os baldes podem ser vedados)</td></tr><tr><td>Incubadora (37 graus C)</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para cultura; não precisa ser enriquecida com CO2</td></tr><tr><td>Microscópio óptico invertido</td><td>Microscópio</td><td></td><td></td><td>para leitura das placas MODS</td></tr><tr><td>Autoclave</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para esterilizar meios, PBS e placas usadas</td></tr><tr><td>Balança</td><td>Equipamento</td><td></td><td></td><td>para pesar isoniazida, rifampicina e NALC</td></tr><tr><td>Caldo Middlebrook 7H9 (Difco)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0713-17-9</td><td>500 g/frasco; base do meio de cultura</td></tr><tr><td>Casitone (digestão pancreática de caseína)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0259&amp;#8208;17&amp;#8208;9</td><td>500 g/frasco; base do meio de cultura</td></tr><tr><td>Glicerol (glicerina) liofilizado</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G&amp;#8208;33&amp;#8208;500</td><td>500 ml/frasco; base do meio de cultura</td></tr><tr><td>PANTA (mistura de antibióticos liofilizada BD)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>B4345114</td><td>6 frascos/embalagem; suplemento antibiótico para meio</td></tr><tr><td>OADC (enriquecimento Middlebrook OADC BD)</td><td>Reagente</td><td>Fisher Scientific</td><td>B11886</td><td>10 x 20 ml/embalagem; suplemento nutricional para meio</td></tr><tr><td>Dissulfóxido de dimetila (Hibri-Max)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D-2650</td><td>100 ml/frasco; para preparar estoque de rifampicina</td></tr><tr><td>Estoques de antibióticos: isoniazida</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-3377</td><td>50 g/frasco; teste direto de suscetibilidade</td></tr><tr><td>Estoques de antibióticos: rifampicina</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R-3501</td><td>1 g/frasco; teste direto de suscetibilidade</td></tr><tr><td>Hidróxido de sódio (em pellets)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>221465</td><td>500 g/frasco; descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>Citrato de sódio (sal trissódico di-hidratado)</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-4641</td><td>500 g/frasco; descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>N-acetil-L-cisteína</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A-7250</td><td>50 g/frasco; descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>Fosfato monobásico de potássio. KH2PO4</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P0662</td><td>500 g/frasco; descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>Fosfato dibásico de sódio, anidro. Na2HPO4</td><td>Reagente</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0876</td><td>500 g/frasco; descontaminação de escarro</td></tr><tr><td>Hipoclorito de sódio</td><td>Reagente</td><td>água sanitária doméstica</td><td></td><td>para descarte de resíduos contaminados</td></tr><tr><td>Tubos de centrífuga de 15 ml (polipropileno 15 ml Falcon 35&amp;#8208;2096)</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>14&amp;#8208;959&amp;#8208;49B</td><td>500 unidades/caixa; para descontaminação e concentração de escarro</td></tr><tr><td>Placas de 24 poços (Placas de tecido 24 poços BD Falcon 35&amp;#8208;3047)</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-772-1</td><td>50 placas/caixa; para cultura e leitura</td></tr><tr><td>Sacos de polietileno com fechamento hermético 6 x 6 &amp;#8220; (tipo ziplock)</td><td>Descartável</td><td></td><td></td><td>para biossegurança, contendo a placa de 24 poços</td></tr><tr><td>Tubos de vidro com tampa (16 x 100 mm e 18 x 145 mm)</td><td>Descartável</td><td>VWR international</td><td>47729-583</td><td>500 tubos/caixa; para armazenar alíquotas de caldo preparado</td></tr><tr><td>Tubos de microcentrífuga com tampa rosqueável (1,5 ml)</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>05&amp;#8208;669&amp;#8208;22</td><td>1000 unidades/caixa; para armazenar alíquotas de estoques de antibióticos</td></tr><tr><td>Filtros de 0,22&amp;mu;m (para solventes aquosos) Filtro de seringa Millex azul</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGL 025 OS</td><td>50 unidades/caixa; para filtrar estoques de antibióticos</td></tr><tr><td>Filtros de 0,22&amp;mu;m (para solventes orgânicos) Filtro de seringa Millex amarelo</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>SLGV 033 RS</td><td>50 unidades/caixa; para filtrar estoques de antibióticos</td></tr><tr><td>Pipetas Pasteur descartáveis de vidro borossilicato 9&amp;#8243;</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>13&amp;#8208;678&amp;#8208;20C</td><td>720 unidades/caixa; para misturar PANTA com a mistura de meio</td></tr><tr><td>Pontas com barreira contra aerossóis 1000&amp;#8208;1300&amp;mu;l</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>02&amp;#8208;707&amp;#8208;51</td><td>1000 unidades/pacote; para dispensar meio na placa</td></tr><tr><td>USA Scientific Tips One pontas amarelas 1&amp;#8208;200&amp;mu;l</td><td>Descartável</td><td>Fisher Scientific</td><td>1111&amp;#8208;0006</td><td>1000 pontas/saco; para diluir estoques de antibióticos</td></tr></tbody></table>

o método mods para o diagnóstico da tuberculose e da tuberculose resistente a múltiplas drogas

The MODS method for diagnosis of tuberculosis and multidrug resistant tuberculosis

Pacientes com tuberculose pulmonar ativa (TB) 15/10 infectar outras pessoas por ano, tornando o diagnóstico de TB ativa essencial para tanto a cura do paciente e prevenção de novas infecções. Além disso, o surgimento da tuberculose resistente a múltiplas drogas (TBMR) significa que a detecção da resistência às drogas é necessário para impedir a disseminação de cepas resistentes. A observação microscópica de drogas susceptibilidade-ensaio (MODS) é uma low-cost, low-tech ferramenta de alto desempenho para detecção de TB e da TBMR. O ensaio MODS é baseada em três princípios: 1) Mycobacterium tuberculosis (MTB) cresce mais rapidamente em meios líquidos do que em meios sólidos 2) o crescimento MTB microscópicas podem ser detectadas anteriormente em meios líquidos de esperar que o aspecto macroscópico das colônias em meios sólidos e que o crescimento é característica de MTB, permitindo que ele seja distinguido de contaminação micobactérias ou fungos ou bactérias atípicas 3) as drogas isoniazida e rifampicina pode ser incorporada no ensaio MODS para permitir a detecção direta simultânea de TBMR, eliminando a necessidade de subcultura para executar um teste de sensibilidade indireto da droga. Concorrentes diagnósticos atuais são dificultados pela baixa sensibilidade com baciloscopia, longos atrasos até o diagnóstico com a cultura meios sólidos, com custos proibitivos de métodos existentes líquido meios de cultura, ea necessidade de fazer subcultura para testes indiretos de drogas susceptibilidade para detectar TBMR. Em contraste, o não-proprietário método MODS tem uma alta sensibilidade para TB e da TBMR, é um método de cultura relativamente rápido, oferece testes de sensibilidade simultânea de drogas para TBMR, e é acessível a locais de recursos limitados em pouco menos de 3 dólares para os testes de TB e TBMR.

A observação microscópica de drogas susceptibilidade-ensaio (MODS) é uma low-cost, low-tech ferramenta de alto desempenho para detecção de tuberculose (TB) e tuberculose multirresistente (TBMR). Este vídeo descreve o MODS líquido método de cultura de mídia.

O método MODS para o diagnóstico da tuberculose e da tuberculose resistente a múltiplas drogas

Pacientes com tuberculose (TB) pulmonar ativa infectam de 10 a 15 outras pessoas por ano, tornando o diagnóstico da TB ativa essencial tanto para a cura do paciente quanto para...

Para cada três pessoas no mundo, uma está infectada com tuberculose. Diagnosticar a tuberculose ativa previne novas infecções, porque pacientes com tuberculose ativa infectarão entre 10 e 15 outras pessoas por ano até o momento em que forem tratados ou venham a óbito. MODS é um acrônimo que utilizamos para evitar a necessidade de dizer observação microscópica, teste de suscetibilidade a medicamentos, e o motivo pelo qual é chamado assim se tornará evidente à medida que a metodologia for explicada.No breve vídeo, descreveremos a metodologia MODS para o diagnóstico rápido e de baixo custo da tuberculose e da tuberculose multirresistente. O vídeo apresentará a metodologia passo a passo. Discutiremos as implicações de biossegurança do trabalho com culturas líquidas e também explicaremos algumas questões importantes de controle de qualidade necessárias para o uso desta metodologia.O ensaio MODS foi desenvolvido na Universidade Kayana, em Lima, Peru, no laboratório de Bob Gilman. Após observações inicialmente feitas por Loose Cavi, LOOSE tentava identificar métodos rápidos para detectar Mycobacterium tuberculosis em culturas utilizando indicadores colorimétricos.Mas ela observou que a ob

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JoVE Journal

Biology

Biologia

Testes de susceptibilidade antimicrobiana de Mycobacterium tuberculosis é um desafio, mas fundamental para o atendimento ao paciente. Este formato de placa de microtitulação oferece testes de 12 drogas antimicobacterianos e fornece concentração inibitória mínima (MIC) valores, o que ajudará no tratamento adequado.

Teste de susceptibilidade antimicrobiana do complexo Mycobacterium tuberculosis da Droga primeira e segunda linha de diluição em caldo em um formato de placa de microtitulação

O teste Xpert MTB/RIF integra descontaminação da amostra, operação sem contato manual, processamento da amostra em tempo real e PCR hemi-aninhada ultra-sensível para a detecção simultânea de Mycobacterium tuberculosis e resistência à rifampicina, seja em escarro expelido ou em sedimentos de escarro concentrados, em aproximadamente duas horas. O teste é padronizado e requer apenas infraestrutura laboratorial moderada e treinamento.

Diagnóstico da tuberculose pulmonar com o teste Xpert MTB / RIF

Um microarray amplificação combina assimétrica PCR amplificação e hibridização microarray em uma única câmara, que simplifica significativamente o fluxo de trabalho microarray para o usuário final. Simplificar o fluxo de trabalho microarray é um primeiro passo necessário para a criação de diagnósticos à base de microarray que podem ser rotineiramente usados ​​em ambientes com recursos mais baixos.

Demonstrando um multi-resistente<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Ampliação Microarray

Nós desenvolvemos um sistema de rastreio de alto rendimento modular para descobrir novos compostos contra o Mycobacterium tuberculosis, direccionamento intracelular e em caldo de crescimento de bactérias, bem como a citotoxicidade contra a célula hospedeira de mamífero.

Sistema de Eficácia e citotoxicidade Rastreio de inibidores Segmentação intracelular<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

Apresentamos um método otimizado para extração de DNA de escarro descontaminado usando um método de extração baseado em matriz combinado com uma purificação de esferas magnéticas para sequenciamento de próxima geração direcionado a jusante de Mycobacterium tuberculosis.

Extração de DNA baseada em matriz para sequenciamento de próxima geração direcionado em amostras de escarro descontaminadas

Aqui, apresentamos um protocolo para identificar potenciais candidatos a medicamentos antituberculosos por meio de triagem fenotípica, abrangendo a síntese química de um composto de 4-aminoquinolina, a determinação de sua concentração inibitória mínima contra Mycobacterium tuberculosis e a avaliação de sua citotoxicidade em linhagens celulares de mamíferos.

Identificação de Potenciais Candidatos Anti-TB: Um Guia Passo a Passo para Síntese, Determinação de CMI e Avaliação de Citotoxicidade em Células de Mamíferos

Mosquitos Anopheles stephensi são vetores da malária e da Índia que habitam em toda a Ásia. Este vídeo demonstra a técnica para a realização de microinjeções desta espécie com transgenes que conferem resistência à malária para o mosquito. Grande parte da metodologia demonstrada neste vídeo é aplicável às técnicas de microinjeção de outras espécies de mosquito.

Uma injeção de. Embriões stephensi para gerar malária resistente a mosquitos

Neste protocolo que demonstram a expressão, solubilização e purificação de uma proteína de membrana recombinantemente expressas, MexB, como um complexo proteína solúvel detergente. MexB é um transportador de membrana multirresistência do oportunista Pseudomonas aeruginosa bacteriana patogênica.

Expressão, solubilização, detergente e Purificação de um transportador de membrana, as proteínas MexB resistência a múltiplas drogas

Técnica de cultura todo embrião de rato permite-nos cultura e embriões de...

O método de cultura de embriões de roedores inteiro usando o Rotator do tipo Sistema de Cultura Garrafa

Nós fornecer um protocolo de genotipagem custo-eficácia e rápida molecular que emprega iniciadores variedade-PCR específicos que as diferenças de sequência alvo de ADN dentro da região espaçadora cloroplasto trnL-F para diferenciar entre as variedades...

Um método de genotipagem baseados em PCR para distinguir entre variedades do tipo selvagem e Ornamental de Imperata cylindrica</em

Aprenda o método MODS para diagnóstico rápido de tuberculose e tuberculose multirresistente usando cultura líquida de baixo custo. Esta técnica permite detectar Mycobacterium tuberculosis em ambientes com recursos limitados.

O método MODS para o diagnóstico da tuberculose e da tuberculose resistente a múltiplas drogas

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